环状多核糖核苷酸及其药物组合物的制作方法

技术特征：
1.一种制备药物组合物的方法，所述方法包括：a)提供多个线性多核糖核苷酸分子；b)使所述线性多核糖核苷酸分子环化以提供环状多核糖核苷酸分子的制剂；c)处理所述制剂以基本上去除所述制剂中剩余的线性多核糖核苷酸分子；d)任选地评价在所述处理步骤之后剩余的所述制剂中线性多核糖核苷酸分子的量；以及e)进一步处理所述制剂以产生用于药物用途的所述药物组合物。2.如权利要求1所述的方法，其中步骤d)的进一步处理包括以下项中的一种或多种：f)处理所述制剂以基本上去除脱氧核糖核苷酸分子；g)评价所述制剂中脱氧核糖核苷酸分子的量；h)将所述制剂与药物赋形剂一起配制；i)浓缩所述制剂；以及j)将所述制剂中脱氧核糖核苷酸分子的量记录在印刷或数字媒介中。3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中步骤d)的进一步处理包括以下项中的一种或多种：f)处理所述制剂以基本上去除蛋白质污染物；g)评价所述制剂中蛋白质污染物的量；h)将所述制剂与药物赋形剂一起配制；以及i)浓缩所述制剂。4.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中步骤d)的进一步处理包括以下项中的一种或多种：f)处理所述制剂以基本上去除内毒素；g)评价所述制剂中内毒素的量；h)将所述制剂与药物赋形剂一起配制；以及i)浓缩所述制剂。5.如权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中所述环化步骤通过夹板连接进行。6.如权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中所述线性多核糖核苷酸分子包括所述环状多核糖核苷酸分子的线性多核糖核苷酸分子对应物、所述环状多核糖核苷酸分子的线性多核糖核苷酸分子非对应物、或其组合。7.如权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中所述蛋白质污染物包括酶。8.如权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含占所述制剂中的总核糖核苷酸分子不超过20％(w/w)的线性多核糖核苷酸分子。9.如权利要求1
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8中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含占所述制剂中的总核糖核苷酸分子不超过10％(w/w)的线性多核糖核苷酸分子。10.一种环状多核糖核苷酸分子的药物制剂，所述药物制剂包含环状多核糖核苷酸分子和占所述药物制剂中的总核糖核苷酸分子不超过5％(w/w)的带切口多核糖核苷酸分子。11.如权利要求10所述的药物制剂，所述药物制剂包含占所述药物制剂中的总核糖核苷酸分子不超过2％(w/w)的带切口多核糖核苷酸分子。12.如权利要求10或权利要求11所述的药物制剂，其中所述药物制剂：
(i)如通过鲎变形细胞裂解物测试所测量包含少于10eu/kg的内毒素或缺少内毒素；和/或(ii)在灭菌之前包含少于100cfu/100ml或少于10cfu/100ml的生物负荷；和/或(iii)是无菌药物制剂，例如，如在无菌条件下所测试支持少于100个活微生物的生长；和/或(iv)满足usp<71>的标准；和/或(v)满足usp<85>的标准；和/或(vi)是最终成品药的中间体药物制剂；和/或(vii)是用于施用至受试者的最终成品药；和/或(viii)包含浓度为至少0.1ng/ml的所述环状多核糖核苷酸分子；和/或(ix)包含不超过约9％(w/w)、8％(w/w)、7％(w/w)、6％(w/w)、5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、或0.5％(w/w)的带切口多核糖核苷酸分子；和/或(x)基本上不含选自以下项的工艺相关杂质：细胞蛋白质、细胞脱氧核糖核酸、酶、试剂组分、凝胶组分、或色谱材料；和/或(xi)在纯化之后与纯化之前相比具有降低水平的免疫或炎性应答的一种或多种标记物，例如，其中所述免疫或炎性应答的一种或多种标记物是：(a)细胞因子或免疫原性相关基因；和/或(b)选自由rig
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i、mda5、pkr、ifn
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β、oas、和oasl组成的组的基因的表达。13.如权利要求10
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12中任一项所述的药物制剂，其中所述环状多核糖核苷酸分子包含一个或多个表达序列和在至少一个表达序列的3’端的交错元件。14.如权利要求10
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13中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂中总核糖核苷酸分子的至少80％(w/w)是环状多核糖核苷酸分子。15.如权利要求10
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14中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂包含占所述制剂中的总核糖核苷酸分子不超过20％(w/w)的线性多核糖核苷酸分子。16.一种制备药物原料药的方法，所述方法包括：a)提供多个线性多核糖核苷酸分子；b)使所述多个线性多核糖核苷酸分子环化以提供环状多核糖核苷酸分子的制剂；c)评价所述制剂中剩余的线性多核糖核苷酸分子的量；以及d)如果所述环状多核糖核苷酸分子的制剂满足关于所述制剂中存在的线性多核糖核苷酸分子的量的参考标准，则将所述制剂处理为药物原料药。17.一种制备药物成品药的方法，所述方法包括：a)提供多个线性多核糖核苷酸分子；b)使所述多个线性多核糖核苷酸分子环化以提供环状多核糖核苷酸分子的制剂；c)测量所述制剂中线性多核糖核苷酸分子的量；d)如果所述环状多核糖核苷酸分子的制剂满足关于所述制剂中存在的线性多核糖核苷酸分子的量的参考标准，则将所述制剂配制为药物成品药；以及e)如果所述药物成品药满足关于所述药物成品药中存在的线性多核糖核苷酸分子的量的参考标准，则标记和运送所述药物成品药。18.如权利要求16或权利要求17所述的方法，其中所述环化步骤通过夹板连接进行。19.如权利要求16
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18中任一项所述的方法，其中所述配制所述环状多核糖核苷酸分子
的制剂包括将所述环状多核糖核苷酸分子的制剂与药物赋形剂组合。20.如权利要求16
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19中任一项所述的方法，其中关于所述制剂中存在的线性多核糖核苷酸分子的量的所述参考标准是：(i)药物放行规格；或者(ii)存在不超过1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml、35ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、70ng/ml、80ng/ml、90ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml、600ng/ml、1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200g/ml、300μg/ml、400μg/ml、500μg/ml、600μg/ml、700μg/ml、800μg/ml、900μg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、或2mg/ml的线性多核糖核苷酸分子；或者(iii)当通过显微镜法、分光光度法、荧光测定法、变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳成像、uv
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vis分光光度法、rna电泳、或rna酶h分析测量时存在不超过规定量(例如，测量时不可检测的水平或低于检测限的水平)的线性多核糖核苷酸分子；并且任选地，其中所述药物制剂进一步满足关于所述环状多核糖核苷酸分子的序列的参考标准，例如序列与参考环状多核糖核苷酸序列具有至少80％(例如，85％、90％、95％、97％、99％、100％)序列同一性。21.如权利要求16
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20中任一项所述的方法，其中所述药物成品药或药物原料药包含：(i)浓度为至少0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、500μg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、100mg/ml、200mg/ml、或500mg/ml的环状多核糖核苷酸分子；或者(ii)相对于所述药物制剂中的总核糖核苷酸分子至少30％(w/w)、40％(w/w)、50％(w/w)、60％(w/w)、70％(w/w)、80％(w/w)、85％(w/w)、90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)、或99％(w/w)的环状多核糖核苷酸分子。22.如权利要求21所述的方法，其中所述相对于所述药物制剂中的总核糖核苷酸分子至少30％(w/w)、40％(w/w)、50％(w/w)、60％(w/w)、70％(w/w)、80％(w/w)、85％(w/w)、90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)、或99％(w/w)的环状多核糖核苷酸分子通过以下项来测量：显微镜法、分光光度法、荧光测定法、变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳成像、uv
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vis分光光度法、rna电泳、rna酶h分析、uv光谱或荧光检测器、光散射技术、使用或不使用分离方法包括hplc的表面等离子体共振(spr)、使用或不使用分离前或分离后衍生化方法的基于芯片或凝胶的电泳、使用利用银或染料染色或放射性衰变用于检测线性多核糖核苷酸分子的检测方法、或利用显微镜、目测法或分光光度计的方法。23.如权利要求16
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22中任一项所述的方法，其中所述药物成品药或药物原料药：(i)如通过鲎变形细胞裂解物测试所测量包含少于10eu/kg的内毒素或缺少内毒素；和/或(ii)在灭菌之前包含少于100cfu/100ml或少于10cfu/100ml的生物负荷；和/或(iii)是无菌成品药或无菌原料药，并且任选地，如在无菌条件下所测试支持少于100个活微生物的生长；和/或
(iv)满足usp<71>的标准；和/或(v)满足usp<85>的标准；和/或(vi)包含如通过分光光度计测量的从约1.6至2.3的a260/a280吸光度比。24.如权利要求16
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23中任一项所述的方法，其中所述环状多核糖核苷酸分子包含一个或多个表达序列和在至少一个表达序列的3’端的交错元件。25.如权利要求16
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24中任一项所述的方法，其中所述制剂进一步满足以下参考标准：(i)关于所述制剂中存在的脱氧核糖核苷酸分子的量的参考标准，例如是存在不超过1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml、35ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、70ng/ml、80ng/ml、90ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、或500ng/ml、1000μg/ml、5000μg/ml、10,000μg/ml、或100,000μg/ml的脱氧核糖核苷酸分子；和/或(ii)关于所述制剂中存在的蛋白质污染物的量的参考标准，例如是存在少于0.1ng、1ng、5ng、10ng、15ng、20ng、25ng、30ng、35ng、40ng、50ng、60ng、70ng、80ng、90ng、100ng、200ng、300ng、400ng、或500ng蛋白质污染物/毫克(mg)所述环状多核糖核苷酸分子的所述蛋白质污染物。26.一种环状多核糖核苷酸分子的药物制剂，其中所述药物制剂中总核糖核苷酸分子的至少91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)是环状多核糖核苷酸分子。27.一种环状多核糖核苷酸分子的药物制剂，所述药物制剂包含占所述药物制剂中的总核糖核苷酸分子不超过0.5％(w/w)、1％(w/w)、2％(w/w)、或5％(w/w)的线性多核糖核苷酸分子。28.如权利要求26或权利要求27所述的药物制剂，其中所述药物制剂：(i)如通过鲎变形细胞裂解物测试所测量包含少于10eu/kg的内毒素或缺少内毒素；和/或(ii)在灭菌之前包含少于100cfu/100ml或少于10cfu/100ml的生物负荷；和/或(iii)是无菌药物制剂，例如，如在无菌条件下所测试支持少于100个活微生物的生长；和/或(iv)满足usp<71>的标准；和/或(v)满足usp<85>的标准；和/或(vi)是最终成品药的中间体药物制剂；和/或(vii)是用于施用至受试者的最终成品药；和/或(viii)包含浓度为至少0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、500μg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、100mg/ml、200mg/ml、或500mg/ml的环状多核糖核苷酸分子；和/或(ix)包含不超过1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml、35ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、70ng/ml、80ng/ml、90ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml、1000μg/ml、5000μg/ml、10,000μg/ml、或100,000μg/ml的脱氧核糖核苷酸分子；和/或
(x)包含少于0.1ng、1ng、5ng、10ng、15ng、20ng、25ng、30ng、35ng、40ng、50ng、60ng、70ng、80ng、90ng、100ng、200ng、300ng、400ng、或500ng蛋白质污染物(例如酶)/毫克(mg)所述环状多核糖核苷酸分子的所述蛋白质污染物；和/或(xi)包含如通过分光光度计测量的从约1.6至2.3的a260/a280吸光度比；(xii)基本上不含选自以下项的工艺相关杂质：细胞蛋白质、细胞脱氧核糖核酸、酶、试剂组分、凝胶组分、或色谱材料；和/或(xiii)在纯化之后与纯化之前相比具有降低水平的免疫或炎性应答的一种或多种标记物。29.如权利要求26
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28中任一项所述的药物制剂，其中所述环状多核糖核苷酸分子：(i)包含准螺旋结构；和/或(ii)包含准双链二级结构；和/或(iii)包含一个或多个表达序列和在至少一个表达序列的3’端的交错元件。30.一种将环状多核糖核苷酸递送至受试者或受试者的细胞或组织的方法，所述方法包括向所述受试者的所述细胞或组织施用如权利要求10
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15和26
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29中任一项所述的药物制剂、如权利要求1
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9中任一项所述的药物组合物、如权利要求16和18
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25中任一项所述的药物原料药、或如权利要求17
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25中任一项所述的药物成品药，其中在所述施用步骤之后至少3天在所述细胞、组织或受试者中检测到所述环状多核糖核苷酸或从所述环状多核糖核苷酸翻译的产物。31.如权利要求30所述的方法，所述方法进一步包括：(i)在所述施用步骤之前评价所述细胞、组织或受试者中所述环状多核糖核苷酸或从所述环状多核糖核苷酸翻译的产物的存在；和/或(ii)在所述施用步骤之后评价所述细胞、组织或受试者中所述环状多核糖核苷酸或从所述环状多核糖核苷酸翻译的产物的存在。32.一种肠胃外核酸递送系统，所述肠胃外核酸递送系统包含(i)如权利要求10
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15和26
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29中任一项所述的药物制剂、如权利要求1
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9中任一项所述的药物组合物、如权利要求16和18
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25中任一项所述的药物原料药、或如权利要求17
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25中任一项所述的药物成品药，和(ii)肠胃外可接受的稀释剂。33.一种将环状多核糖核苷酸递送至受试者的方法，所述方法包括向有需要的受试者肠胃外施用如权利要求10
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15和26
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29中任一项所述的药物制剂、如权利要求1
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9中任一项所述的药物组合物、如权利要求16和18
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25中任一项所述的药物原料药、或如权利要求17
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25中任一项所述的药物成品药。34.一种将环状多核糖核苷酸递送至受试者的细胞或组织的方法，所述方法包括向所述细胞或组织肠胃外施用如权利要求10
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15和26
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29中任一项所述的药物制剂、如权利要求1
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9中任一项所述的药物组合物、如权利要求16和18
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25中任一项所述的药物原料药、或如权利要求17
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25中任一项所述的药物成品药。35.如权利要求33或34所述的方法，其中如权利要求10
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15和26
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29中任一项所述的药物制剂、如权利要求1
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9中任一项所述的药物组合物、如权利要求16和18
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25中任一项所述的药物原料药、或如权利要求17
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25中任一项所述的药物成品药包含载体。36.如权利要求32所述的肠胃外核酸递送系统、或如权利要求34
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35所述的方法，其中
如权利要求10
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15和26
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29中任一项所述的药物制剂、如权利要求1
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9中任一项所述的药物组合物、如权利要求16和18
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25中任一项所述的药物原料药、或如权利要求17
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25中任一项所述的药物成品药包含稀释剂并且不含任何载体。37.如权利要求33
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36中任一项所述的方法，其中肠胃外施用是以静脉内、肌肉内、眼科或局部方式。38.一种制备药物原料药的方法，所述方法包括：a)提供多个线性多核糖核苷酸分子；b)使所述多个线性多核糖核苷酸分子环化以提供环状多核糖核苷酸分子的制剂；c)评价所述制剂中剩余的线性和/或带切口多核糖核苷酸分子的量；以及d)如果所述环状多核糖核苷酸分子的制剂满足关于所述制剂中存在的线性和/或带切口多核糖核苷酸分子的量的参考标准，则将所述制剂处理为药物原料药。39.一种制备药物成品药的方法，所述方法包括：a)提供多个线性多核糖核苷酸分子；b)使所述多个线性多核糖核苷酸分子环化以提供环状多核糖核苷酸分子的制剂；c)测量所述制剂中线性和/或带切口多核糖核苷酸分子的量；d)如果所述环状多核糖核苷酸分子的制剂满足关于所述制剂中存在的线性和/或带切口多核糖核苷酸分子的量的参考标准，则将所述制剂配制为药物成品药；以及e)如果所述药物成品药满足关于所述药物成品药中存在的线性多核糖核苷酸分子的量的参考标准，则标记和运送所述药物成品药。40.如权利要求38或39所述的方法，其中关于所述制剂中存在的线性和/或带切口多核糖核苷酸分子的量的所述参考标准选自：(a)相对于所述制剂中的总核糖核苷酸分子不超过20％、15％、10％、5％、2％、1％、或0.5％(w/w)的线性多核糖核苷酸分子；(b)相对于所述制剂中的总核糖核苷酸分子不超过5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、或0.1％(w/w)的带切口多核糖核苷酸分子；或者(c)相对于所述制剂中的总核糖核苷酸分子不超过20％、15％、10％、5％、2％、1％、或0.5％(w/w)的组合的线性和带切口多核糖核苷酸分子。

技术总结
本发明总体上涉及环状多核糖核苷酸的药物组合物和制剂及其用途。物组合物和制剂及其用途。物组合物和制剂及其用途。


技术研发人员：阿瓦克
受保护的技术使用者：旗舰创业创新第六有限责任公司
技术研发日：2020.03.04
技术公布日：2021/10/22