一种生蚝叶组培芽繁殖方法与流程

1.本发明涉及生蚝叶的培养繁殖的技术领域，公开了一种生蚝叶组培芽繁殖方法。


背景技术：

2.生蚝叶(mertensia maritime)又名牡蛎叶(oyster leaf)，是紫草科海滨草属，原产于北半球温带至寒带如北欧挪威及冰岛、东北亚如俄罗斯和日本北海道等滨海砾石或鹅卵石滩耐高寒多年生植物一个非常独特的物种在海边的金色沙滩卵石滩。其叶片多汁，白霜，蓝绿色的叶子和小、尖、钟状、粉红色到蓝色的花朵，生长习性匍匐，开花于6月中旬到8月。因生蚝叶具有似牡蛎风味而可作为生蚝之替代品，多被应用于法国菜之沙拉或前菜中。然而生蚝叶除了具备特殊风味外，还具高锌含量特性。
3.目前，国内生蚝叶种植较少，主要以户外栽培为主。户外种植，其生长周期受外界气候条件限制，病虫害多，洁净度差。植物工厂栽培生蚝叶很好的发挥工厂的优势——可周年生产、极为洁净且无病虫害等影响。但其繁殖也是一大问题，需要人工授粉，且种子发芽率低，不耐储存。


技术实现要素：

4.为此，需要提供一种生蚝叶组培芽繁殖方法，解决现有国内生蚝叶种植繁殖困难，人工种植，种植发芽率低的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供了一种生蚝叶组培芽繁殖方法，包括如下步骤：
6.(1)选取组培的生蚝叶的外植体，清洗生蚝叶的外植体，在超净工作台内将洗好的外植体依次进行在75％酒精中振动漂洗、在0.1％升汞溶液中浸泡震荡、在无菌水中震荡浸泡、之后将外植体接种于无菌芽培养基进行培养，得到生蚝叶无菌芽，所述无菌芽培养基包括如下组分：b5培养基、0.5
‑
1.5mg/l6
‑
ba、0.1
‑
0.5mg/l naa、7g/l琼脂、30g/l蔗糖；
7.(2)在超净工作台内将培养获得的生蚝叶无菌芽接种于增殖培养基，得到继代培养的无菌苗，增殖培养基包括如下组分：b5培养基、0.5mg/l 6
‑
ba、0
‑
0.1mg/l naa、7g/l琼脂、30g/l蔗糖；
8.(3)在超净工作台内取出继代培养的无菌苗，切割分离进行分株处理，再分别接种于生根培养基，获得带根的生蚝叶幼苗，所述生根培养基包括：1/4b5培养基或1/2b5培养基或b5培养基、0.2
‑
1.0mg/l iba、7g/l琼脂、30g/l蔗糖；
9.进一步，所述生蚝叶的外植体为生蚝叶分蘖芽。
10.进一步，步骤(1)中外植体依次在75％的酒精震荡漂洗45s，升汞溶液中浸泡震荡45s，无菌水中震荡浸泡30s。
11.进一步，所述无菌芽培养基中含有：1.5mg/l 6
‑
ba、和0.2mg/l naa。
12.进一步，所述增殖培养基含有0.05mg/l naa。
13.进一步，所述生根培养基包括如下组分：1/4b5培养基、0.5mg/l iba、7g/l琼脂、30g/l蔗糖。
14.进一步，所述步骤1
‑
3的培养条件为：置于18
‑
24℃，光照强度2000lx、光周期12h的培养室。
15.上述技术方案具有以下有益效果：
16.本发明中，在室内模拟气候和光照环境下进行生蚝叶的组培繁殖，解决了生蚝叶生长受季节气候的限制，可实现周年不间断繁殖，其培养过程如下：无菌芽培养
→
芽增殖培养
→
生根培养
→
完整植株，能够快速繁殖优质无菌种苗，既可以快速育苗，又可以克服生蚝叶种子萌发率低繁殖难以及长时间营养生长植株老化的问题，使生蚝叶品种和优良特性得以保存，且可实现生蚝叶全年周期性生产。
附图说明
17.图1
‑
9为具体实施方式所述实施例1中试验组1
‑
9的培养情况。
18.图10为具体实施方式所述实施例3中试验组5的生根情况。
19.图11为具体实施方式所述实施例4进行分栽育苗后的生蚝叶。
具体实施方式
20.为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。
21.实施例1：生蚝叶无菌芽的培养，并对外植体进行优选，
22.(1)以外植体、培养基、6
‑
ba、naa进行四因素三水平的正交试验。
23.四因素：外植体、培养基、6
‑
ba、naa。
24.三水平：外植体选择1(分蘖芽)、2(叶片)、3(种籽)3个不同部位；培养基选址1(ms)、2(改良ms)、3(b5)3个不同培养基；6
‑
ba选择1(0.5mg/l)、2(1.0mg/l)、3(1.5mg/l)3个不同浓度；naa选择1(0.1mg/l)、2(0.2mg/l)、3(0.5mg/l)3个不同浓度。通过以上正交设计进行初步筛选适宜外植体、培养基、6
‑
ba、naa。一个处理3瓶，重复3次。
25.(2)将生蚝叶种籽、叶片、分蘖芽冲洗干净，置于75％酒精震荡漂洗45s，0.1％升汞溶液中浸泡震荡45s，无菌水中震荡浸泡60s，再分别接种于不同培养基配方 7g/l琼脂 30g/l蔗糖 0.1g/l肌醇，具体试验设计见表1。(3)如表2
‑
1所示，共9个处理)，每瓶接种1个外植体。置于24℃，光照强度2000lx、光周期12h/d的培养室中培养。
26.(3)图1
‑
9为上述试验组1
‑
9培养的无菌芽的图片，从生蚝叶的分蘖芽、叶片和种籽生长情况的试验结果可见，生蚝叶的分蘖芽为其生蚝叶芽培养的较佳外植体。其中生蚝叶的芽培养的试验组7芽的生长状态较好且有一定的增殖效果。因此得出生蚝叶无菌芽培养的较佳配方为：b5培养基 1.5mg/l6
‑
ba 0.2mg/l naa 7g/l琼脂 30g/l蔗糖
27.因此，本发明中，优选的，生蚝叶的组培的外植体为分孽芽，培养基中6
‑
ba用量为1.5mg/l；naa用量为0.2mg/l。
28.表1外植体选择的实验设置
[0029][0030]
实施例2：芽增殖培养
[0031]
(1)取实施例1中试验组7得到的生蚝叶无菌芽，进行分株处理，再分别接种于不同培养基配方 7g/l琼脂 30g/l蔗糖，1个组培瓶接1个芽，具体试验设计见表3，于18℃、光照强度2000lx、光周期12h/d的培养室中培养,定期观察生长情况。
[0032]
表2，芽增殖培养条件
[0033]
试验组营养液6
‑
bamg/lnaamg/l培养温度℃yb1b50.50.0524yb2b50.50.124yb3b50.5024yb4b50.50.0518
[0034]
(2)实验结果
[0035]
接种30d后，统计各试验组的增殖芽数，并进行分株处理，统计各试验组的增殖倍数及有效芽数(因生蚝叶属于基生叶，若芽增殖中生长较弱的芽在分株过程中极易受损，不能进行下一步培养使用的芽即为无效芽)，详见表3。
[0036]
表3，实施例2的实验结果。
[0037][0038]
由表3可知，4个试验组中yb4增殖倍数最高，有效芽数最高，且不发生玻璃化。分株较易。综上，诱导生蚝叶芽增殖培养的较佳配方和温度条件为：b5 0.5mg/l6
‑
ba 0.05mg/l naa 7g/l琼脂 30g/l蔗糖 18℃培养。
[0039]
实施例3：生根培养
[0040]
表4，生根培养处理表。
[0041]
试验组营养液iba(mg/l)11/2b50.221/2b50.531/2b51.041/4b50.251/4b50.561/4b51.07b50.28b50.59b51.0
[0042]
取实施例2中yb4试验组得到的无菌苗，在超净工作台内进行分株处理，再分别接种于不同培养基配方 7g/l琼脂 30g/l蔗糖，1个组培瓶接1个芽，具体试验设计见表4，于光照强度2000lx、光周期12h/d、温度18℃的培养室中培养,定期观察生长情况。
[0043]
实验结果如表5所示，诱导生蚝叶芽生根方面，综合考虑芽的徒长情况、根长和生根率情况，获得较优培养基配方和温度条件：1/4b5 0.2
‑
0.5mg/l iba 7g/l琼脂 30g/l蔗糖 18℃培养，如图10所示，显示了试验组5的生根情况。
[0044]
表5.生蚝叶芽生根处理结果。
[0045]
实验组株高/cm根长/cm生根率/％15.96
±
0.964.83
±
3.415027.2
±
1.037.16
±
2.5441.1637
±
1.616.06
±
1.566.6745.7
±
1.314
±
0.897556.56
±
0.455.16
±
1.1266.6765.9
±
1.145.83
±
1.1258.33
78.33
±
0.936
±
0.7758.3387.8
±
0.477.5
±
3.495097.33
±
1.85.83
±
3.3541.16
[0046]
实施例4
[0047]
取出带根的生蚝叶幼苗进行洗根，移栽置栽培板上进行炼苗、育苗，分栽培养(如图10所示)，即可收得生蚝叶产品。
[0048]
本发明中，优选的以生蚝叶的分蘖芽(侧芽或腋芽)作为材料，探索了其组培各阶段的最佳生长条件，建立起生蚝叶的组培快繁体系，通过本发明方法的组培方法，无菌苗和芽增殖步骤中能够高倍数的得到生长良好的优质无菌种苗，之后生根培养能够得到生根率高、根系长度较长的植株，有利于后续栽培的成功率。
[0049]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括
……”
或“包含
……”
限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者终端设备中还存在另外的要素。此外，在本文中，“大于”、“小于”、“超过”等理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等理解为包括本数。
[0050]
尽管已经对上述各实施例进行了描述，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，所以以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利保护范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。