一种极端生境生物有机肥菌株筛选方法及菌剂复配工艺与流程

技术特征：
1.一种极端生境生物有机肥菌株筛选方法，其特征在于，包括下列步骤：s1：菌种选取，在自然环境温度
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23℃的极端生境下，从禽畜养殖场粪土堆底部土壤中采集土壤样本，取10g土壤样本过20目筛，加入90毫升灭菌水搅拌制成土壤悬液，通过梯度稀释法，将土壤悬液稀释至105～107倍，分别将105～107稀释液涂布于培养皿内；s2：菌种培养，将s1步骤中涂抹了土壤悬液的培养皿置于35
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39℃恒温箱内恒温暗光培养，每天通过显微镜观察并记录生长状况，扩大培养5
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9天；s3：菌种测序，分别将s2中培养的各种菌种进行16s rrna基因测序，并将测序结果与blast对比；s4：菌种分离，去除致病菌种，筛选得到目标菌株，分别为特基拉芽孢杆菌gsicc30298(序列如seq id no.1所示)、特基拉芽孢杆菌gsicc32846(序列如seq id no.2所示)、蜡样芽孢杆菌gsicc30299(序列如seq id no.3所示)、苏云金芽孢杆菌gsicc32845(序列如seq id no.4所示)、贝莱斯芽孢杆菌gsicc32847(序列如seq id no.5所示)。2.根据权利要求1所述的一种极端生境生物有机肥菌株筛选方法，其特征在于，所述培养皿内为pda培养基。3.一种极端生境生物有机肥菌株的菌剂复配工艺，其特征在于，包括以下步骤：s1：材料准备，土样收集，在冬季气温寒冷时收集土样1和土样2；土样1，按照权利要求1中s1的方法收集土样1，并涂抹于培养皿中；土样2，于未开发利用的荒地采集土样2，过筛、制作土壤悬液并涂抹于另一培养皿中；培养基制备，无机氮基本培养基：nh4h2po
4 1g，kno
3 1g，(nh4)2so
4 0.5g，k2hpo
4 1g，nacl 5g，mgso4 0.2g，琼脂粉20g，蒸馏水1000ml，ph自然；培养基1：基本培养基 葡萄糖(每升培养基中含碳量为15mg)；培养基2：基本培养基 蔗糖(每升培养基中含碳量为15mg)；培养基3：基本培养基 柠檬酸(每升培养基中含碳量为15mg)；培养基4：nh4h2po
4 0.2g，mgso
4 0.2g，nacl 0.2g，caso
4 0.2g，caco
3 5g，葡萄糖(每升培养基中含碳量为15mg)；琼脂粉11g，蒸馏水1000ml，ph 7.0
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7.2；s2：菌株的分离纯化，采用梯度稀释法，将两种土样经过无菌生理盐水稀释后，分别涂布于上述培养基中，在37℃下培养，待菌落长出后分别挑取单菌落，分离纯化后保藏，土样1中得到如权利要求1中s4步骤中的目标菌株；s3：菌株低营养环境的生长研究，将筛选出的菌株分别接种到不同稀释倍数(稀释倍数为10、100、1000、10000倍)的牛肉膏蛋白胨培养基中，接种量均为106cfu/ml，在相同的条件下培养，每隔一段时间检测活菌数，观察菌数在不同浓度稀释培养基中的变化，筛选出低营养菌株；s4：菌种鉴定，提取筛选出低营养菌株dna，采用16s rrna特异区进行pcr，产物送测后blast比对，鉴定出各菌株种属；s5：菌株理化特性研究，对分离出的低营养菌株在不同ph值、温度，不同碳源、氮源进行研究，为菌株中试生产降低成本提供理论数据；s6：菌株功能性研究，对分离出的低营养菌株分泌吲哚乙酸、溶磷解钾、acc脱氨酶活性及固氮能力等进行测定，明确菌株对植物的促生效应；s7：菌株复配，将两个土样中取得的目标菌株交叉组合，检测菌株之间的拮抗作用，根
据菌株在低营养条件下的生长情况、菌株理化性质的区别以及菌株功能性特点，选择发酵启动温度低的菌株复配组合，在中试工艺中优化组合比例，最终形成一种低营养低发酵启动温度的生物有机肥发酵复配菌剂生产工艺。

技术总结
本发明公开了一种极端生境生物有机肥菌株筛选方法，包括下列步骤：S1：菌种选取，在外界环境温度


技术研发人员：季彬 彭轶楠 王治业 叶泽 杜津昊 祁宏山 席鹏
受保护的技术使用者：甘肃省科学院生物研究所
技术研发日：2021.08.12
技术公布日：2021/10/29