一株奥利万星中间体产生菌及其应用的制作方法

技术特征：
1.一株产生奥利万星中间体a82846b的菌株，该菌株的保藏编号为cgmccno.17931，其中，奥利万星中间体a82846b的结构式如式1所示：2.式1所示的奥利万星中间体a82846b的制备方法，其特征在于，将保藏编号为cgmcc no.17931菌株在不含速效有机氮源的贫培养基中进行发酵，从发酵液中获得奥利万星中间体a82846b。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述贫培养基包含下列组分(g/l)：速效碳源0～30，缓效碳源10～60，缓效氮源10～50。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，速效碳源选自：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖中的一种或多种；缓效碳源选自：麦芽糊精、玉米淀粉中的一种或多种；缓效氮源选自：大豆饼粉、棉籽饼粉、花生饼粉中的一种或多种。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，贫培养基包含下列组分(g/l)：葡萄糖10～30，麦芽糊精20～60，糖蜜10～30，棉籽饼粉10～50，优选为：葡萄糖20～30，麦芽糊精30～50，糖蜜15～25，棉籽饼粉10～20，ph 6.0～7.5。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，发酵温度为20～35℃，较佳的为25～30℃；发酵周期240～500小时，较佳的为288～360小时。7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，发酵在10l发酵罐中进行时，工艺参数为：起始装液量为4～7l，较佳的为4.5～6.0l；搅拌转速为200～1000rpm，较佳的为300～800rpm；通气量为0.3～1.0vvm，较佳的为0.5～1.0vvm；发酵液溶解氧水平为0～100％，较佳的为20～50％；发酵接种量为5～15％，较佳的为5～10％，发酵在30l发酵罐中进行时，工艺参数为：起始装液量为10～20l，较佳的为12～15l；搅拌转速为200～1000rpm，较佳的为200～700rpm；通气量为0.2～1.0vvm，较佳的为0.3～0.5vvm；发酵液溶解氧水平为0～100％，较佳的为20～30％；发酵接种量为5～15％，较佳的
为5～8％。8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将甘油管保藏的jh100-32b16b菌种转接到isp-2斜面上，置于28℃恒温恒湿培养箱中活化培养5～7d，挑取活化好的菌苔，转接到种子瓶中，种子瓶装液量为：250ml三角瓶内装30ml种子培养基，种子培养基配方为(g/l)：葡萄糖15，麦芽糊精15，水解酪蛋白3，酵母提取物3，ph 7.2，种子瓶在恒温摇床上28℃振荡培养48h，摇床转速200rpm，将成熟的种子转接到发酵摇瓶中，进行摇瓶发酵，摇瓶发酵培养基配方为(g/l)：葡萄糖30，麦芽糊精30，糖蜜25，棉籽饼粉10，ph 7.5，发酵瓶装液量为250ml三角瓶内装20ml培养基，发酵摇瓶接种量10％，发酵培养条件为28℃，恒温摇床转速200rpm，振荡培养7d。9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将甘油管保藏的jh100-32b16b菌种转接到isp-2斜面上，置于28℃恒温恒湿培养箱中活化培养5～7d；挑取活化好的菌苔，转接到种子瓶中；种子瓶装液量为500ml三角瓶内装125ml种子培养基，种子培养基配方为(g/l)：葡萄糖15，麦芽糊精15，水解酪蛋白3，酵母提取物3，ph 7.2，种子瓶在恒温摇床上28℃振荡培养48h，摇床转速200rpm，将成熟的种子转接到发酵罐中进行罐上发酵，发酵罐底料配方为(g/l)：葡萄糖30，麦芽糊精30，糖蜜25，棉籽饼粉10，ph 7.5，初始装液量为6l，将发酵培养基各组分投料后加入去离子水溶解，5n naoh溶液调节ph值为7.5，121℃灭菌30min后冷却到室温等待接种；发酵罐接种量8～10％，发酵温度28℃，起始搅拌转速300rpm，起始通气量0.5vvm，此后根据溶氧情况逐步上调搅拌转速和通气量，发酵运行48h开始启动补料；补料配方为：糖蜜30％、蔗糖10％、蛋白胨20％；补料方式为恒速流加，速率100ml/d，主发酵运行384h后放罐，采用hplc检测目标产物a82846b的浓度。10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将甘油管保藏的jh100-32b16b菌种转接到isp-2斜面上，置于28℃恒温恒湿培养箱中活化培养5～7d；挑取活化好的菌苔，转接到种子瓶中；种子瓶装液量为1l三角瓶内装250ml种子培养基，种子培养基配方为(g/l)：葡萄糖15，麦芽糊精15，水解酪蛋白3，酵母提取物3，ph 7.2，种子瓶在恒温摇床上28℃振荡培养48h，摇床转速200rpm，将成熟的种子转接到发酵罐中进行罐上发酵，发酵罐底料配方为(g/l)：葡萄糖30，麦芽糊精30，糖蜜25，棉籽饼粉10，ph7.5，主发酵罐初始装液量为16l，将发酵培养基各组分投料后加入去离子水溶解，5n naoh溶液调节ph值为7.5，121℃灭菌30min后冷却到室温等待接种；本次接种量1l种子液，发酵温度28℃，起始搅拌转速300rpm，起始通气量0.5vvm，此后根据溶氧情况逐步上调搅拌转速和通气量，发酵运行48h开始启动补料；补料配方为：糖蜜30％、蔗糖10％、蛋白胨20％；补料方式为do关联，维持do在10～30％区间，主发酵运行312h后放罐，采用hplc检测目标产物a82846b的浓度。

技术总结
本发明公开了一株奥利万星中间体(A82846B)产生菌及其应用。所述奥利万星中间体的产生菌荒漠拟孢囊菌JH100-32B16B，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.17931。所述发酵方法为将所述的荒漠拟孢囊菌CGMCC No.17931在发酵培养基中发酵，从而产生奥利万星中间体的方法。采用该产生菌及其相应的发酵工艺能够在30L发酵罐上，采用低成本配方的发酵培养基，实现A82846B发酵效价1450mg/L，发酵成本比对照工艺降低90％以上；且“杂质-产物比”(A/B比值)低至1.5～2.0，比对照水平降低一半以上，有利于简化产物提取流程，降低提取成本。两方面优势相结合，使A82846B的综合生产成本显著低于现有文献报道的对照工艺水平。现有文献报道的对照工艺水平。现有文献报道的对照工艺水平。


技术研发人员：赵宏程 陈义朗 郭文清
受保护的技术使用者：上海键合医药科技有限公司
技术研发日：2020.04.07
技术公布日：2021/10/11