一种检测九种病原体的试剂盒、用途及使用方法与流程

技术特征：
1.一种检测九种病原体试剂盒，其特征在于：所述九种病原体为以下九种，肺炎支原体、肺炎衣原体、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌，所述试剂盒中包括检测九种病原体的正向引物、反向引物和探针。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：检测肺炎支原体的正向引物和反向引物序列如seq id no:1和seq id no:2所示，探针序列如seq id no:3所示；检测肺炎衣原体的正向引物和反向引物序列如seq id no:4和seq id no:5所示，探针序列如seq id no:6所示；检测金黄色葡萄球菌的正向引物和反向引物序列如seq id no:7和seq id no:8所示，探针序列如seq id no:9所示；检测肺炎链球菌的正向引物和反向引物序列如seq id no:10和seq id no:11所示，探针序列如seq id no:12所示；检测流感嗜血杆菌的正向引物和反向引物序列如seq id no:13和seq id no:14所示，探针序列如seq id no:15所示；检测肺炎克雷伯氏菌的正向引物和反向引物序列如seq id no:16和seq id no:17所示，探针序列如seq id no:18所示；检测鲍曼不动杆菌的正向引物和反向引物序列如seq id no:19和seq id no:20所示，探针序列如seq id no:21所示；检测铜绿假单胞菌的正向引物和反向引物序列如seq id no:22和seq id no:23所示，探针序列如seq id no:24所示；检测大肠杆菌的正向引物和反向引物序列如seq id no:25和seq id no:26所示，探针序列如seq id no:27所示。3.如权利要求1或2任意一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括内标，所述内标的正向引物和反向引物序列如seq id no:28和seq id no:29所示，探针序列如seq id no:30所示；优选的，所述探针的两端分别带有荧光基团和猝灭基团，所述荧光基团为fam、rox、vic、tet和cy5中的一种，所述猝灭基团为bhq1、bhq2、bhq3和mgbnfq中的一种。4.如权利要求1-3任意一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括pcr反应液，所述pcr反应液包括如下组分：tris-hcl ph＝8.5 10-100mm，kcl 1-50mm，mgcl
2 6-12mm，datp 0.5-2mm，dctp 0.5-2mm，dgtp 0.5-2mm，dutp 2-4mm,ssb 0.5-3.0mg/ml；优选的，所述pcr反应液包括如下组分：tris-hcl ph＝8.550mm，kcl 30mm，mgcl
2 7.5mm，datp 1mm，dctp 1mm，dgtp 1mm，dutp 2.5mm，ssb 2.0mg/ml。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括pcr酶液，所述pcr酶液包括如下组分：hot start taq 4u/test，ung 2u/test，anti taq4u/test，dtt 0.5mg/ml。6.一种采用如权利要求1-5任意一项所述试剂盒用于检测肺炎支原体、肺炎衣原体、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌九种病原体的用途。7.一种使用如权利要求1-5任意一项所述试剂盒的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
1)病原体提取；2)pcr扩增：pcr反应体系如下：pcr反应液8μl；pcr酶液2μl；每种病原体和内标的正向引物和反向引物浓度分别为400nm；探针浓度分别为200nm；病原体提取产物10μl。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述pcr扩增中，采用三个检测孔，三个检测孔分别检测不同的病原体。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：pcr扩增步骤具体为：在检测仪器中使用三个检测孔，第一孔中加入肺炎支原体，肺炎衣原体，金黄色葡萄球菌正反引物对和内标，第二孔中加入肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，肺炎克雷伯氏菌正反引物对和内标，第三孔中加入鲍曼不动杆菌，铜绿假单胞菌，大肠杆菌正反引物对和内标。

技术总结
本发明提供了一种检测九种病原体的试剂盒、用途以及使用方法，这种试剂盒能对肺炎支原体、肺炎衣原体、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌，所述试剂盒中包括检测九种病原体进行检测。采用本发明中的试剂盒，通过试剂盒中的引物探针、PCR反应液、PCR酶液以及其他成分的结合、协同，最后得到一种快速、灵敏度高、特异性好以及避免假阴性的检测九种病原体试剂盒；在使用本发明中试剂盒时，提取时加入内标，并且在检测时在检测的三个孔中都加入与检测病原体相互协同的内标，保证了提取的精准性以及很好的避免了检测的假阴性。阴性。


技术研发人员：周雪鹄 董璐
受保护的技术使用者：重庆中元汇吉生物技术有限公司
技术研发日：2020.04.01
技术公布日：2021/10/11