一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体及应用的制作方法

技术特征：
1.一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体，其特征在于，以氨基酸序列如seq id no.2所示的角蛋白酶为亲本，将亲本角蛋白酶第165位点的丙氨酸、第292位点的天冬酰胺、第170位点的谷氨酰胺、第190位点的亮氨酸、第92位点的组氨酸、第171位点的丝氨酸中至少一处突变为其他氨基酸。2.根据权利要求1所述的角蛋白酶突变体，其特征在于，将亲本角蛋白酶第165位点的丙氨酸突变为谷氨酸、第292位点的天冬酰胺突变为苯丙氨酸、第170位点的谷氨酰胺突变为苏氨酸、第190位点的亮氨酸突变为谷氨酰胺、第92位点的组氨酸突变为天冬酰胺和第171位点的丝氨酸突变为甘氨酸中的至少一种突变。3.根据权利要求2所述的角蛋白酶突变体，其特征在于，将亲本角蛋白酶第165位点的丙氨酸突变为谷氨酸、第292位点的天冬酰胺突变为苯丙氨酸、第170位点的谷氨酰胺突变为苏氨酸、第190位点的亮氨酸突变为谷氨酰胺、第92位点的组氨酸突变为天冬酰胺和第171位点的丝氨酸突变为甘氨酸。4.一种编码权利要求1
‑
3中任一项所述的角蛋白酶突变体的基因。5.一种携带权利要求4所述的基因的重组质粒。6.一种表达权利要求1
‑
3中任一项所述的角蛋白酶突变体的重组菌。7.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌以芽孢杆菌、大肠杆菌、酵母或丝状真菌为宿主菌。8.如权利要求1
‑
3中任一项所述的角蛋白酶突变体在医药、化工、饲料、纺织或制革行业中的应用。9.如权利要求6所述的重组菌在医药、化工、饲料、纺织或制革行业中的应用。10.根据权利要求9中所述的应用，其特征在于，所述应用具体是将所述重组菌进行发酵，得到角蛋白酶突变体，将所述角蛋白酶突变体应用于医药、化工、饲料、纺织或制革行业中。

技术总结
本发明公开了一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体及应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明的突变体为A165E、Q170T、N292F、L190Q、H92N和S171G，上述突变体在较好的保持催化活性的基础上使热稳定性获得不同程度提升，其中Q170T突变体具有最优热稳定性，在60℃的半衰期由野生型的17.3min提升到38.5min。六个位点组合突变体的半衰期显著改善至66.1min，最适反应温度由40℃提高至60℃。突变体的催化活性和热稳定性均较好，较野生型角蛋白酶更具应用价值和潜力。并且基于计算机辅助分析的蛋白质热稳定性提升方法可以成为工业酶热稳定性改造的通用途径。酶热稳定性改造的通用途径。酶热稳定性改造的通用途径。


技术研发人员：史劲松 苏畅 郑可欣 许正宏 龚劲松 钱建瑛 江佳宇 秦安琪 何纪萌
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：2021.05.28
技术公布日：2021/10/23