一种复合芽苗发酵液及其制备方法与流程

1.本发明涉及一种复合芽苗发酵液及其制备方法，属于农产品加工技术领域。


背景技术：

2.植物活性成分是指构成植物体除水分、糖类、蛋白质类、脂肪类等必要物质以外的成分，还包括其次生代谢产物，如多酚类、黄酮类、生物碱、甾体、木质素、皂苷类等。植物活性成分来源丰富，广泛存在于植物的叶、木、皮、果内，其成分安全可靠且活性显著。植物中所含有的多酚类、挥发性油、生物碱、多糖等活性成分普遍具有良好的抗氧化、消除自由基、抗癌、消炎等生理活性。但是这些活性成分在不同植物中，甚至同一植物不同部位间含量差异很大，也受地域影响。
3.活性成分用途广泛、市场广阔，但是现有工业化生产多为传统提取技术，普遍存在低效益、高能耗等缺点，这造成了资源的极大浪费。而生物发酵技术作为高新技术，很大程度上改变了这种耗能高、污染大的生产模式。该方法主要以含淀粉(或糖类)的农副产品为原料，通过发酵技术和现代生物技术相结合的方式，在生物细胞或酶的催化作用下实现物质的加工与转化，从而生产高附加值产品。生物发酵技术，不仅能大规模地制取多种植物活性成分，而且不会降低其活性。
4.本发明首次通过内生菌液体发酵手段以及发酵条件的探索优化，获得植物活性成分含量丰富的发酵液，为植物资源资源的深加工及功能性食品、保健品、化妆品的开发提供新的有效途径。


技术实现要素：

5.本发明的首要目的是提供一种复合芽苗发酵液及其制备方法，以小麦、麻豌豆、西兰花三种原料的芽苗为原料，以从小麦、麻豌豆、西兰花芽苗中分离纯化的内生菌为发酵菌种，进行液体发酵制备植物活性成分。在一定培养条件下，使发酵液中含有丰富的营养素和活性成分，包括：木犀草素、山奈酚、芹菜素、芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸、芦丁等功能性成分。这些功能成分能补充人体所需的一些营养素，还具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗菌等多种功效，并且能起到护肤美容的良好功效，可以用作化妆水、食品、以及饮料等的调配液。
6.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种复合芽苗发酵液的制备方法，包括以下步骤：
8.在无菌条件下，将培育好的小麦、麻豌豆、西兰花三者的芽苗混合，接种发酵菌株，液体培养，即获得发酵液。
9.进一步地，所述的制备方法，所述的发酵菌株包括：保藏编号为cctcc no:m2021054的根瘤菌(rhizobium sp.)dy4和保藏编号为cctcc no:m 2021055的芽孢杆菌(bacillus sp.)fy4。
10.上述的发酵菌种根瘤菌、芽孢杆菌是从小麦、麻豌豆、西兰花芽苗菜中分离纯化的
内生菌。
11.进一步地，所述的制备方法，dy4:fy4比例为0.5
‑
1.5：0.5
‑
1.5；优选dy4:fy4＝1:1。
12.进一步地，所述的制备方法，小麦、麻豌豆、西兰花三者芽苗的质量比例为小麦50％
‑
70％、麻豌豆20％
‑
30％、西兰花10％
‑
20％，优选小麦68％
‑
70％、麻豌豆20％
‑
22％、西兰花10％
‑
12％，进一步优选：小麦69.8％、麻豌豆20％、西兰花10.2％。
13.进一步地，所述的制备方法，发酵体系中的固液比1：2
‑
1：6，菌株接种量1％
‑
5％，菌浓107‑
10
10
cfu/ml。
14.包括但不限于加入无菌水进行发酵。
15.进一步地，所述的制备方法，发酵体系中的固液比(即料液比)1：(4.5
‑
5)，优选1：4.78，菌株接种量3
‑
3.5％，优选3.12％。
16.进一步地，所述的制备方法，在24
‑
40℃，优选34
‑
36℃,进一步优选35.43℃，发酵培养24
‑
72h，优选57
‑
60h，进一步优选58.11h；即获得发酵液。
17.进一步地，所述的制备方法，发酵前将小麦、麻豌豆、西兰花的芽苗去根，无菌水清洗沥干。
18.上述方法中发酵物料占摇瓶体积的40％，如若使用发酵罐则占60％。
19.本发明还提供了一种上述方法制备的复合芽苗发酵液。
20.本发明还提供了一种根瘤菌(rhizobium sp.)dy4，保藏编号为cctcc no:m 2021054。以及一种芽孢杆菌(bacillus sp.)fy4，保藏编号为cctcc no:m2021055。
21.本发明根瘤菌(rhizobium sp.)dy4保藏信息如下：
22.保藏单位：中国典型培养物保藏中心(cctcc)
23.保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学
24.保藏日期：2021年1月13日
25.保藏编号：cctcc no:m 2021054
26.分类命名：根瘤菌dy4 rhizobium sp.dy4
27.本发明芽孢杆菌(bacillus sp.)fy4保藏信息如下：
28.保藏单位：中国典型培养物保藏中心(cctcc)
29.保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学
30.保藏日期：2021年1月13日
31.保藏编号：cctcc no:m 2021055
32.分类命名：芽孢杆菌fy4 bacillus sp.fy4
33.本发明的有益效果在于：
34.(1)本发明选择小麦营养物质丰富；麻豌豆具有抗菌消炎、抗癌防癌，增强新陈代谢等作用；西兰花各成分比其他蔬菜全面且含量高。本发明采用生物发酵法进行多种植物芽苗混合发酵，通过控制发酵配方和条件来优化整个生产过程。利用数学模型拟合与回归方程分析能得到各原料配比，使目标产物含量达到最优水平。
35.(2)本发明技术方案的发酵温度、发酵时间、料液比、接种量等发酵条件也影响着复合发酵液中活性成分含量，经优化后，适宜的发酵温度和时间能加速微生物的繁殖，自身代谢的同时利用芽苗释放内源活性成分，增加生物活性成分含量；适宜的料液比能给微生
物代谢和生物活性成分提供水环境，保持各物质活性；而以芽苗为营养物质的发酵，适宜的接种量能够有效地利用生物质。
36.(3)本发明的生产方法简单绿色，效率高、效益好，生产的复合发酵液富含营养素和活性成分，能补充人体所需的一些营养素，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗菌等多种功效，并且还有护肤美容的良好功效，可以用作化妆水、食品、以及饮料等的调配液，对补充人体营养，对预防疾病，促进身体的健康有一定意义。
具体实施方式
37.以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。
38.本发明中小麦、麻豌豆和西兰花三种芽苗的培育过程，即培养步骤如下：1.选种(颗粒大小一致、成熟饱满)；2.消毒浸种(小麦温汤浸种法联合5％奥克泰士d10处理8h，麻豌豆最适物理消毒为温汤浸种10min，西兰花最适物理消毒为紫外消毒处理10min联合1％奥克泰士d10处理6h。)；3.人工气候培养箱培育；4.取样：收割根部2～3cm以上苗菜。
39.小麦培养条件为：浸泡温度20
‑
40℃，浸泡时间6h、发芽温度28℃、发芽时间5d。麻豌豆培育条件为：浸泡温度30℃、浸泡时间8h、发芽温度24℃、发芽时间3d。西兰花培育条件为：浸泡温度25℃、浸泡时间2
‑
10h，发芽温度20℃、发芽时间4d。
40.本发明测量总黄酮、总酚采用的是紫外分光光度法；
41.木犀草素、山奈酚、芹菜素、芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁采用hplc法测定。
42.色谱条件为：流速为1.0ml/min；色谱柱为c
18
(250mm
×
4.6mm，5μm)，柱温30℃；流动相为甲醇(a)与0.2％磷酸的混合溶液(v/v)(b)，采用梯度洗脱方法：5
‑
70％a(0
‑
3min)，70
‑
40％a(3
‑
35min)，检测15min，流速:1.0ml/min。；检测波长254、320、357nm；进样量10μl。
43.实施例1两株内生菌的筛选
44.三种芽苗内生菌分离纯化得到23株内生菌，通过生理生化测定——能否葡萄糖发酵、纤维素分解筛选出11株，再根据其发酵现象(培育特征、颜色)和发酵速度(酶相对活性)选择了试验菌
45.表1内生细菌的鉴定内容及结果
46.[0047][0048]
注： 表示阳性；
‑
表示阴性。
[0049]
内生菌dy4主要特征为革兰氏阴性菌，液体培养澄清，可厌氧培养，可利用葡萄糖发酵。内生菌fy4主要特征为为革兰氏阳性菌，液体培养浑浊，可厌氧培养，可利用葡萄糖发酵。
[0050]
对内生菌dy4、fy4进行pcr扩增，测得各列长度分别1380bp和1451bp，各16srdna序列分别如下：
[0051]
dy4:gtggctaggcttaccatgcagtcgagcgccccgcaaggggagcggcagacgggtgagtaacgcgtgggaatctaccttttgctacggaataacgcagggaaacttgtgctaataccgtatgtgtccttcgggagaaagatttatcggcaagagatgagcccgcgttggattagctagttggtggggtaaaggcctaccaaggcgacgatccatagctggtctgagaggatgatcagccacattgggactgagacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatgggcgcaagcctgatccagccatgccgcgtgagtgatgaaggccctagggttgtaaagctctttcaccggagaagataatgacggtatccggagaagaagccccggctaacttcgtgccagcagccgcggtaatacgaagggggctagcgttgttcggaattactgggcgtaaagcgcacgtaggcggatcgatcagtcaggggtgaaatcccagggctcaaccctggaactgcctttgatactgtcgatctggagtatggaagaggtgagtggaattccgagtgtagaggtgaaattcgtagatattcggaggaacaccagtggcgaaggcggctcactggtccattactgacgctgaggtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgaatgttagccgtcgggcagtatactgttcggtggcgcagctaacgcattaaacattccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgcagaaccttaccagcccttgacatcct
gtgttacctctagagatagggggtccacttcggtggcgcagagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaaccctcgcccttagttgccagcatttagttgggcactctaaggggactgccggtgataagccgagaggaaggtggggatgacgtcaagtcctcatggcccttacgggctgggctacacacgtgctacaatggtggtgacagtgggcagcgagcacgcgagtgtgagctaatctccaaaagccatctcagttcggattgcactctgcaactcgagtgcatgaagttggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagttggttttacccgaaggtagtgcgctaaccgcaaggaggcagctaaccacgatagtcgcatt；fy4:agggcaccgctataatgcagtcgagcgaatggattaagagcttgctcttatgaagttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcccataagactgggataactccgggaaacgggggctaataccggataacattttgaaccgcatggttcgaaattgaaaggcggcttcggctgtcacttatggatggacccgcgtcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttagggaagaacaagtgctagttgaataagctggcaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggtggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactgggagacttgagtgcagaagaggaaagtggaattccatgtgtagcggtgaaatgcgtagagatatggaggaacaccagtggcgaaggcgactttctggtctgtaactgacactgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgaagttaacgcattaagcactccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgaaaaccctagagatagggcttctccttcgggagcagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccatcattaagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggacggtacaaagagctgcaagaccgcgaggtggagctaatctcataaaaccgttctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagctggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtggggtaacctttttggagccagccgcctagtggacatcagatt。
[0052]
将扩增后的测序结果在ncbi网站上进行序列同源性比对，发现菌株dy4与根瘤菌(rhizobium sp.)ritf 1493等同源性较高；fy4与芽孢杆菌(bacillus sp.)cy
‑
b33、蜡状芽孢杆菌(bacillus cereus)strain bs14、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)strain b7等的同源性较高。
[0053]
根据blast同源性比对结果，对菌株dy4、fy4作进化树分析,菌株dy4、fy4分别为根瘤菌属、芽孢杆菌属，结合其理化性质，参考《常见细菌系统鉴定手册》及《伯杰氏细菌鉴定手册》，初步判定菌株dy4、fy4分别为根瘤菌、蜡样芽孢杆菌。
[0054]
实施例2分别测试小麦、麻豌豆和西兰花三种芽苗富集活性成分的最优条件
[0055]
小麦发芽富集活性成分的最优条件为：浸泡温度20
‑
40℃，浸泡时间6h、发芽温度28℃、发芽时间5d。在最优条件下，小麦芽苗总黄酮含量平均6.87mg/g，总酚含量平均为7.85mg/g。麻豌豆发芽富集活性成分的最优条件为：浸泡温度30℃、浸泡时间8h、发芽温度24℃、发芽时间3d。在最优条件下，麻豌豆芽苗总黄酮含量平均为2.51mg/g，总酚含量平均为4.28mg/g。西兰花发芽富集活性成分的最优条件为：浸泡温度25℃，浸泡时间2
‑
10h、发芽
温度20℃、发芽时间4d。在最优条件下，西兰花芽苗总黄酮含量平均为11.33mg/g，总酚含量平均为8.42mg/g。
[0056]
实施例3测试不同芽苗配比对总黄酮、含量的影响，发酵条件为:料液质量比1：4，2％混合菌种(dy4:fy4＝1:1)，菌浓108cfu/ml；36℃发酵2d即得发酵液，测定总黄酮、总酚含量。
[0057]
表2混料设计试验安排与结果
[0058][0059]
应用软件design
‑
expert处理试验设计和数据，优化得到发酵配方的最优组合为小麦69.8％、麻豌豆20％、西兰花10.2％。在此点预测所得发酵液各项指标值分别为总黄酮含量82.81mg/100g，总酚含量26.23mg/g。
[0060]
实施例4
[0061]
配方验证：按照优化后的配方制备5份发酵液，测定5份发酵液各项指标值。
[0062]
表3验证实验结果
[0063][0064]
如表3所示平均为总黄酮含量83.16mg/100g，总酚含量26.17mg/g，与预测值基本接近，说明该发酵配方应用有效。
[0065]
实施例5
[0066]
按配比混合芽苗，置于锥形瓶中，在料液质量比为1：5，接种量为3％，菌浓108cfu/ml，(dy4:fy4＝1:1)的条件下分别在24、28、32、36、40℃发酵48h。
[0067]
表4发酵温度对发酵液酚类物质含量的影响(单位：μg/g)
[0068]
发酵温度/℃2428323640木犀草素9.42
±
0.3511.95
±
0.5012.14
±
0.4410.55
±
0.288.35
±
0.22山奈酚6.35
±
0.168.11
±
0.2010.37
±
0.2313.5
±
0.4311.11
±
0.27芹菜素7.62
±
0.207.89
±
0.239.49
±
0.1814.42
±
0.578.51
±
0.25芥子酸91.49
±
3.7867.48
±
3.30213.29
±
6.5315.95
±
8.20255.09
±
6.13阿魏酸47.7
±
1.3062.7
±
3.00210.4
±
9.05456.55
±
8.22183.65
±
5.91水杨酸82.45
±
1.4090.58
±
4.06198.52
±
4.4187.5
±
3.95144.04
±
2.70阔马酸63.43
±
1.5360.03
±
2.90105.73
±
2.55194.03
±
7.90124.03
±
2.60香草酸60.41
±
2.01104.03
±
2.50130.84
±
5.6318.18
±
5.9140.07
±
2.00芦丁132.47
±
5.60123.01
±
5.16202.46
±
5.10242.05
±
6.8072.83
±
3.04
[0069]
如表4所示，木犀草素、山奈酚及芹菜素在试验温度范围内，含量基本无波动；芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁随温度变化，先增加后减少，芥子酸、阿魏酸、阔马酸、香草酸和芦丁在36℃达到最大值，最大值分别为315.95、456.55、194.03、318.18、242.05μg/g；水杨酸在32℃达到最大值187.5μg/g。因此，故确定最适发酵温度为36℃。
[0070]
实施例6
[0071]
按配比混合芽苗，置于锥形瓶中，在料液比为1∶5，接种量为3％，菌浓108cfu/ml，(dy4∶fy4＝1∶1)的条件下，36℃分别发酵24、36、48、60、72h。
[0072]
表5发酵时间对发酵液酚类物质含量含量的影响(单位：μg/g)
[0073]
发酵时间/h2436486072木犀草素10.1
±
0.2513.44
±
0.3518.07
±
0.4521.12
±
0.6514
±
0.35山奈酚5.48
±
0.249.49
±
0.349.74
±
0.2723.66
±
5.121.78
±
4.05芹菜素6.95
±
0.257.22
±
0.2110.95
±
0.2212.55
±
0.3311.22
±
0.15芥子酸105.21
±
3.25299.67
±
5.9315.02
±
7.29477.54
±
8.35367.71
±
8.53阿魏酸95.2
±
0.27221.9
±
5.55426.6
±
10.03417.7
±
9.85305.4
±
7.25水杨酸77.35
±
3.593.65
±
2.65189.03
±
6.45135.4
±
3.75126.23
±
3.6
阔马酸70.13
±
1.77148.93
±
4.7195.75
±
5.79253.13
±
6.52215.63
±
5.7香草酸31.7
±
1.24154.74
±
3.77313.16
±
9.15301.18
±
7.05220.84
±
10.1芦丁281.1
±
7.15282.2
±
6.34280
±
7.79365.85
±
8.2322.6
±
6.11
[0074]
如表5所示，不犀草素、山奈酚及芹菜素在试验时间范围内，含量基本无波动；芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁随温度变化，先增加后减少，芥子酸、阔马酸和芦丁在60h时含量达到最大值，最大值分别为477.54、253.13、365.85μg/g；阿魏酸、水杨酸和香草酸在48h时含量达到最大值，最大值分别为426.6、189.03、313.16μg/g，且和60h时含量相差无几。因此，故确定最适发酵时间为60h。
[0075]
实施例7
[0076]
按配比混合芽苗，置于锥形瓶中，在料液比分别为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6，接种量为3％，菌浓108cfu/ml，(dy4∶fy4＝1∶1)的条件下，36℃发酵36h。
[0077]
表6料液比对发酵液酚类物质含量含量的影响(单位：μg/g)
[0078]
料液比1∶21∶31∶41∶51∶6木犀草素10.6
±
0.3113.25
±
0.5313.99
±
0.616.64
±
0.814.91
±
0.3山奈酚16.33
±
0.6514.95
±
0.4720.93
±
0.9413
±
0.3213.04
±
0.52芹菜素14.78
±
0.458.65
±
0.2514.52
±
0.3311.49
±
0.238.99
±
0.27芥子酸104.44
±
2.5187.15
±
3.5281.58
±
4.05323.68
±
6.15355.46
±
7.75阿魏酸124.45
±
2.6317.1
±
5.85464.3
±
7.3445.05
±
3.25235.2
±
1.75水杨酸74.52
±
2.7128.89
±
3.4241.09
±
2.05193.44
±
2.65195.47
±
2.75阔马酸78.45
±
2.2141.4
±
3.1187.55
±
4.4202.55
±
3.3125.21
±
5香草酸49.58
±
1.45134.9
±
3.7201.39
±
5.05311.42
±
5.5558.9
±
1.9芦丁66.68
±
1.8114.2
±
2.35299.73
±
7.95271.75
±
6.55175.55
±
4.75
[0079]
如表6所示，木犀草素、山奈酚及芹菜素在试验固液比范围内，含量基本无波动；芥子酸随固液比变化先显著增加后缓慢增加，在固液比为1∶6时含量达到最大值355.46μg/g；阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁随，先增加后减少，阿魏酸、水杨酸和芦丁在固液比为1：4时含量达到最大值，最大值分别为464.3、241.09、299.73μg/g，且和1:5时含量相差无几；阔马酸和香草酸在固液比为1：5时含量达到最大值，最大值分别为202.55、311.42μg/g，综合考虑发酵液产量和酚类物质含量，故确定最适固液比为1:5。
[0080]
实施例8
[0081]
按配比混合芽苗，置于锥形瓶中，在料液比为1:5，接种量分别为1％、2％、3％、4％、5％(dy4:fy4＝1:1)，菌浓108cfu/ml的条件下，36℃发酵36h。
[0082]
表7接种量对发酵液酚类物质含量含量的影响(单位：μg/g)
[0083]
接种量1％2％3％4％5％木犀草素9.1
±
0.413.33
±
0.616.64
±
0.6620.58
±
0.918.7
±
0.45山奈酚6.51
±
0.310.19
±
0.3413
±
0.3516.39
±
0.4413
±
0.32芹菜素7.55
±
0.298.16
±
0.2911.49
±
0.4213.35
±
0.3316.55
±
0.52芥子酸92.48
±
3.6206.94
±
6.3323.68
±
9.15234.15
±
7.11257.88
±
8.25阿魏酸89.15
±
4290.9
±
8.51445.05
±
12.3378.8
±
9.13292.45
±
6.41水杨酸78.17
±
3.3150.66
±
5.7193.44
±
6.98205.67
±
5.2152.7
±
6.7
阔马酸70.67
±
2.2114.17
±
5194.22
±
7.9245.17
±
6.2598.99
±
4香草酸37.23
±
1.58203.85
±
5.16301.39
±
5.05238.48
±
9.11110.7
±
4.01芦丁160.05
±
4245.82
±
7.12271.75
±
8.13355.86
±
9.7561.83
±
2.05
[0084]
如表7所示，木犀草素、山奈酚及芹菜素在试验接种量范围内，含量基本无波动；芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁随温度变化，先增加后减少；芥子酸、阿魏酸、和香草酸在接种量为3％时含量达到最大值，最大值分别为323.68、445.05、301.39μg/g；水杨酸、阔马酸和芦丁在接种量为4％时含量达到最大值，最大值分别为205.67、245.17、355.86μg/g，综合考虑受接种量影响大的六种酚类物质含量，故确定最适接种量为3％。
[0085]
实施例9
[0086]
以发酵温度a、发酵时间b、固液比c、接种量d分别代表的因素为自变量，以芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁含量为因变量，采用box
‑
behnken组合设计进行试验，结果如表8。
[0087]
表8 box
‑
behnken响应面设计结果
[0088]
[0089][0090]
注：接上页
[0091]
由试验设计软件design expert分析得在发酵温度35.43℃、发酵时间58.11h、固液比1：4.78、接种量3.12％，菌浓108cfu/ml(dy4:fy4＝1:1)时酚类物质综合评分达到最大值为0.9617，芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁含量分别为478.275、440.072、141.013、297.551、308.371、361.292μg/g。为进一步验证所得工艺条件的合理性以及稳定性，特进行验证性试验。按照最优工艺制备发酵液，测得芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸和芦丁含量平均值分别为476.34(481.90、464.11、483.01)、445.54(434.5、457.9、
444.21)、143.24(139.90、145.60、144.23)、299.66(292.15、300.03、306.80)、299.93(296.60、299.00、304.19)、360.62(352.88、370.09、358.90)μg/g。与预测值基本接近，说明优化后的发酵工艺是可靠的。
[0092]
实施例10
[0093]
将相同质量相同比例的芽苗干燥，80％甲醇提取得到提取液(具体的提取方法：准确量取200μl发酵液(按照实施例9优化后的工艺发酵)于2ml离心管中，加入800ul甲醇，涡旋混合5min后12000r/min离心10min，移上清液过0.45的微孔滤膜即得)，测定其活性物质含量(按失水率88.77％换算成湿重)，和该发明发酵液进行对比。
[0094]
表9各样品成分比对
[0095][0096]
由表9可知，除发酵液芹菜素含量是提取液的1.15倍，芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸、芦丁含量都在2倍以上，且阿魏酸含量高达12倍。
[0097]
该芽苗发酵液可以用作化妆水、食品、以及饮料等的调配液，亦可作为人体膳食营养补充剂。
[0098]
芽苗经内生菌发酵处理。在一定培养条件下，使发酵液中所含有丰富的木犀草素、山奈酚、芹菜素、芥子酸、阿魏酸、水杨酸、阔马酸、香草酸、芦丁等多种具有特殊生理功能的活性物质，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗菌等多种功效。其还含有的丰富的营养素，能补充人体所需的一些营养素，并且能起到护肤美容的良好功效，可以用作化妆品、食品、以及饮料等的调配液。
[0099]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。