一种耐盐蛋白、编码其的基因及应用的制作方法

1.本发明涉及一种耐盐蛋白。


背景技术：

2.西伯利亚白刺(nitraria sibirica)隶属蒺藜科白刺属落叶具刺灌木，是典型的稀盐型盐生植物，可在重盐碱地正常生长，对恶劣环境有非常强的适应能力，是防风固沙、保持水土及重盐碱地改良的先锋型植物，不但具有极高的生态应用价值，同时也是研究植物耐盐分子机制和挖掘耐盐抗逆基因资源的重要材料。


技术实现要素：

3.本发明之一提供了一种蛋白，其氨基酸序列如seq id no.4所示。
4.本发明之二提供了编码如本发明之一所述的蛋白的基因。
5.在一个具体实施方式中，所述基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。
6.本发明之三提供了根据本发明之一所述的蛋白或本发明之二所述的基因在耐盐中的应用。
7.本发明的有益效果：
8.本发明发现了一种新的西伯利亚白刺中耐盐基因，可以将其用于植物的耐盐改良。
附图说明
9.图1显示了rt
‑
pcr技术克隆得到的耐盐基因全长电泳图，图中m为dl2000 dna marker，1为耐盐基因。
10.图2显示了400mm nacl处理后根中耐盐基因的rt
‑
qpcr检测结果。
11.图3显示了400mm nacl处理后叶中耐盐基因的rt
‑
qpcr检测结果。
12.图4显示了400mm nacl处理后茎中耐盐基因的rt
‑
qpcr检测结果。
具体实施方式
13.以下通过优选的实施案例的形式对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但其不构成对本发明的限制。
14.如无特别说明，本发明的实施例中的试剂均可通过商业途径购买。
15.实施例1
16.西伯利亚白刺耐盐基因cdna序列的克隆。
17.采用擎科生物技术有限公司rna提取试剂盒从nacl处理后的西伯利亚白刺全株中提取总rna。
18.利用takara公司反转录试剂盒对所提取的总rna进行反转录合成得到cdna，然后以合成的cdna为模板，以引物ns
‑
f(seq id no.1)和ns
‑
r(seq id no.2)为引物进行pcr，得
到pcr产物。其中，pcr程序为：(1)94℃，预变性5分钟。(2)pcr扩增，33个循环：94℃，变性45秒；60℃退火45秒；72℃，延伸45秒；(2)72℃，延伸10分钟。利用琼脂糖凝胶电泳对pcr产物进行分离，结果见图1，用omeg bio
‑
tek试剂盒对pcr产物中的目的片断进行回收；回收产物连接到peasy
‑
blunt载体上并转化至大肠杆菌trans1
‑
1感受态细胞中，挑选转化菌落进行pcr鉴定，然后将扩增出符合预先大小的pcr片段(大小与图1相同)的转化子送至擎科生物技术有限公司测序，得到的测序结果与转录组中的测序片段完全相同，说明克隆所得的基因即为目的基因，将测序正确的质粒命名为peasy
‑
blunt
‑
ns2，测序正确的大肠杆菌菌株命名为peasy
‑
blunt
‑
ns2/trans1
‑
1。其中，所克隆基因的核苷酸序列如seqid no.3所示，其编码的氨基酸序列如seqid no.4所示。
19.实施例2
20.西伯利亚白刺耐盐基因在逆境中的表达特性
21.对于西伯利亚白刺一年生组培苗进行400mm浓度的nacl胁迫，并对每个浓度下培养的组培苗在0h、6h、12h、24h、48h及72h后对根、茎及叶片进行取样，之后迅速放入液氮中速冻，在液氮中研磨后采用与实施例1相同的操作分别提取rna以及反转录合成cdna。以nsrt
‑
f(seq id no.5)和nsrt
‑
r(seq id no.6)为引物，以每个样品的反转录合成的cdna分别为模板进行rt
‑
qpcr(方法参考transstart top green qpcr supermix说明书，货号：aq131
‑
04，购自全式金生物技术有限公司)，并以西伯利亚白刺的肌动蛋白(actin)为内参，内参引物为actin
‑
f(seq id no.7)和actin
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r(seq id no.8)。rt
‑
qpcr结果如图2至4所示，耐盐基因的表达水平在叶片中表达量更高，推测盐胁迫下该基因在叶片的耐盐调控中发挥重要的作用。


技术特征：
1.一种蛋白，其氨基酸序列如seq id no.4所示。2.编码如权利要求1所述的蛋白的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。4.根据权利要求1所述的蛋白或权利要求2或3所述的基因在耐盐中的应用。

技术总结
本发明涉及一种耐盐蛋白、编码其的基因及应用。所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。示。示。


技术研发人员：张华新 黄安瀛 朱建峰 张会龙 王计平
受保护的技术使用者：中国林业科学研究院黄河三角洲综合试验中心
技术研发日：2021.07.14
技术公布日：2021/10/23