一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构的制作方法

1.本发明涉及胶原蛋白技术领域，尤其是涉及一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构。


背景技术：

2.胶原蛋白是很多脊椎动物和无脊椎动物体内含量最丰富的蛋白质，属于结构蛋白质，是皮肤、骨、软骨、血管和牙齿的主要纤维成分，存在于所有的器官中。
3.胶原的高机械强度与胶原的蛋白质结构有密切的关系。在胶原蛋白中，特殊的氨基组成使其具有稳定的三股螺旋结构，氨基酸和肽链之间的各种作用力维持着胶原的稳定，而胶原的性能特点正是氨基酸序列排布的外在反映。
4.胶原的氨基酸排列可以引发某些氨基酸残基的变异，使原来的稳定性丧失，并引发病变。性质依赖结构，胶原的稳定性是其特殊结构的外在表现。对于先天性和后天性结缔组织病变的人群，其胶原蛋白的结构具有重要意义。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种促进皮肤、骨骼功能的胶原蛋白肽，胶原结构稳定，有效的促进皮肤和骨骼的发育。
6.为实现上述目的，本发明提供了一种促进皮肤、骨骼功能的胶原蛋白肽，胶原蛋白肽的基础氨基酸序列为pro
‑
hyp
‑
gly。
7.优选的，胶原蛋白肽的浓度为1
‑
5μg/ml。
8.优选的，胶原蛋白的衍生序列在基础氨基酸序列的基础上进行扩展，氨基酸的序列不大于10个，其分子量不大于1200da。
9.因此，本发明采用上述一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构，三肽结构稳定，通过脯氨酸、羟脯胺酸、甘氨酸这种定向三肽结构，对皮肤骨骼发育效果明显好，促进身体的功能增强。
10.胶原螺旋的稳定性有赖于分子间和分子内各种作用的协同效应，亚氨基酸、氢键、范德华力以及水化作用，在稳定胶原分子结构上共同作用，而疏水作用和离子作用提供分子间作用力。但是，胶原蛋白的氨基酸序列决定了分子的稳定性和分子间作用。本发明的胶原蛋白肽通过高含量的亚氨基酸(脯氨酸、羟脯氨酸)提高螺旋的稳定性。甘氨酸通过优化多肽链折叠中的构想范围，提高其稳定性。脯氨酸的羟基化在螺旋结构提高稳定性。脯氨酸、羟脯胺酸均为亚氨基酸，提高了三股螺旋结构的稳定性。
11.下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
具体实施方式
12.以下通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
13.一种促进皮肤、骨骼功能的胶原蛋白肽，胶原蛋白肽的基础氨基酸序列为pro
‑
hyp
‑
gly。胶原蛋白肽的浓度为1
‑
5μg/ml。
14.胶原蛋白的衍生序列在基础氨基酸序列的基础上进行扩展，氨基酸的序列不大于10个，其分子量为1200da。
15.试验测试
16.(一)胶原蛋白肽对成纤维细胞的影响
17.人皮肤成纤维细胞(hs27细胞(atcc))使用完全培养基进行培养，完全培养基主要由基础培养基高糖dmem、10％胎牛血清(v/v)、1％双抗(青霉素和链霉素)组成。
18.将成纤维细胞置于37℃、5％co2的培养箱中，每隔2d换液1次。待细胞长满培养瓶的90％左右，取其接种于96孔培养板中，每孔100μl，浓度为5
×
104cells/ml。细胞生长24h后，吸弃培养液，用200μlpbs洗1次。再加入200μlpbs，用80mj/cm2uvb照射，吸弃pbs。其中试验组每孔加入200μl 2μg/ml的三肽型胶原蛋白肽，对照组加入等量的pbs，继续培养72h后，吸弃培养液，检测细胞存活率。
19.结果发现，试验组的成纤维细胞数量明显多于对照组的成纤维细胞数量。
20.(二)胶原蛋白肽含量的变化
21.将hs27皮肤成纤维细胞在24孔培养容器中散布各1*104个之后，在5％co2、37℃下培养24h后，试验组每孔加入200μl 2μg/ml的三肽型胶原蛋白肽，对照组加入等量的pbs，再培养72h后。用结晶紫法测定细胞的增殖。
22.再除去各孔的培养基之后，每1孔添加500ml的0.1％结晶紫溶液并染色5分钟之后，除去结晶紫溶液，用蒸馏水清洗3次并重复进行4次，至孔成为清澈。再添加95％乙醇1ml并搅拌20min，使细胞所染色的结晶紫溶解。将该溶液以各孔200ml分配到96孔容器中，针对试验组与对照组计算相对的细胞增殖。
23.结果发现，试验组的成纤维细胞数量明显多于对照组的成纤维细胞数量。
24.(三)胶原蛋白肽对骨骼细胞的影响
25.通过骨细胞培养基对老鼠成骨细胞和破骨细胞培养24h后，分为对照组和试验组，试验组加入1mg/ml的三肽型胶原蛋白肽，对照组加入牛血清白蛋白，均再培养14d后，用荧光测定仪定量测定碱性磷酸酶活性，用显微镜观察培养基的成骨细胞图片。结果发现，试验组的碱性磷酸酶活性(2.13
±
0.85mu/105细胞)明显高于对照组(0.42
±
0.16mu/105细胞)，胶原蛋白肽组成骨细胞性状改变，而牛血清白蛋白对照组组成骨细胞消融。
26.(四)胶原蛋白肽对肌肉细胞的影响
27.大鼠乙醚吸入麻醉后腹腔内注射氯胺酮(22mg/kg)，以左侧第4肋水平作横切口，取胸大肌约1cm3，并将其修剪成1mm3大小的肌小粒。反复用hanks液洗去血细胞，将肌小粒小心贴附于事先用明胶包被的细胞培养瓶底部，加入适量成肌细胞增殖培养液(ham's f
‑
10培养基中加入15％小牛血清、青霉素100u/ml、链霉素100u/ml)。将瓶底向上轻置于37℃、5％co2、饱和湿度的培养箱中，4h后轻轻翻转培养瓶，使肌小粒浸浴于培养液中。3d换液一次，待细胞长满瓶底即可传代。
28.将传代的二代细胞取10μl加入新的培养瓶中，分为试验组和对照组，并分别加入200μl胶原蛋白肽、200μlpbs，进行培养。针对试验组与对照组计算相对的细胞增殖。
29.结果发现，试验组的肌肉细胞明显多于对照组的肌肉细胞数量。
30.因此，本发明采用上述一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构，胶原
三肽肽链结构稳定，有效的促进皮肤和骨骼、肌肉的发育。
31.最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。


技术特征：
1.一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构，其特征在于：胶原蛋白肽的三肽氨基酸序列为pro
‑
hyp
‑
gly。2.根据权利要求1所述的一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构，其特征在于：胶原蛋白肽的浓度为1
‑
5μg/ml。3.根据权利要求1所述的一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构，其特征在于：胶原蛋白的衍生序列在基础氨基酸序列的基础上进行扩展，氨基酸的序列不大于10个，其分子量不大于1200da。

技术总结
本发明公开了一种促进皮肤、骨骼、肌肉功能的胶原蛋白三肽结构，胶原蛋白肽的氨基酸序列为Pro


技术研发人员：林倩如 王颖
受保护的技术使用者：上海胶媚商贸有限公司
技术研发日：2021.08.03
技术公布日：2021/10/23