CD138抗体联合Mum1抗体在检测浆细胞中的应用的制作方法

cd138抗体联合mum1抗体在检测浆细胞中的应用
技术领域
1.本发明涉及医学诊断技术领域，具体而言，涉及cd138抗体联合mum1抗体在检测浆细胞中的应用。


背景技术：

2.慢性子宫内膜炎(chronic endometritis，ce)是一种持续而轻微的炎症，其特征是浆细胞浸润在子宫内膜间质区。从流行病学上，慢性子宫内膜炎与iud、分娩史、多胎和非典型子宫出血等因素有关。ce病因尚不明确，有学者认为宫腔内病原微生物与子宫内膜免疫细胞相互作用是导致ce的主要原因。传统上，ce的临床意义在临床实践中并未受到关注，因为它通常是无症状的或仅表现出细微的症状，例如子宫异常出血，骨盆疼痛，性交困难和白带增多等。但是最近的研究表明，ce对女性生育能力有不利影响，与女性不孕症密切相关，例如ce增加了ivf后反复种植失败(rif)、不明原因复发性流产等，这使ce的诊断在不孕症中成了越来越重要一个病因。ce的诊断主要依靠病理医生对子宫内膜刮宫或活检标本的镜下判断来完成。但目前存在两大瓶颈：1.如何准确识别ce的必要元素浆细胞。2.多少数量浆细胞能判断为ce。在临床实际工作中，病理医师单纯通过he形态来检测子宫内膜活检标本中浆细胞，容易漏诊或者误诊，并且诊断ce一致性不好。
3.鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供cd138抗体联合mum1抗体在检测浆细胞中的应用。本发明提供将cd138抗体和mum1抗体联合通过免疫组化双染色用于对浆细胞的染色，实现对浆细胞的准确标记和识别，提高以浆细胞为标志物的相关疾病包括慢性子宫内膜炎的诊断或辅助诊断的准确率。
5.本发明是这样实现的：
6.病理学诊断技术发展至今，已进入到传统解剖、组织形态学、免疫组化以及原位杂交等分子技术相互补充、综合应用的新阶段。免疫组化技术在我国开展已有三十多年，发挥着承前启后的重要作用，随着技术方法的不断充实和改进，新技术也逐渐增加。免疫组化单一染色方法由于提供组织信息有限，且着色在2张或多张切片上，位置分离，加大了病理医师对结果判读的难度。双染技术可以弥补单一染色的不足，该技术可在同一切片上同时或先后进行两种不同染色，如免疫组化双染、免疫组化与特殊染色、免疫组化与原位杂交等。
7.免疫组化双重染色技术是利用免疫组化方法在同一张组织切片上同时显示两种或者两种以上的抗原，以发现其定位，形态和功能上的相互关系。它是一项多环节、受多因素影响的实验技术，该技术可以了解同一细胞内抗原之间的相互关系、不同细胞、组织与相关抗原的相互关系以及相关抗原在细胞中的合成、转运和代谢情况；免疫组化双染技术可将形态观察与功能分析结合起来；其原理是利用抗原和抗体之间特异性的结合以及特殊的标记技术，对细胞和组织内的特定抗原定性、定位检测。
8.cd138是识别浆细胞比较特异的蛋白分子，其主要定位于细胞膜上，但偶而也会在上皮细胞，nk细胞和t细胞亚型中出现阳性表达。子宫内膜腺体和间质中偶尔出现着色现象，特异性效果并不理想。非浆细胞染色的出现，给病理工作者对浆细胞的识别以及随后的临床诊断和治疗带来一定误差。因此，如何更加准确地在丰富的子宫内膜腺体和间质细胞中判断浆细胞，给本领域带来了严峻挑战。
9.mum1，也称为干扰素调节因子4，是由位于人类6号染色体上irf4基因所编码的一种转录因子。mum1/irf4是影响淋巴细胞活化形成具有抗原活性和分泌ig浆细胞的必要因子，其主要定位于细胞核。
10.本发明首次提出应用cd138抗体联合和mum1抗体免疫组化双染技术用于浆细胞的标记和识别，结果显示通过对cd138和mum1两个分子的染色，可以更加准确地、快速地标记浆细胞，从而更加精准的诊断以浆细胞为主要标志物的疾病例如慢性子宫内膜炎。
11.基于此，一方面，本发明提供抗体组合在制备用于检测浆细胞的免疫组化染色试剂盒中的应用，所述抗体组合包括cd138抗体和mum1抗体。
12.本发明首次提出使用cd138抗体联合mum1抗体进行免疫组化双染技术标记浆细胞，cd138细胞膜和胞浆阳性，mum1细胞核阳性，二者双阳性可以清晰识别出浆细胞。这不仅提高标记浆细胞的特异性，而且降低了病理医师的判读难度。因此，cd138抗体和mum1抗体的抗体组合具有了新的用途之一，制备用于检测浆细胞的免疫组化染色试剂盒，提高对浆细胞的检测准确性。
13.需要说明的是，cd138抗体和mum1抗体可以通过市场购买得到，本领域技术人员也可以根据本领域常规技术制备，无论使用何种抗体，其均属于本发明的保护范围。
14.第二方面，本发明提供抗体组合在制备以浆细胞为标志物的相关疾病的诊断或辅助诊断试剂盒中的应用，所述抗体组合包括cd138抗体和mum1抗体，所述诊断试剂盒通过对样品进行免疫组化染色实现诊断或辅助诊断目的。
15.采用cd138抗体和mum1抗体的免疫组化双染色技术可以提高对浆细胞的识别度，降低了病理医师的判读难度，进而可以提高以浆细胞为标志物的相关疾病的诊断或辅助诊断的准确率。cd138抗体和mum1抗体的抗体组合具有了新的用途之二，制备用于以浆细胞为标志物的相关疾病的诊断或辅助诊断试剂盒，提高对相关疾病的诊断准确率。
16.可选地，在本发明的一些实施方案中，以浆细胞为标志物的相关疾病选自慢性子宫内膜炎。
17.本领域技术人员基于本领域的常规知识，可以cd138抗体联合mum1抗体的免疫组化双染色技术任何以浆细胞为标志物的疾病的诊断，包括但不限于慢性子宫内膜炎。
18.可选地，在本发明的一些实施方案中，所述样品为由来自待诊断患者的目标组织制成的组织切片。
19.目标组织是本领域技术人员根据需要诊断的疾病类型合理确定的，例如对慢性子宫内膜炎进行诊断，则目标组织可以是子宫内膜。
20.第三方面，本发明提供一种疾病的诊断或辅助诊断试剂盒，所述疾病的标志物包括浆细胞，所述试剂盒包括cd138抗体和mum1抗体；所述诊断试剂盒通过对样品进行免疫组化染色实现诊断或辅助诊断目的。
21.可选地，在本发明的一些实施方案中，所述疾病选自慢性子宫内膜炎。
22.可选地，在本发明的一些实施方案中，所述样品为由来自待诊断患者的目标组织制成的组织切片。
23.可选地，在本发明的一些实施方案中，所述目标组织为子宫内膜。
24.第四方面，本发明提供一种浆细胞的检测方法，所述方法不以疾病的诊断为目的，其包括：使用cd138抗体和mum1抗体对样品进行免疫组化染色。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
26.图1：单独使用cd138抗体免疫组织化学染色子宫内膜组织切片显示，部分子宫内膜腺上皮细胞也可着色。
27.图2：单独使用mum
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1抗体免疫组织化学染色子宫内膜组织切片显示，子宫内膜中浆细胞及部分淋巴细胞均可着色。
28.图3：采用cd138和mum
‑
1抗体免疫组织化学染色子宫内膜组织切片显示，细胞核染成红色并且细胞浆被染成棕黄色被明确判读为浆细胞
29.图4：采用cd138和mum
‑
1抗体免疫组织化学染色子宫内膜组织切片显示，子宫内膜中仅被染成棕黄色的细胞为子宫内膜腺上皮细胞。
30.图5：采用cd138和mum
‑
1抗体免疫组织化学染色子宫内膜组织切片显示，两个细胞细胞核被染成了红色，同时胞浆被染成了棕色，可明确判读为浆细胞；而另一个细胞仅细胞核被染成了红色，应被判读为淋巴细胞。
具体实施方式
31.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
32.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
33.实施例1
34.采用cd138抗体和mum
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1抗体进行单重或双重染色的效果对比。
35.慢性子宫内膜炎以整张切片浆细胞数量≥10个、或热点区(一个高倍视野内)浆细胞数量≥5个为标准，通过直接用组织切片he染色观察浆细胞非常困难，因为在形态上浆细胞较难与子宫内膜间质细胞及淋巴细胞鉴别。
36.现有技术通常采用cd138或mum
‑
1抗体对子宫内膜中浆细胞进行染色，边缘判断是否存在浆细胞及浆细胞的量的多少。但是，cd138不仅可以染色浆细胞，还可以对部分子宫内腺上皮进行染色(如图1)，所以仅仅依靠cd138染色判断浆细胞，可能会高估浆细胞的存在。
37.同样，mum
‑
1抗体不但可以染色浆细胞，而且可以染色部分淋巴细胞(如图2)，因
此，仅依靠mum
‑
1抗体染色判断浆细胞，也会高估浆细胞的存在。
38.cd138抗体通常不会对淋巴细胞染色，mum
‑
1抗体通常不会与子宫内膜腺上皮着色，两者均是浆细胞较好的标记物，且染色部位不同(cd138浆细胞胞浆染色，mum
‑
1浆细胞胞核染色)，所以，联合cd138(浆细胞胞浆染成棕黄色)和mum
‑
1(浆细胞核染成红色)抗体免疫组化染色对判断子宫内膜中浆细胞具有更好的特异性(如图3，细胞核染成红色并且细胞浆被染成棕黄色被明确为浆细胞)。当联合cd138和mum
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1抗体染色，仅被染成棕黄色的细胞为子宫内膜腺上皮(如图4)，而非浆细胞；仅被染成红色的细胞为淋巴细胞，而非浆细胞(图5)。
39.与单独cd138抗体或mum
‑
1抗体检测子宫内膜中的浆细胞的方法相比较，联合cd138和mum
‑
1抗体，免疫组化法检测子宫内膜中浆细胞的量更具特异性，能够避免部分非慢性子宫内膜炎患者过度诊断和治疗。
40.收集80例临床怀疑为慢性子宫内膜炎患者子宫内膜标本，进行mum
‑
1单独染色、cd138单独染色、联合cd138和mum
‑
1抗体染色，子宫内膜炎阳性率分别为55.00％、46.25％、33.75％。结果显示，联合cd138和mum
‑
1抗体染色较mum
‑
1单独染色或cd138单独染色，更具有特异性，避免将非子宫内膜炎患者过度诊断和过度治疗。
41.本实施例中，采用leica bond
‑
max全自动免疫组仪进行cd138和mum1双重染色或单独染色，操作步骤本领域的常规知识，参考仪器说明书即可进行。抗体试剂可通过市场购买：cd138抗体试剂(免疫组织化学)购自无锡傲锐东源生物科技有限公司(产品编号：za
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0584),mum1抗体试剂(免疫组织化学)购自无锡傲锐东源生物科技有限公司(产品编号：za
‑
0583)。
42.综上，免疫组化双重染色技术是利用免疫组化方法在同一张组织切片上同时显示两种或者两种以上的抗原，以发现其定位，形态和功能上的相互关系。本发明实施例结合cd138和mum1两个抗体特点，实施例中采用了红色标记mum1抗体，主要定位于细胞核，棕黄色cd138抗体，主要定位于细胞膜，这种双染方法可以清晰勾勒出细胞膜和细胞核，更加精确的识别子宫内膜中浆细胞，与cd138免疫组化单染技术相比，cd138/mum1免疫组化双染技术优势相对明显，不仅可以提高标记浆细胞的特异性，而且能降低病理医师的判读难度；在安全上，二者都是在组织切片上进行免疫组织化学染色，安全可靠。
43.本发明实施例的方法有多个优点：1.两种抗体共同勾勒浆细胞，更加准确。2.用一张玻片同时进行两个免疫组化，避免了因修切片造成的两个玻片个面上的细胞不一样造成的不精确性，也避免了病理医生反复核对两张玻片造成的繁重劳动。3采用cd38单染的方法，需要准备两种涂胶白片进行免疫组化染色；采用cd138/mum1双染只需要一张涂胶白片即可。从这个方面来讲，后者可以省一定的耗材。
44.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。