高效合成不同来源的血红或肌红蛋白的酿酒酵母菌株的构建及其应用的制作方法

技术特征：
1.重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母利用组成型或诱导型表达载体表达了异源的血红蛋白或肌红蛋白。2.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述血红蛋白来源于大豆、三叶草、猪或牛，所述肌红蛋白来源于猪或牛。3.根据权利要求2所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述来源于猪和牛的血红蛋白包括α亚基和β亚基，并利用组成型或诱导型表达载体表达、或在酿酒酵母基因组整合表达血红蛋白α亚基的稳定蛋白ahsp。4.根据权利要求3所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述组成型表达载体包括但不限于pesc；所述诱导型表达载体包括但不限于py26
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tef
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gpd或pxy212。5.根据权利要求4所述的重组酿酒酵母，其特征在于，利用不同强度的启动子表达血红蛋白α亚基的稳定蛋白ahsp；所述启动子包括但不限于gal、tdh1或tef1。6.根据权利要求2所述的重组酿酒酵母，其特征在于，敲除宿主基因组中的gal80基因，所述gal80基因的genbank号854954。7.生产肌红蛋白或血红蛋白的方法，其特征在于，利用权利要求1～6任一所述重组酿酒酵母，在外源添加了血红素浓度为2～10ug/ml的培养基中发酵生产肌红蛋白或血红蛋白，所述培养基包括但不限于ynb或ypd培养基。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将所述重组酿酒酵母接种至发酵体系中，使得菌浓为1.0
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105～1.0
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107cfu/ml的菌体细胞，在25～35℃、200～250rpm下发酵。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，若所述重组酿酒酵母未敲除gal80基因，在发酵15～20h时，向发酵体系中添加1～5％的半乳糖进行诱导。10.权利要求1～6任一所述重组酿酒酵母在生产血红蛋白及其衍生物、或肌红蛋白及其衍生物中的应用。

技术总结
本发明公开了高效合成不同来源的血红或肌红蛋白的酿酒酵母菌株的构建及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通选取合适的表达载体、伴侣蛋白以及启动子，并对宿主进行改造，在酿酒酵母中实现了不同来源的血红蛋白或肌红蛋白的异源表达，保障了血红蛋白和肌红蛋白的安全性，并获得了血红蛋白或肌红蛋白的高效生产，解决了之前报道中表达宿主不是食品级宿主的安全隐患。在摇瓶水平，所得大豆血红蛋白产量至少可达120mg L


技术研发人员：赵鑫锐 薛技科 毛炳杰 孙小焱 王淼 周景文 堵国成 陈坚 李江华
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：2021.07.09
技术公布日：2021/10/26