一种人胚胎干细胞的构建方法与流程

技术特征：
1.一种人胚胎干细胞的构建方法，所述构建方法包括：将人胚胎干细胞的基因组中整合外源的编码b2m-hla-g1融合蛋白的多核苷酸，所述b2m-hla-g1融合蛋白包括第一b2m片段和hla-g1片段，整合获得的人胚胎干细胞不表达游离的b2m蛋白。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述hla-g1片段包括：a)氨基酸序列如seq id no.1所示的多肽片段；或，b)氨基酸序列与seq id no.1具有90％以上序列一致性且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述第一b2m片段包括：c)氨基酸序列如seq id no.2所示的多肽片段；或，d)氨基酸序列与seq id no.2具有90％以上序列一致性且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段。4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述b2m-hla-g1融合蛋白还包括位于第一b2m片段和hla-g1片段之间的第一柔性连接肽段；和/或，所述b2m-hla-g1融合蛋白自n端至c端依次包括第一b2m片段和hla-g1片段，所述b2m-hla-g1融合蛋白包括氨基酸序列如seq id no.4所示的多肽片段。5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，将人胚胎干细胞的基因组中整合外源的编码b2m-hla-g1融合蛋白的多核苷酸的方法具体包括：将hla-g1片段的编码基因与人胚胎干细胞中内源性的b2m基因融合，优选为将hla-g1片段的编码基因替换位于内源b2m基因外显子3中的终止密码子。6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括：将人胚胎干细胞的基因组中整合外源的编码b2m-hla-g5融合蛋白的多核苷酸，所述b2m-hla-g5融合蛋白包括第二b2m片段和hla-g5片段。7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述第二b2m片段包括：e)氨基酸序列如seq id no.5所示的多肽片段；或，f)氨基酸序列与seq id no.5具有90％以上序列一致性且具有c)限定的多肽片段的功能的多肽片段。8.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述hla-g5片段包括：g)氨基酸序列如seq id no.6所示的多肽片段；或，h)氨基酸序列与seq id no.6具有90％以上序列一致性且具有e)限定的多肽片段的功能的多肽片段。9.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述b2m-hla-g5融合蛋白还包括位于第二b2m片段和hla-g5片段之间的第二柔性连接肽段；和/或，所述b2m-hla-g5融合蛋白自n端至c端依次包括第二b2m片段和hla-g5片段，所述b2m-hla-g5融合蛋白包括氨基酸序列如seq id no.8所示的多肽片段。和/或，将人胚胎干细胞的基因组中整合外源的编码b2m-hla-g5融合蛋白的多核苷酸的方法具体包括：通过慢病毒载体将编码b2m-hla-g5融合蛋白的多核苷酸整合入人胚胎干细胞的基因组。10.一种人胚胎干细胞，由如权利要求1～9任一权利要求所述的人胚胎干细胞的构建方法构建获得。

技术总结
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种人胚胎干细胞的构建方法。本发明提供一种人胚胎干细胞的构建方法，所述构建方法包括：将人胚胎干细胞的基因组中整合外源的编码B2M-HLA-G1融合蛋白的多核苷酸，所述B2M-HLA-G1融合蛋白包括第一B2M片段和HLA-G1片段，整合获得的人胚胎干细胞不表达游离的B2M蛋白。本发明所提供的人胚胎干细胞的构建方法构建获得的人胚胎干细胞细胞系内源性HLA-A，B，C蛋白无法到达细胞膜表面，因此该细胞系不能被CD8


技术研发人员：章小清 刘玲
受保护的技术使用者：同济大学
技术研发日：2020.04.14
技术公布日：2021/10/21