一种无蛋白、无DMSO细胞冻存液、应用及其制备方法与流程

技术特征：
1.一种无蛋白、无dmso细胞冻存液，其特征在于，所述的细胞冻存液由多种成分组成，包括：多种氨基酸、多种维生素、多种无机盐、蔗糖、丙二醇、羧甲基纤维素钠；所述细胞冻存液每1000ml 中包括水及以下组分：二水合氯化钙0.1
‑
0.4g、氯化钾0.1
‑
0.4g、氯化钠3
‑
10g、无水磷酸氢二钠0.05
‑
0.1g、一水合磷酸二氢钠0.01
‑
0.1g、七水合硫酸锌0.0001
‑
0.001g、碳酸氢钠1
‑
4g、d
‑
葡萄糖1
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6g、丙酮酸0.01
‑
0.15g、dl
‑
硫辛酸0.0001
‑
0.001g、1,4
‑
丁二胺双盐酸盐0.00001
‑
0.0001g、亚油酸0.00001
‑
0.0001g、l
‑
丙氨酸0.01
‑
0.08g、l
‑
丙氨
‑
l
‑
谷氨酰胺0.1
‑
1g、l
‑
精氨酸盐酸盐0.07
‑
0.3g、l
‑
天冬酰胺0.01
‑
0.1g、l
‑
天冬氨酸0.06
‑
0.3g、l
‑
天冬酰胺甲酯盐酸盐0.01
‑
0.15g、l
‑
胱氨酸盐酸盐0.01
‑
0.08g、l
‑
半胱氨酸盐酸盐一水物0.01
‑
0.04g、l
‑
谷氨酸0.005
‑
0.03g、甘氨酸0.01
‑
0.1g、l
‑
组氨酸盐酸盐一水物0.01
‑
0.1g、l
‑
异亮氨酸0.01
‑
0.2g、l
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亮氨酸0.01
‑
0.2g、l
‑
赖氨酸盐酸盐0.01
‑
0.2g、l
‑
蛋氨酸0.001
‑
0.03g、l
‑
苯丙氨酸0.01
‑
0.06g、l
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脯氨酸0.01
‑
0.06g、l
‑
丝氨酸0.01
‑
0.07g、l
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苏氨酸0.01
‑
0.1g、l
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色氨酸0.001
‑
0.1g、l
‑
酪氨酸二钠盐二水合物0.01
‑
0.5g、l
‑
缬氨酸0.01
‑
0.1g、l抗坏血酸钠0.01
‑
0.5g、d
‑
生物素0.0001
‑
0.005g、氯化胆碱0.001
‑
0.05g、叶酸0.001
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0.01g、肌醇1
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20g、烟酰胺0.0005
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0.005g、维生素b12 0.0001
‑
0.005g、d
‑
泛酸钙0.0005
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0.005g、盐酸吡哆醛0.0005
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0.005g、盐酸吡哆醇0.00001
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0.0001g、核黄素0.00005
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0.0005g、盐酸硫铵0.0005
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0.005g、次黄嘌呤0.0001
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0.005g、蔗糖10
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100g、丙二醇20
‑
200g、羧甲基纤维素钠0.5
‑
5g。2.根据权利要求1所述的一种无蛋白、无dmso细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液各成分组成为：每1000ml 细胞冻存液中包括水及以下组分：二水合氯化钙0.2g、氯化钾0.2g、氯化钠6.8g、无水磷酸氢二钠0.1g、一水合磷酸二氢钠0.0543g、七水合硫酸锌0.000432g、碳酸氢钠1.8g、d
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葡萄糖2g、丙酮酸0.06g、dl
‑
硫辛酸0.00015g、1,4
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丁二胺双盐酸盐0.000081g、亚油酸0.000042g、l
‑
丙氨酸0.034g、l
‑
丙氨
‑
l
‑
谷氨酰胺0.54253g、l
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精氨酸盐酸盐0.1475g、l
‑
天冬酰胺0.04g、l
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天冬氨酸0.13g、l
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天冬酰胺甲酯盐酸盐0.075g、l
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胱氨酸盐酸盐0.025g、l
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半胱氨酸盐酸盐一水物0.02g、l
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谷氨酸0.0147g、甘氨酸0.04g、l
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组氨酸盐酸盐一水物0.03148g、l
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异亮氨酸0.055g、l
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亮氨酸0.055g、l
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赖氨酸盐酸盐0.08g、l
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蛋氨酸0.016g、l
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苯丙氨酸0.034g、l
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脯氨酸0.029g、l
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丝氨酸0.036g、l
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苏氨酸0.05g、l
‑
色氨酸0.01g、l
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酪氨酸二钠盐二水合物0.054g、l
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缬氨酸0.049g、l抗坏血酸钠0.1g、d
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生物素0.0002g、氯化胆碱0.009g、叶酸0.0018g、肌醇20g、烟酰胺0.0015g、维生素b12 0.001g、d
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泛酸钙0.0015g、盐酸吡哆醛0.0015g、盐酸吡哆醇0.000031g、核黄素0.00015g、盐酸硫铵0.0016g、次黄嘌呤0.0021g、蔗糖50g、丙二醇50g、羧甲基纤维素钠2g。3.根据权利要求1或2所述的一种无蛋白、无dmso细胞冻存液，其特征在于，所述无蛋白、无dmso细胞冻存液的ph为7.0
‑
7.4。4.根据权利要求1或2所述的一种无蛋白、无dmso细胞冻存液的应用，其特征在于，用于哺乳动物细胞的保存。5.一种无蛋白、无dmso细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1 在无菌环境中称取丙酮酸0.6g、dl
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硫辛酸0.0015g、1,4
‑
丁二胺双盐酸盐0.00081g、亚油酸0.00042g、l
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丙氨酸0.34g、l
‑
丙氨
‑
l
‑
谷氨酰胺5.4253g、l
‑
精氨酸盐酸盐1.475g、l
‑
天冬酰胺0.4g、l
‑
天冬氨酸1.3g、l
‑
天冬酰胺甲酯盐酸盐0.75g、l
‑
胱氨酸盐酸盐0.25g、l
‑
半胱氨酸盐酸盐一水物0.2g、l
‑
谷氨酸0.147g、甘氨酸0.4g、l
‑
组氨酸盐酸盐一水
合物0.3148g、l
‑
异亮氨酸0.55g、l
‑
亮氨酸0.55g、l
‑
赖氨酸盐酸盐0.8g、l
‑
蛋氨酸0.16g、l
‑
苯丙氨酸0.34g、l
‑
脯氨酸0.29g、l
‑
丝氨酸0.36 g、l
‑
苏氨酸0.5g、l
‑
色氨酸0.1g、l
‑
酪氨酸二钠盐二水合物0.54g、l
‑
缬氨酸0.49g、l抗坏血酸钠1g、d
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生物素0.002g、氯化胆碱0.09g、叶酸0.018g、烟酰胺0.015g、维生素b12 0.01g、d
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泛酸钙0.015g、盐酸吡哆醛0.015g、盐酸吡哆醇0.00031g、核黄素0.0015g、盐酸硫铵0.016g、次黄嘌呤0.021g，加无菌水定容至100ml，配制为100倍混合储液；s2 向烧杯中加入适量的注射水，依次加入二水合氯化钙0.2g、氯化钾0.2g、氯化钠6.8g、无水磷酸氢二钠0.1g、一水合磷酸二氢钠0.0543g、七水合硫酸锌0.000432g、碳酸氢钠1.8g，并用磁力搅拌器搅拌溶解，得到mix1溶液；s3 向溶解后的上述mix1溶液中加入d
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葡萄糖2g和肌醇20g，并用磁力搅拌器搅拌溶解，得到mix2溶液；s4 取10ml上述s1步骤配制好的100倍混合储液添加至上述mix2溶液中，得到mix3溶液；s5 将羧甲基纤维素钠2g、蔗糖50g、丙二醇50g依次加入上述mix3溶液中，磁力搅拌器搅拌至完全溶解，并调节ph在6.9
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7.2以内，定容至1000ml，得到mix4溶液；s6 采用0.2μm过滤器过滤上述mix4溶液，使ph保持在7.0
‑
7.4以内，得到一种无蛋白、无dmso细胞冻存液。

技术总结
本发明涉及一种无蛋白、无DMSO细胞冻存液、应用及其制备方法，所述的细胞冻存液包含多种氨基酸、多种维生素、多种无机盐、糖类、多元醇、有机大分子化合物。所述的细胞冻存液成分简单明确，成本低廉，且采用了安全性较高的大分子化合物、糖类、多元醇联合其他成分，保护细胞在低温及超低温状态下的高效保存，成分明确、稳定且无蛋白成分，可避免临床应用中可能引起的免疫反应，提高安全性，且本品普遍适用于多种类型细胞的冷冻存储。本发明还提供了一种细胞冻存液的应用方法，用本发明冻存液保存的细胞，短期冻存一个月后复苏细胞，细胞活率可保持95%以上，保存一年以后复苏，细胞活率仍然可达90%以上，且细胞活性和功能不受影响。且细胞活性和功能不受影响。且细胞活性和功能不受影响。


技术研发人员：于宝利 陈旭 陈刚
受保护的技术使用者：依科赛生物科技（太仓）有限公司
技术研发日：2021.09.07
技术公布日：2021/10/23