一种NADH的纯化方法与流程

技术特征：
1.一种nadh的纯化方法，其特征在于：所述方法包括步骤如下：(1)对含nadh酶促反应液进行过滤，收集得到上清液；(2)对步骤(1)收集得到的上清液进行脱色处理；(3)对步骤(2)中完成脱色处理后的反应液进行过滤，再依次进行超滤和纳滤处理；(4)将步骤(3)中纳滤处理后得到的滤液在减压浓缩后，得浓缩液，进行降温结晶处理，降温结晶时采用梯度降温，析出晶体，过滤、干燥，得到nadh。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中用陶瓷膜进行过滤；和/或步骤(2)中利用活性炭对步骤(1)收集得到的上清液进行脱色处理；和/或步骤(3)中对步骤(2)中完成脱色处理后的反应液进行过滤除去活性炭。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中上清液中nadh的浓度为30
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60g/l；和/或所述陶瓷膜孔径为30nm
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100nm，过滤温度为20
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30℃，过膜压力为0.1
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0.2mpa。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在利用活性炭对步骤(1)收集得到的上清液进行脱色处理前，先将上清液ph值调节至5
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7.0；优选地，ph为6.0。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中活性炭与上清液重量体积比为5
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25g:1l，进行脱色处理的温度为20
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80℃，进行脱色处理的时间为20
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70min；优选地，进行脱色处理的温度为50℃，进行脱色处理的时间为50min。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，对步骤(2)中完成脱色处理后的反应液进行过滤除去活性炭，将滤液的ph值调节至7
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8后，再依次进行超滤和纳滤处理。7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超滤膜为截留分子量1000da的卷式膜，过滤温度20
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30℃，过膜压力为1
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2mpa。8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述纳滤膜为截留分子量300da的卷式膜，过滤温度20
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30℃，过膜压力为1
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3mpa；优选地，过膜压力为2.0m pa。9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将步骤(3)中纳滤处理后得到的滤液在20
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70℃下减压浓缩后，得浓缩液；优选为，在30
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50℃下减压浓缩后，得浓缩液；优选地，浓缩倍数为4倍。10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)进行降温结晶时采用梯度降温，先以2
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3℃/h的降温速率将温度降至有晶体析出，再以6
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9℃/h的降温速率将温度降至10℃；和/或所述步骤(4)中干燥方式为真空干燥，干燥温度为30
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60℃。

技术总结
本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种绿色高效低成本的还原型辅酶I纯化方法。所述方法包括步骤如下：对含NADH酶促反应液用陶瓷膜进行过滤，收集得到上清液；利用活性炭对上述步骤收集得到的上清液进行脱色处理；对完成脱色处理后的反应液进行过滤除去活性炭，再依次进行超滤和纳滤处理；再将纳滤处理后得到的滤液在减压浓缩后，得浓缩液，进行降温结晶处理，降温结晶时采用梯度降温，析出晶体，过滤、干燥，得到还原型辅酶I。本发明为克服现有还原型辅酶I纯化技术的缺陷，提供一种绿色高效低成本的还原型辅酶I纯化方法。其工艺简单易操作、成本低、产物收率高，满足工业生产的需求。满足工业生产的需求。满足工业生产的需求。


技术研发人员：王康林 汪晓东 王青 廖华宁
受保护的技术使用者：合肥康诺生物制药有限公司
技术研发日：2021.08.20
技术公布日：2021/10/19