莱姆病螺旋体的巢式荧光定量PCR检测方法与流程

技术特征：
1.用于检测莱姆病螺旋体的巢式pcr引物，其特征在于，包括第一轮pcr引物和第二轮pcr引物；第一轮pcr引物包括上游引物f1：5
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cgaccttcttcgccttaaagc
‑3’
和下游引物r1：5
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taagctgactaatactaattaccc
‑3’
；第二轮pcr引物包括上游引物f2：5
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ctgcgagttcgcgggagag
‑3’
和下游引物r2：5
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aagctcctaggcattcaccata
‑3’
。2.与权利要求1所述巢式pcr引物配合使用的探针，其特征在于，探针p的序列为5
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tgaccatatttttatcttcc
‑3’
；其中，探针p的5’端带有荧光基团，3’带有荧光淬灭基团。3.含有权利要求1所述巢式pcr引物和权利要求2所述探针的检测试剂或试剂盒。4.莱姆病螺旋体的巢式荧光定量pcr检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取样本中的dna；2)以步骤1)中提取的dna为模板，利用第一轮pcr引物进行pcr扩增反应；3)以步骤2)的扩增产物为模板，利用第二轮pcr引物和探针进行pcr扩增反应；4)分析pcr产物；所述第一轮pcr引物、第二轮pcr引物来自权利要求1所述的巢式pcr引物；所述探针同权利要求2所述的探针；所述方法为非疾病诊断目的。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中，pcr反应体系为：反应混合液10μl，10μm上、下游引物各0.5μl，dna模板4μl，去离子水5μl；pcr反应程序为：94℃2min，52
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55℃1min，72℃2min，1个循环；94℃45s，55℃45s，72℃45s，33个循环；94℃45s，52
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55℃45s，72℃2min，1个循环。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)中，pcr反应体系为：反应混合液10μl，10μm上、下游引物各0.4μl，10μm探针0.4μl，步骤2)的扩增产物2μl，水6.8μl；pcr反应程序为：94℃2min；94℃10s，58
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60℃30s，40个循环。

技术总结
本发明提供一种莱姆病螺旋体的巢式荧光定量PCR检测方法。本发明以rrf


技术研发人员：郝琴 万康林 季绍有 范雪婷 侯学霞 张琳
受保护的技术使用者：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
技术研发日：2021.08.12
技术公布日：2021/10/19