不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的方法与流程

1.本发明属于水产营养领域，具体地涉及一种在不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的营养学方法。


背景技术：

2.与陆生动物不同，养殖鱼类生活在水环境中，更容易受到密度、水温、盐度等环境条件变化带来的应激。尤其是，实际生产过程中，集约化养殖中片面追求单位水体的产量常常导致高密度应激，而外海网箱等养殖模式中自然水温的不可控也容易导致高温或者低温应激。对红鳍东方鲀这种重要的海水养殖鱼类来说，其特有的锋利的牙齿和群体内较为激烈的残食特性使得即使是一般的应激条件也会造成较高的应激反应，这在生产中往往导致较高的死亡率和较低的养殖收益。另外，我国红鳍东方鲀主要在山东、河北、辽宁和天津等北方地区养殖，在夏天外海的温度也容易超过其最适水温，而养殖网箱常常局限于水体上层，无法通过水层的下降来降低环境温度，从而也容易导致较为强烈的高温应激。到了冬季，网箱养殖的红鳍东方鲀则完全无法在外海的低温条件下越冬，需要转移到室内养殖的可控温度条件下，在这个时期前后，养殖的红鳍东方鲀也容易面临较为激烈的低温应激。
3.另一方面，红鳍东方鲀还具有独特的脂肪存储方式，其不具有腹部脂肪组织，肌肉脂肪含量也非常低(鲜重在0.5％左右)；其将肝脏作为脂肪的主要存储部位，导致肝脏的脂肪含量非常高(占鲜重的50
‑
60％)，肝脏体积较大，肝体比一度可以达到体重的1/5
‑
1/4。众所周知，肝脏在整个动物机体的代谢中心，因此，兼顾主要脂肪存储部位和机体代谢中心的双重角色同样是导致红鳍东方鲀不耐应激的重要原因之一，尤其是肝脏脂肪蓄积较高的时候。而在目前的水产养殖生产中，因为考虑到高脂饲料在节约蛋白方面的效用，高脂饲料的使用非常普遍，这进一步恶化了红鳍东方鲀在养殖过程中所面临的高应激情况。
4.虽然红鳍东方鲀自身特有的脂肪存储方式是导致其抗应激能力容易受饲料高脂影响的一个重要原因，但是，在以往的养殖鱼类抗应激技术开发中，常常忽视了饲料脂肪水平的影响，导致了技术应用效果的不稳定。


技术实现要素：

5.本发明要解决的技术问题在于提供一种在不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的营养学方法，所述方法针对红鳍东方鲀养殖过程中容易受到应激以及抗应激能力容易受到饲料脂肪水平影响的特点，在不同饲料脂肪水平下，综合运用溶血卵磷脂、牛磺酸和l
‑
肉碱的外源添加，并同时控制饲料中应激敏感物质花生四烯酸和有效磷的含量，来提高养殖红鳍东方鲀的抗应激能力。本方法创新性地应用了溶血卵磷脂同其他营养素联合使用时的抗应激效果，克服了单一抗应激物质在饲料中应用的效率低下，并且克服了抗应激策略在不同饲料脂肪水平下应用的效果不稳定性，弥补了该领域现有技术的不足。
6.本发明是通过如下技术方案来实现的：
7.一种在不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的方法，它的方法如下：
8.(1)当饲料中脂肪的质量百分比在7
‑
12％时，在饲料中复合添加如下物质：纯度5％的溶血卵磷脂0.1％ 牛磺酸1％ l
‑
肉碱0.5％，上述物质的百分比为占饲料干重的比例，并控制饲料中花生四烯酸含量占总脂肪酸含量＜5％，且有效磷含量＞0.7％，所述有效磷的含量的百分比为占饲料干重比例；对应总磷含量＞1％；
9.(2)当饲料中脂肪的质量百分比在12
‑
18％时，在饲料中复合添加如下物质：纯度5％的溶血卵磷脂0.15％ 牛磺酸1.5％ 肉碱0.8％，上述百分比为占饲料干重的比例，并控制饲料中花生四烯酸占总脂肪酸的含量＜3％，且有效磷含量＞1.2％，所述有效磷的含量的百分比为占饲料干重比例；对应总磷含量＞1.6％；
10.所述的红鳍东方鲀为养成期体重20g
‑
2kg，在投喂满足正常生长需求的饲料的情况下，饲料中的脂肪按上述方法进行设置。
11.本发明与现有技术相比的有益效果：
12.(1)养殖红鳍东方鲀增重率平均提高29％，成活率平均提高32％，血清基础肾上腺皮质醇激素含量平均降低31％，在高温应激条件下成活率平均提高29％，高密度应激条件下成活率平均提高33％，在使用高脂饲料养殖条件下，还能平均降低肝脏脂肪含量20％。(2)该技术基于对养殖饲料投喂策略的管理，具有非常强的可操作性。(3)成本在可控范围内，经济性高。
附图说明
13.图1、实施例1中各处理组实验鱼增重率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
14.图2、实施例1中各处理组实验鱼成活率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
15.图3、实施例1中各处理组实验鱼肾上腺皮质醇激素含量。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
16.图4、实施例1中各处理组实验鱼高温应激后成活率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
17.图5、实施例2中各处理组实验鱼增重率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
18.图6、实施例2中各处理组实验鱼成活率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
19.图7、实施例2中各处理组实验鱼肾上腺皮质醇激素含量。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
20.图8、实施例2中各处理组实验鱼肝脏脂肪含量。数据以平均值
±
标准误表示(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
21.图9、实施例2中各处理组实验鱼高温应激后成活率。数据以平均值
±
标准误表示
(n＝4)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
22.图10、实施例3中各处理组实验鱼增重率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
23.图11、实施例3中各处理组实验鱼成活率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
24.图12、实施例3中各处理组实验鱼肾上腺皮质醇激素含量。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
25.图13、实施例3中各处理组实验鱼高密度应激后成活率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
26.图14、实施例4中各处理组实验鱼增重率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
27.图15、实施例4中各处理组实验鱼成活率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
28.图16、实施例4中各处理组实验鱼肾上腺皮质醇激素含量。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
29.图17、实施例4中各处理组实验鱼肝脏脂肪含量。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
30.图18、实施例4中各处理组实验鱼高密度应激后成活率。数据以平均值
±
标准误表示(n＝600)；*表示两处理组间具有显著差异(p<0.05)，**表示两处理组间具有极显著差异(p<0.01)。
具体实施方式
31.下面通过实施例来对本发明的技术特征作进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
32.实施例1、在实验室养殖条件下应用该方法的效果评价试验一(低脂饲料情况下)
33.1、实验设计和实验饲料配方(基础饲料配方为模拟常用的商业饲料配方，并非对本发明保护范围的限制，在能够保证养殖鱼正常生长的情况下，实施本发明的营养学方法，均能达到本发明效果)
34.本实施例一种在不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的方法，它的方法如下：
35.(1)当饲料脂肪在7
‑
12％时，在饲料中复合添加如下物质：纯度5％的溶血卵磷脂0.1％ 牛磺酸1％ l
‑
肉碱0.5％(占饲料干重比例)，并控制饲料中花生四烯酸含量＜5％(占总脂肪酸含量)且有效磷含量＞0.7％(占饲料干重比例；对应总磷含量＞1％)。
36.实验饲料以鱼粉、玉米浓缩蛋白、豆粕和小米粉等原料为主要蛋白源。以鱼油和豆
油为主要脂肪酸，配制粗蛋白含量约为50％，粗脂肪含量约为10％的实验饲料，实验组应用本方法所述的营养学方法，而对照组相应的成分为酪氨酸和微晶纤维素。
37.表1实验饲料的饲料配方和粗成分(％干物质)
[0038][0039]
2、实验用鱼和养殖管理
[0040]
本实验采用初始体重为80g的实验鱼，正式试验前，实验鱼在水泥池(25
㎡
)中暂养7天以适应养殖环境条件。实验开始前，将实验鱼随机分到8个玻璃钢桶(直径：230cm，高：100cm)中，每组4个重复。每桶500尾鱼(对红鳍东方鲀属中度拥挤条件)，采用室内流水养殖，水流量50l/min，每天饱食投喂两次。养殖实验在中国水产科学研究院黄海水产研究所鲆鲽鱼类繁育基地进行，总养殖周期8周。养殖实验在中国山东省海阳市的自然光周期和环境温度(n36
°
41'，e121
°
07')下进行，在实验过程中，水温范围为19～23℃；盐度30～31；ph7.1～8.4；溶解氧6～7mg l
‑1。每天摄食结束后半小时进行残余饲料和粪便清理。8周投喂实验结束后，统计实验鱼的增重率，并取样。然后，每桶随机取30尾鱼转入直径100cm、高100cm的小玻璃钢桶中进行高温应激实验，在29.5℃水温中养殖7天，继续投喂实验饲料，7天结束后统计成活率。
[0041]
3、终末体重测量及样品采集和样品分析
[0042]
8周养殖实验结束后，对每桶鱼称重、计数，计算成活率。同时，每桶随机取6尾鱼，取血清样品用于测定肾上腺皮质激素。从尾静脉采集血液，在室温下凝结2小时，然后在4℃下凝结6小时。之后，进行离心(836
×
g，10分钟，4℃)获得血清样品。肾上腺皮质激素使用南
京建成试剂盒进行测定。
[0043]
4、实验统计方法
[0044]
实验数据的统计采用两独立样本的t检验分析，使用spss16.0进行。数据采用平均值
±
标准误表示(n＝4)。以p<0.05表示为差异显著。
[0045]
5、实验结果
[0046]
在增重率方面，与对照组相比，应用本发明方法的处理组平均末重提高23％，显著高于对照组(图1)；成活率提高34％，极显著高于对照组(图2)；血清基础肾上腺皮质醇激素含量显著降低36％，极显著低于对照组(图3)；高温应激实验后，成活率比对照组显著高33％(图4)。
[0047]
实施例2、在实验室养殖条件下应用该方法的效果评价试验二(高脂饲料情况下)
[0048]
1、实验设计和实验饲料配方(基础饲料配方为模拟常用的商业饲料配方，并非对本发明保护范围的限制，在能够保证养殖鱼正常生长的情况下，实施本发明的营养学方法，均能达到本发明效果)
[0049]
本实施例一种在不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的方法，它的方法如下：
[0050]
(1)当饲料脂肪在12
‑
18％时，在饲料中复合添加如下物质：纯度5％的溶血卵磷脂0.15％ 牛磺酸1.5％ 肉碱0.8％(占饲料干重比例)，并控制饲料中花生四烯酸含量＜3％(占总脂肪酸含量)且有效磷含量＞1.2％(占饲料干重比例；对应总磷含量＞1.6％)。
[0051]
实验饲料以鱼粉、玉米浓缩蛋白、豆粕和小米粉等原料为主要蛋白源。以鱼油和豆油为主要脂肪酸，配制粗蛋白含量约为46％，粗脂肪含量约为15％的实验饲料，实验组应用本方法所述的营养学方法，而对照组相应的成分为酪氨酸和微晶纤维素。
[0052]
表2实验饲料的饲料配方和粗成分(％干物质)
[0053]
[0054][0055]
2、实验用鱼和养殖管理
[0056]
本实验采用初始体重为80g的实验鱼，正式试验前，实验鱼在水泥池(25
㎡
)中暂养7天以适应养殖环境条件。实验开始前，将实验鱼随机分到8个玻璃钢桶(直径：230cm，高：100cm)中，每组4个重复。每桶500尾鱼(对红鳍东方鲀属中度拥挤条件)，采用室内流水养殖，水流量50l/min，每天饱食投喂两次。养殖实验在中国水产科学研究院黄海水产研究所鲆鲽鱼类繁育基地进行，总养殖周期8周。养殖实验在中国山东省海阳市的自然光周期和环境温度(n36
°
41'，e121
°
07')下进行，在实验过程中，水温范围为19～23℃；盐度30～31；ph7.1～8.4；溶解氧6～7mg l
‑1。每天摄食结束后半小时进行残余饲料和粪便清理。8周投喂实验结束后，统计实验鱼的增重率，并取样。然后，每桶随机取30尾鱼转入直径100cm、高100cm的小玻璃钢桶中进行高温应激实验，在29.5℃水温中养殖7天，继续投喂实验饲料，7天结束后统计成活率。
[0057]
3、终末体重测量及样品采集和样品分析
[0058]
8周养殖实验结束后，对每桶鱼称重，计数，计算成活率。同时，每桶随机取6尾鱼，取血清样品用于测定肾上腺皮质激素。从尾静脉采集血液，在室温下凝结2小时，然后在4℃下凝结6小时。之后，进行离心(836
×
g，10分钟，4℃)获得血清样品。肾上腺皮质激素使用南京建成试剂盒进行测定。
[0059]
4、实验统计方法
[0060]
实验数据的统计采用两独立样本的t检验分析，使用spss16.0进行。数据采用平均值
±
标准误表示(n＝4)。以p<0.05表示为差异显著。
[0061]
5、实验结果
[0062]
在增重率方面，与对照组相比，应用本发明方法的处理组平均末重提高36％，显著
高于对照组(图5)；成活率提高38％，极显著高于对照组(图6)；血清基础肾上腺皮质醇激素含量显著降低28％，显著低于对照组(图7)；肝脏脂肪含量降低19％(图8)；高温应激实验后，成活率比对照组显著高25％(图9)。
[0063]
实施例3、在外海网箱养殖条件下应用该方法的效果评价试验一(低脂饲料情况下)
[0064]
1、实验设计和实验饲料配方(基础饲料配方为模拟常用的商业饲料配方，并非对本发明保护范围的限制，在能够保证养殖鱼正常生长的情况下，实施本发明的营养学方法，均能达到本发明效果)
[0065]
本实施例一种在不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的营养学方法，它的方法如下：
[0066]
(1)当饲料脂肪在7
‑
12％时，在饲料中复合添加如下物质：纯度5％的溶血卵磷脂0.1％ 牛磺酸1％ l
‑
肉碱0.5％(占饲料干重比例)，并控制饲料中花生四烯酸含量＜5％(占总脂肪酸含量)且有效磷含量＞0.7％(占饲料干重比例；对应总磷含量＞1％)。
[0067]
实验饲料以鱼粉、玉米浓缩蛋白、豆粕和小米粉等原料为主要蛋白源。以鱼油和豆油为主要脂肪酸，配制粗蛋白含量约为50％，粗脂肪含量约为10％的实验饲料，实验组应用本方法所述的营养学方法，而对照组相应的成分为酪氨酸和微晶纤维素。
[0068]
表3实验饲料的饲料配方和粗成分(％干物质)
[0069][0070][0071]
2、实验用鱼和养殖管理
[0072]
本实验采用初始体重为250g的实验鱼，养殖实验在河北滦南县海大水产养殖公司的海水网箱实验场地进行，每组饲料投喂一个网箱(3m
×
3m
×
2m)，每个网箱600尾鱼，每天饱食投喂两次，总养殖周期14周(98天)。养殖过程中经历一个夏季高温期(水温有一个月左右高于27摄氏度)，是为自然高温应激因素。试验结束后后，每个网箱取30尾鱼进行，饲养于100cm，高100cm的小玻璃钢桶中进行高密度应激实验，期间正常投喂和换水，7天后统计成活率。
[0073]
3、终末体重测量及样品采集和样品分析
[0074]
养殖实验结束后，对每个网箱随机打样60尾鱼称重并计算增重率。同时，每桶随机取10尾鱼，取血清样品用于测定肾上腺皮质激素。从尾静脉采集血液，在室温下凝结2小时，然后在4℃下凝结6小时。之后，进行离心(836
×
g，10分钟，4℃)获得血清样品。肾上腺皮质激素使用南京建成试剂盒进行测定。
[0075]
4、实验统计方法
[0076]
实验数据的统计采用两独立样本的t检验分析，使用spss16.0进行。数据采用平均值
±
标准误表示。以p<0.05表示为差异显著。
[0077]
5、实验结果
[0078]
在增重率方面，与对照组相比，应用本发明方法的处理组平均末重提高18％，显著高于对照组(图10)；成活率提高25％，极显著高于对照组(图11)；血清基础肾上腺皮质醇激素含量显著降低28％，显著低于对照组(图12)；高密度应激实验后，成活率比对照组显著高29％(图13)。
[0079]
实施例4、在外海网箱养殖条件下应用该方法的效果评价试验二(高脂饲料情况下)
[0080]
1、实验设计和实验饲料配方(基础饲料配方为模拟常用的商业饲料配方，并非对本发明保护范围的限制，在能够保证养殖鱼正常生长的情况下，实施本发明的营养学方法，均能达到本发明效果)
[0081]
本实施例一种在不同饲料脂肪水平下提高红鳍东方鲀抗应激能力的营养学方法，它的方法如下：
[0082]
(1)当饲料脂肪在12
‑
18％时，在饲料中复合添加如下物质：纯度5％的溶血卵磷脂0.15％ 牛磺酸1.5％ 肉碱0.8％(占饲料干重比例)，并控制饲料中花生四烯酸含量＜3％(占总脂肪酸含量)且有效磷含量＞1.2％(占饲料干重比例；对应总磷含量＞1.6％)。
[0083]
实验饲料以鱼粉、玉米浓缩蛋白、豆粕和小米粉等原料为主要蛋白源。以鱼油和豆油为主要脂肪酸，配制粗蛋白含量约为46％，粗脂肪含量约为15％的实验饲料，实验组应用本方法所述的营养学方法，而对照组相应的成分为酪氨酸和微晶纤维素。
[0084]
表4实验饲料的饲料配方和粗成分(％干物质)
[0085]
[0086][0087]
2、实验用鱼和养殖管理
[0088]
本实验采用初始体重为250g的实验鱼，养殖实验在河北滦南县海大水产养殖公司的海水网箱实验场地进行，每组饲料投喂一个网箱(3m
×
3m
×
2m)，每个网箱600尾鱼，每天饱食投喂两次，总养殖周期14周(98天)。养殖过程中经历一个夏季高温期(水温有一个月左右高于27摄氏度)，是为自然高温应激因素。试验结束后后，每个网箱取30尾鱼进行，饲养于100cm、高100cm的小玻璃钢桶中进行高密度应激实验，期间正常投喂和换水，7天后统计成活率。
[0089]
3、终末体重测量及样品采集和样品分析
[0090]
养殖实验结束后，对每个网箱随机打样60尾鱼称重并计算增重率。同时，每桶随机取10尾鱼，取血清样品用于测定肾上腺皮质激素。从尾静脉采集血液，在室温下凝结2小时，然后在4℃下凝结6小时。之后，进行离心(836
×
g，10分钟，4℃)获得血清样品。肾上腺皮质激素使用南京建成试剂盒进行测定。
[0091]
4、实验统计方法
[0092]
实验数据的统计采用两独立样本的t检验分析，使用spss16.0进行。数据采用平均值
±
标准误表示。以p<0.05表示为差异显著。
[0093]
5、实验结果
[0094]
在增重率方面，与对照组相比，应用本发明方法的处理组平均末重提高39％，显著高于对照组(图14)；成活率提高31％，极显著高于对照组(图15)；血清基础肾上腺皮质醇激素含量显著降低32％，显著低于对照组(图16)；脂肪含量对比对照组降低21％(图17)；高密度应激实验后，成活率比对照组极显著高37％(图18)。