一种产beta-丙氨酸酵母菌及其构建方法与流程

技术特征：
1.一种产β
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丙氨酸的酿酒酵母，其为酿酒酵母by4742衍生菌，在基因组上整合了外源的编码甲基丙二酰
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coa变构酶的mmut基因、编码甲基丙二酰
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coa脱羧酶的ygfg基因、编码丙酸coa
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转移酶的pct基因、编码乳酰基
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coa脱水酶alfa亚基的lcda基因、编码乳酰基
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coa脱水酶beta亚基的lcdb基因、编码硫酯裂解酶的tesb基因和编码氨基裂合酶的aspb基因。2.如权利要求1所述的酿酒酵母，其特征在于，所述酿酒酵母by4742的基因型为matα his3δ1 leu2δ0 lys2δ0 ura3δ0即by4742(matα his3δ1 leu2δ0 lys2δ0 ura3δ0)。3.如权利要求1所述的酿酒酵母，其特征在于，所述甲基丙二酰
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coa变构酶来源于人homo sapiens(human)，其氨基酸序列为seq id no:1；所述甲基丙二酰
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coa脱羧酶来源于大肠杆菌escherichia coli(strain k12)，其氨基酸序列为seq id no:3；所述丙酸coa
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转移酶来源于大肠杆菌escherichia coli(strain k12)，其氨基酸序列为seq id no:5；所述乳酰基
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coa脱水酶alfa亚基来源于丙酸厌氧菌anaerotignum propionicum dsm 1682，其氨基酸序列为seq id no:7；所述乳酰基
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coa脱水酶beta亚基来源于丙酸厌氧菌anaerotignum propionicum dsm 1682，其氨基酸序列为seq id no:9；所述硫酯裂解酶来源于大肠杆菌escherichia coli(strain k12)，其氨基酸序列为seq id no:11；并且/或者所述氨基裂合酶氨基酸序列为seq id no:13。4.如权利要求3所述的酿酒酵母，其特征在于，所述mmut基因的核苷酸序列为seq id no:2；所述ygfg基因的核苷酸序列为seq id no:4；所述pct基因的核苷酸序列为seq id no:6；所述lcda基因的核苷酸序列为seq id no:8；所述lcdb基因的核苷酸序列为seq id no:10；所述tesb基因的核苷酸序列为seq id no:12；并且/或者所述aspb基因的核苷酸序列为seq id no:14。5.一种构建如权利要求1
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4中任一项所述酿酒酵母的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.构建mmut基因表达盒，包括启动子ptef1、mmut基因、终止子adh1t，形成ptef1
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mmut
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adh1t表达盒；构建ygfg基因表达盒，包括启动子ptpi1、ygfg基因、终止子prm5t，形成ptpi1
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ygfg
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prm5t表达盒；构建pct基因表达盒，包括启动子ptef2、pct基因、终止子idp1t，形成ptef2
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pct
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idp1t表达盒；构建lcda基因表达盒，包括启动子peno2、lcda基因、终止子cps1t，形成peno2
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lcda
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cps1t表达盒；
构建lcdb基因表达盒，包括启动子pgpm1、lcdb基因、终止子idp1t，形成pgpm1
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lcdb
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idp1t表达盒；构建tesb基因表达盒，包括启动子ppgk3、tesb基因、终止子prm9t，形成ppgk3
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tesb
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prm9t表达盒；构建aspb基因表达盒，包括启动子ptdh3、aspb
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11
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d4基因、终止子spg5t，形成ptdh3
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aspb
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11
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d4
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spg5t表达盒；b.将上述步骤a构建的7种基因表达盒装载到适合于在酿酒酵母中表达的质粒载体上，形成基因簇表达质粒；c.将步骤b得到的基因簇表达质粒转化入酿酒酵母by4742，筛选基因组中整合了上述7种基因的阳性克隆；d.筛选得到生产β
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丙氨酸的酿酒酵母。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述适合于在酿酒酵母中表达的质粒载体是puc57，所形成的基因簇表达质粒命名为puc57
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pathway质粒。7.如权利要求1
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4中任一项所述的酿酒酵母在生产β
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丙氨酸中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，通过所述酿酒酵母的发酵来生产β
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丙氨酸。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，发酵培养基中添加有氨水或铵盐。10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，发酵培养基是ypd
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nh4培养基，组成为：10g/l酵母提取物，20g/l胰蛋白胨，20g/l葡萄糖，在发酵培养期间，添加15％的氨水。

技术总结
本发明公开了一种产beta


技术研发人员：范文超 高书良 丁鹏
受保护的技术使用者：洛阳华荣生物技术有限公司
技术研发日：2021.07.15
技术公布日：2021/10/23