一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂及其使用方法与流程

1.本发明涉及属于甲壳动物养殖技术领域，具体涉及一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂及其使用方法。


背景技术：

2.现有研究表明，甲壳动物和其它无脊椎动物一样，缺乏脊椎动物所具有的特异性免疫功能，其免疫反应依赖于非特异性免疫机制。非特异性免疫能力、抗氧化能力及机体抗病能力是衡量甲壳动物非特异性免疫能力的重要指标。中华绒螯蟹具有非特异性免疫能力已经被诸多学者所证明，这为非特异性免疫制剂在中华绒螯蟹中发挥作用提供了生理基础和条件。非特异性免疫制剂种类包括：微生物来源的多糖类制剂、动植物来源中草药制剂、营养因子类抗应激物质、人工合成制剂和生物活性因子类物质等五大类。中华绒螯蟹免疫制剂主要通过增强非特异性免疫力及机体抗应激能力而发挥作用，如增加肝胰腺中超氧化物歧化酶(sod)、溶菌酶(lzm)、过氧化氢酶(cat)活性，及对应激因子的抗力等。
3.目前，关于单一种类非特异性免疫物质的功能研究及应用技术比较多，研究及应用结果主要为：(1)微生物源的多糖类(包括：葡聚糖、壳聚糖和脂多糖)对水生动物免疫能力的发挥具有重要调节作用，可以显著提高中华绒螯蟹、三疣梭子蟹、斑节对虾、凡纳滨对虾的血淋巴吞噬活性、血清溶菌活力以及酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、血清酚氧化酶和超氧化物歧化酶活力，从而对机体免疫功能产生促进作用；然而，微生物多糖不具备增加机体抗应激能力的作用。(2)中草药及其提取物对鲤鱼、建鲤、异育银鲫的非特异性免疫力具有明显的提高作用，如溶菌酶活性和白细胞功能，同时具有明显的抑菌作用，其有效成分长时间使用不会导致抗药性或药物中残留物的积累，对人或其它动物有益且无害，显示其在水生动物养殖中作为免疫增强剂应用的潜力；然而，抗应激作用不明显。(3)营养因子类抗应激物质(包括维生素c、维生素e、维生素k、维生素a等)可以显著提高养殖动物的抗应激能力，增强鱼体抗病力，维持养殖动物正常的代谢功能和最佳健康状态；但是其非特性免疫作用不明显。因此，非特异性免疫复合制剂可能成为替代传统抗生素的生物活性物质，但目前非特异性免疫复合制剂对养殖中华绒螯蟹免疫反应的影响相关研究仍比较缺乏的，将微生物多糖、中草药、抗应激物质等多种非特异性免疫物质作为原料进行复合，所制得的非特异免疫复合制剂却往往无法综合发挥各原料组分的优点，应用效果往往也较为有限，且不同的组分和配比制备出的制备出来的复合制剂差别很大。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于克服上述技术中的不足之处，提供一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂(以下简称为“免疫制剂”)及其使用方法，可有效提高中华绒螯蟹的免疫力和养殖成活率。
5.为实现上述目的本发明所采用的实施方式如下：
6.一种用于养殖中华绒螯蟹的非特异性免疫制剂，其特征在于每一千克所述免疫制
剂中包含下述重量的有效成分：β
‑
葡聚糖0.02kg
‑
0.2kg、三黄粉0.06kg
‑
0.5kg、维生素c磷酸酯0.05kg
‑
0.3kg、肽聚糖0.05kg
‑
0.3kg、大蒜素0.01kg
‑
0.1kg。
7.优选地，每一千克所述免疫制剂中包括下述重量的有效成分：β
‑
葡聚糖0.0375kg
‑
0.15kg、三黄粉0.08125kg
‑
0.325kg、维生素c磷酸酯0.05625kg
‑
0.225kg、肽聚糖0.0625kg
‑
0.25kg、大蒜素0.0125kg
‑
0.05kg。
8.进一步地，所述β
‑
葡聚糖、三黄粉、维生素c磷酸酯、肽聚糖及大蒜素均为粒度大于80目的粉剂。
9.进一步地，所述用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂还包括中华绒螯蟹蛋白肽，所述中华绒螯蟹蛋白肽来源于中华绒螯蟹下脚料的酶解产物(由蛋白酶酶解所得)。
10.进一步地，所述中华绒螯蟹蛋白肽的平均分子量为600
‑
1500da。
11.进一步地，每一千克所述免疫制剂中包含重量为0.0225kg
‑
0.05kg的所述中华绒螯蟹蛋白肽。
12.将上述各组分(有效成分)混匀即得本发明的用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂。
13.所述用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂还可采用下述方法制备而成：按照配方准确称量所述免疫制剂的各有效成分，采用粒度大于80目的小麦次粉作为载体，混匀。
14.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂的使用方法，其特征在于具体实施步骤如下：
15.(1)将所述免疫制剂按1:100
‑
400的比例添加到中华绒螯蟹饲料中混匀(指上述免疫制剂的重量与中华绒螯蟹饲料重量的比例为1:100
‑
400)，制成颗粒饲料。
16.(2)在养殖生产过程中，每间隔7天投喂一周上述颗粒饲料，日投饵量与正常饲料相同，直到养殖成商品蟹出池结束；其中，在疾病流行季节，即每年的7月中旬至8月中旬坚持每天投喂含免疫制剂的饲料。
17.优选地，步骤(1)中，将所述免疫制剂按1:200的比例(指免疫制剂重量与中华绒螯蟹饲料重量的比例为1:200)添加到中华绒螯蟹饲料中混匀。
18.本发明的有益效果是：本发明首次提供了一种针对提高中华绒螯蟹非特异性免疫力、抗氧化能力的复合制剂配方及其使用方法，以微生物多糖、中草药、抗应激物质作为原料，科学配伍形成科学配方，克服了传统的甲壳动物非特异免疫制剂功效不明显的缺点；采用饲料添加投喂方式进行实际应用，使用方法简便易操作。室内小水体对比试验、室外池塘对比养殖试验及人工感染试验结果均表明，本发明的复合制剂可以明显提高中华绒螯蟹的成活率、增重率、肝胰腺中总蛋白含量、超氧化物歧化酶(sod)活性和溶菌酶(lzm)活性，同时，可以降低中华绒螯蟹感染副溶血弧菌(病原应激因子)死亡率，提高免疫保护率，使养殖中华绒螯蟹的非特异免疫力、抗应激能力和养殖效果显著提高。
具体实施方式
19.以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：
20.实施例1
21.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂，其特征是每一千克所述免疫制剂中包含下述重量的粉末状有效成分：β
‑
葡聚糖0.075kg、三黄粉0.1625kg、维生素c磷酸酯
0.1125kg、肽聚糖0.125kg、大蒜素0.025kg。即五种原料均为粒度大于80目的粉剂。
22.按照配方准确称量上述各有效成分，采用粒度大于80目的小麦次粉作为载体，按常规混匀，制成本发明的用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂。
23.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂的使用方法，其特征在于具体实施步骤如下：
24.(1)将所述免疫制剂按1:400的比例添加到中华绒螯蟹饲料中混匀，采用常规的颗粒饲料制备方法制成颗粒饲料。
25.(2)在养殖生产过程中，每间隔7天投喂一周上述颗粒饲料，日投饵量与正常饲料相同，直到养殖成商品蟹出池结束；其中，在疾病流行季节，即每年7月中旬至8月中旬坚持每天投喂含免疫制剂的饲料。
26.实施例2
27.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂，其特征是每一千克所述免疫制剂中包含下述重量的有效成分：β
‑
葡聚糖0.075kg、三黄粉0.1625kg、维生素c磷酸酯0.1125kg、肽聚糖0.125kg、大蒜素0.025kg、中华绒螯蟹蛋白肽0.03kg。
28.所述β
‑
葡聚糖、三黄粉、维生素c磷酸酯、肽聚糖及大蒜素均为粒度大于80目的粉剂。
29.所述中华绒螯蟹蛋白肽的平均分子量为600
‑
1500da。
30.按照配方准确称量上述各有效成分，采用粒度大于80目的小麦次粉作为载体，按常规混匀，制成本发明的用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂。
31.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂的使用方法，其特征在于具体实施步骤如下：
32.(1)将所述免疫制剂按1:300的比例添加到中华绒螯蟹饲料中混匀，采用常规的颗粒饲料制备方法制成颗粒饲料。
33.(2)在养殖生产过程中，每间隔7天投喂一周上述颗粒饲料，日投饵量与正常饲料相同，直到养殖成商品蟹出池结束；其中，在疾病流行季节，即每年7月中旬至8月中旬坚持每天投喂含免疫制剂的饲料。
34.实施例3
35.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂，其特征是每一千克所述免疫制剂中包含下述重量的有效成分：β
‑
葡聚糖0.075kg、三黄粉0.1625kg、维生素c磷酸酯0.1125kg、肽聚糖0.125kg、大蒜素0.025kg、中华绒螯蟹蛋白肽0.0225kg。
36.所述β
‑
葡聚糖、三黄粉、维生素c磷酸酯、肽聚糖及大蒜素均为粒度大于80目的粉剂。
37.按照配方准确称量上述各有效成分，采用粒度大于80目的小麦次粉作为载体，按常规混匀，制成本发明的用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂。
38.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂的使用方法，其特征在于具体实施步骤如下：
39.(1)将所述免疫制剂按1:200的比例添加到中华绒螯蟹饲料中混匀，采用常规的颗粒饲料制备方法制成颗粒饲料。
40.(2)在养殖生产过程中，每间隔7天投喂一周上述颗粒饲料，日投饵量与正常饲料
相同，直到养殖成商品蟹出池结束；其中，在疾病流行季节，即每年7月中旬至8月中旬坚持每天投喂含免疫制剂的饲料。
41.实施例4
42.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂，其特征是每一千克所述免疫制剂中包含下述重量的有效成分：β
‑
葡聚糖0.0375kg、三黄粉0.08125kg、维生素c磷酸酯0.05625kg、肽聚糖0.0625kg、大蒜素0.0125kg、中华绒螯蟹蛋白肽0.0225kg。
43.所述β
‑
葡聚糖、三黄粉、维生素c磷酸酯、肽聚糖及大蒜素均为粒度大于80目的粉剂。
44.所述中华绒螯蟹蛋白肽的平均分子量为600
‑
1500da。
45.按照配方准确称量上述各有效成分，采用粒度大于80目的小麦次粉作为载体，按常规混匀，制成本发明的用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂。
46.一种用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂的使用方法，其特征在于具体实施步骤如下：
47.(1)将所述免疫制剂按1:200的比例添加到中华绒螯蟹饲料中混匀，采用常规的颗粒饲料制备方法制成颗粒饲料。
48.(2)在养殖生产过程中，每间隔7天投喂一周上述颗粒饲料，日投饵量与正常饲料相同，直到养殖成商品蟹出池结束；其中，在疾病流行季节，即每年7月中旬至8月中旬坚持每天投喂含免疫制剂的饲料。
49.应用效果
50.室内小水体对比试验结果
51.室内水族箱养殖中华绒螯蟹，设计4组实验组和1组对照组，实验组1、实验组2、实验组3、实验组4每天分别投喂含实施例1、实施例2、实施例3、实施例4免疫制剂的中华绒螯蟹饲料(免疫制剂与中华绒螯蟹饲料的比例分别为1:400、1:300、1:200、1:200，分别混匀后制成颗粒饲料)。对照组每天投喂未添加免疫制剂的中华绒螯蟹饲料。实验组和对照组投喂的中华绒螯蟹饲料相同，其它养殖及管理方法相同，差别仅在于是否添加免疫制剂以及添加的免疫制剂组分。
52.实验组和对照组分别连续投喂28天后，测定实验组和对照组实验蟹的甲长、甲宽，以及肝胰腺中总蛋白含量、超氧化物歧化酶(sod)活性、溶菌酶(lzm)活性；然后，分别对实验组和对照组进行副溶血弧菌的人工浸泡感染实验，统计各组实验蟹的死亡率、相对免疫保护率，结果见表1。
53.表1中华绒螯蟹生长指标及肝胰腺非特异免疫、抗应激指标的比较
[0054][0055]
实验组1、实验组2、实验组3、实验组4实验蟹的甲长分别为4.2
±
0.3、5.1
±
0.3、5.2
±
0.2cm和4.3
±
0.1cm，皆高于对照组4.0
±
0.2cm；四组实验蟹的甲宽分别为4.4
±
0.4cm、5.4
±
0.3cm、5.5
±
0.1cm和4.4
±
0.1cm，高于对照组4.1
±
0.3cm；四组实验蟹的总蛋白含量分别为3.1
±
0.6g/l、3.6
±
0.3g/l、3.8
±
0.4g/l和3.5
±
0.1g/l，对照组实验蟹总蛋白含量为3.2
±
0.2g/l；四组实验蟹的sod值分别为88.4
±
1.2u/mg、125.5
±
1.6u/mg、129.9
±
1.8u/mg和98.3
±
0.8u/mg，对照组实验蟹sod值为78.5
±
1.3u/mg；四组实验蟹的lzm值分别为7.6
±
0.4u/mg、17.2
±
1.5u/mg、18.5
±
1.6u/mg和11.1
±
0.6u/mg，高于对照组实验蟹lzm值7.4
±
0.4u/mg。人工浸泡感染试验结果表明，投喂非特异性免疫制剂的实验组实验蟹人工感染死亡率分别为82.5％
±
3.5％、65.4％
±
3.3％、57.8％
±
3.1％和78.9％
±
1.6％，皆低于对照组91％
±
1.4％；其相对保护率分别为9.4％
±
2.5％、28.1％
±
2.55％、36.5％
±
2.4％和13.3％
±
0.4％。结果证明投喂本发明的免疫制剂可以明显提高中华绒螯蟹的非特异性免疫力和抗应激能力。
[0056]
室外池塘对比试验结果
[0057]
试验时间：2020年7月至8月；试验地点：天津市西青区水产局养殖试验示范基地养殖场；养殖模式：池塘精养；实验池投喂添加本发明实施例3免疫制剂的中华绒螯蟹饲料(免疫制剂与中华绒螯蟹饲料的比例为1:200，混匀后制成颗粒饲料)，对照池投喂普通饲料，实验组和对照组投喂的中华绒螯蟹饲料相同，其它养殖及管理方法相同，差别仅在于是否添加本发明的免疫制剂。试验条件及结果见表2。
[0058]
表2中华绒螯蟹生长指标及肝胰腺非特异免疫指标比较
[0059][0060]
经28天室外池塘养殖，实验池中华绒螯蟹增重率180.1％
±
5.6％，高于对照组增重率99.2％
±
7.2％；实验池实验蟹总蛋白含量为7.5
±
0.8g/l，高于对照池6.1
±
0.4g/l；实验池实验蟹sod值为162.9
±
3.4u/mg，高于对照池93.5
±
2.6u/mg；实验池实验蟹lzm值为14.8
±
2.2u/mg，高于对照池6.7
±
1.6u/mg；室外池塘养殖实验结束时，实验池实验蟹成活率97％，平均规格90.2
±
3.4g/只；对照池成活率90％，平均规格60.6
±
2.6g/只。结果表明，
室外池塘投喂本发明的免疫制剂可以明显提高中华绒螯蟹的生长指标和非特异性免疫力，实验池养殖效果明显优于对照池。
[0061]
上述参照实施例对该用于养殖中华绒螯蟹非特异性免疫制剂及其使用方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。