一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法与流程

技术特征：
1.一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，包括如下步骤：量取浓硫酸、正丁醇，置于带干燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至
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5~
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8℃，缓慢加入200目的酵母葡聚糖粉末5
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7g；反应6
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8min后，反应体系用naoh中和，离心，蒸馏水透析18
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24h，减压浓缩至20
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22ml，加入体积分数95％乙醇，静置后离心，收集沉淀物，将沉淀物溶解于水，再透析18
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24h，透析液经冷冻干燥后得葡聚糖硫酸酯；采用截留分子量分别为4k和10k的聚醚砜膜对葡聚糖硫酸酯进行二级超滤分级,得到3个级分；以毛细管黏度计测试样品的特性粘度；采用sd大鼠给药20
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60min后,以复方噻胺酮(10ml/kg)肌肉注射麻醉,从心脏取血于塑料试管中,1
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2min后每隔10s缓慢倾斜试管1次,记录倾斜试管时液面不动时间,即为ct；大鼠腹腔动脉采血,加入预先盛有0.1ml3.8%枸橼酸钠的试管中,并在每支试管中加入待测样品,37
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38℃水浴中孵育1min,每支试管中再加入0.1ml0.01mol/l的cacl2,混匀后开始计时,记录倾斜试管时液面不动时间,即为rt；通过ct值和rt值判断3个级分对抗凝血活性的影响。2.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述浓硫酸与正丁醇的比例为1∶7
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9。3.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述二级超滤分级分为第一级超滤膜分级和第二级超滤膜分级。4.根据权利要求3所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述第一级超滤膜分级采用截留分子量为10k的聚醚砜膜将葡聚糖硫酸酯分为10k以上和10k以下两个级分。5.根据权利要求3所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述第二级超滤分级采用截留分子量为4k的聚醚砜膜得到4
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10k和4k以下两个级分。6.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述毛细管黏度计长度为140
±
5mm 内径为0.5
±
0.05mm 测定球的容积为3.5
±
0.5ml。7.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述以毛细管黏度计测试样品的特性粘度方法如下：称取干燥的样品，用蒸馏水配制成溶液用毛细管黏度计在20
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30℃下分别测定相同容积样品和蒸馏水流出时间计算出相对粘度η，并通过多点稀释倒推的方法计算样品的特性粘度。8.根据权利要求7所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述多点稀释倒推的方法为：将多个不同浓度的样品相对粘度η与浓度绘制成曲线图，通过曲线图平缓点分析出样品的特性粘度。9.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述sd大鼠的实验数量为160
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190只，雌雄数量各半。

技术总结
本发明涉及一种抗凝血活性测定方法，尤其为一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，量取浓硫酸、正丁醇，置于带干燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至


技术研发人员：陈伟军 毛伟权 杨丽倩 欧淑君
受保护的技术使用者：汉邦环宇多糖生物科技（河源）有限公司
技术研发日：2021.04.20
技术公布日：2021/10/19