用于免疫疗法的经修饰的自然杀伤(NK)细胞的制作方法

技术特征：
1.一种经修饰的淋巴细胞，其中该经修饰的淋巴细胞：(a)不表达内源cd3、cd4和/或cd8；并且(b)表达至少一种编码以下的内源基因：(i)cd56(ncam)、cd49和/或cd45；(ii)nk细胞受体免疫球蛋白γfc区受体iii(fcγriii，分化簇16(cd16))；(iii)自然杀伤组
‑
2成员d(nkg2d)；(iv)cd69；(v)天然细胞毒性受体；或其两种或更多种的任何组合；其中该经修饰的淋巴细胞进一步：(1)包含至少一种外源核酸表达构建体，其包含编码以下的核酸序列：(i)嵌合抗原受体(car)；(ii)非天然存在的fcγriii变体(cd16)；(iii)白细胞介素15(il
‑
15)；(iv)il
‑
15受体(il
‑
15r)或其变体；(v)白细胞介素12(il
‑
12)；(vi)il
‑
12受体(il
‑
12r)或其变体；(vii)人白细胞抗原g(hla
‑
g)；(viii)人白细胞抗原e(hla
‑
e)；(ix)白细胞表面抗原分化簇cd47(cd47)；或其两种或更多种的任何组合；和/或(2)表现出以下中至少一种的功能丧失：(i)转化生长因子β受体2(tgfβr2)；(ii)腺苷a2a受体(adora2a)；(iii)具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)；(iv)β
‑
2微球蛋白(b2m)；(v)程序性细胞死亡蛋白1(pd
‑
1)；(vi)细胞因子诱导型含sh2蛋白(cish)；(vii)主要组织相容性复合体ii类反式激活因子(ciita)；(viii)自然杀伤细胞受体nkg2a(自然杀伤组2a)；(ix)两种或更多种hla ii类组织相容性抗原α链基因，和/或两种或更多种hla ii类组织相容性抗原β链基因；(x)分化簇32b(cd32b，fcgr2b)；(xi)t细胞受体α恒定区(trac)；或其两种或更多种的任何组合。2.如权利要求1所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞表现出以下的功能丧失：(i)tgfβr2、cish、tigit、adora2a、或nkg2a；(ii)tgfβr2和cish、tgfβr2和tigit、tgfβr2和adora2a、tgfβr2和nkg2a、cish和tigit、
cish和adora2a、cish和nkg2a、tigit和adora2a、tigit和nkg2a、或adora2a和nkg2a；或(iii)tgfβr2、cish和tigit；tgfβr2、cish和adora2a；tgfβr2、cish和nkg2a；tgfβr2、tigit和adora2a；tgfβr2、tigit和nkg2a；tgfβr2、adora2a和nkg2a；cish、tigit和adora2a；cish、tigit和nkg2a；cish、adora2a和nkg2a；或tigit、adora2a和nkg2a。3.如权利要求1或2所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞包含重排的内源t细胞受体(tcr)基因座。4.如权利要求3所述的经修饰的淋巴细胞，其中该重排的tcr包含tcrαvj和/或tcrβv(d)j区段重排和完整的v
‑
结构域外显子。5.如权利要求1、2、3或4所述的经修饰的淋巴细胞，其中该天然细胞毒性受体是nkp30、nkp44、nkp46、和/或cd158b。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该il
‑
15r变体是组成型活性il
‑
15r变体，和/或其中该il12
‑
r变体是组成型活性il12
‑
r变体。7.如权利要求6所述的经修饰的淋巴细胞，其中该组成型活性il
‑
15r变体是il
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15r和il
‑
15r激动剂(il
‑
15ra)的融合体，和/或其中该组成型活性il
‑
12r变体是il
‑
12r和il
‑
12r激动剂的融合体(il
‑
12ra)。8.如权利要求7所述的经修饰的淋巴细胞，其中该il
‑
15r激动剂是il
‑
15，或其il
‑
15r结合变体；和/或其中该il
‑
12r激动剂是il
‑
12，或其il
‑
12r结合变体。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该tgfβr2丧失与tgfβ受体ii(dn
‑
tgfβr2)的显性负性变体的外源表达相关。10.如权利要求1所述的经修饰的淋巴细胞，其中该car能够结合间皮素、egfr、her2、mica/b、bcma、cd19、cd22、cd20、cd33、cd123、雄激素受体、psma、psca、muc1、hpv病毒肽(即e7)、ebv病毒肽、cd70、wt1、cea、egfrviii、il13rα2、和gd2、ca125、cd7、epcam、muc16或cd30。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞衍生自多潜能或多能干细胞。12.如权利要求11所述的经修饰的淋巴细胞，其中该多能干细胞是造血干细胞(hsc)。13.如权利要求11所述的经修饰的淋巴细胞，其中该多潜能干细胞是诱导性多潜能干细胞(ipsc)。14.如权利要求11所述的经修饰的淋巴细胞，其中该多潜能干细胞是胚胎干细胞(esc)。15.如权利要求1
‑
11中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞衍生自多潜能或多能干细胞，其包含编码(1)(i)
‑
(1)(xi)或其任何组合中任一种的至少一种或多种外源核酸构建体；和/或至少一种基因组改变，该至少一种基因组改变实现淋巴细胞中(2)(i)
‑
(2)(xi)或其任何组合中任一种的功能丧失。16.如权利要求15所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞衍生自多潜能或多能干细胞，其包括至少一种基因组改变，该至少一种基因组改变实现淋巴细胞中(2)(i)
‑
(2)(xi)或其任何组合中任一种的功能丧失。17.如权利要求15或权利要求16所述的经修饰的淋巴细胞，其中该实现淋巴细胞中(2)(i)
‑
(2)(xi)中一种或多种的功能丧失的至少一种基因组改变包括插入外源核酸构建体。
18.如权利要求17所述的经修饰的淋巴细胞，其中该外源核酸构建体编码(1)(i)
‑
(1)(ix)或其任何组合中任一种。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞表现出在(2)下列出的基因/蛋白中两种或更多种的功能丧失。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞包含(2)下的含有基因或编码蛋白质的基因组座位中的外源核苷酸构建体的插缺或插入。21.如权利要求1
‑
20中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞包含(2)下的含有基因或编码蛋白质的两个或更多个基因组座位中的外源核苷酸构建体的插缺或插入。22.如权利要求1
‑
21中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞通过用rna指导的核酸酶编辑基因组座位来获得。23.如权利要求22所述的经修饰的淋巴细胞，其中该rna指导的核酸酶是crispr/cas核酸酶。24.如权利要求22所述的经修饰的淋巴细胞，其中该rna指导的核酸酶选自由以下组成的组：spcas9、sacas9、(kkh)sacas9、ascpf1(ascas12a)、lbcpf1、(lbcas12a)、casx、casy、cas12h1、cas12i1、cas12c1、cas12c2、espcas9、cas9
‑
hf1、hypacas9、dcas9
‑
fokl、sniper
‑
cas9、xcas9、aacas12b、evocas9、spcas9
‑
ng、vrqr、vrer、nmecas9、cjcas9、bhcas12b、和bhcas12b v4。25.如权利要求1
‑
24中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞通过编辑含有编码(2)下的任何蛋白质的基因的两个或更多个基因组座位来获得。26.如权利要求25所述的经修饰的淋巴细胞，其中该含有编码(2)下的任何蛋白质的基因的两个或更多个基因组座位中至少两个已通过不同的rna指导的核酸酶编辑。27.如权利要求25所述的经修饰的淋巴细胞，其中该含有编码(2)下的任何蛋白质的基因的两个或更多个基因组座位中至少一个已通过cas9编辑，并且其中该基因座中至少一个已通过cpf1编辑。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该经修饰的淋巴细胞表达内源cd56、cd49和cd45。29.如权利要求1
‑
28中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该淋巴细胞是自然杀伤(nk)细胞。30.一种经修饰的细胞，其中该经修饰的细胞(1)包含至少一种外源核酸表达构建体，其包含编码以下的核酸序列：(i)嵌合抗原受体(car)；(ii)非天然存在的fcγriii变体(cd16)；(iii)白细胞介素15(il
‑
15)；(iv)il
‑
15受体(il
‑
15r)或其变体；(v)白细胞介素12(il
‑
12)；(vi)il
‑
12受体(il
‑
12r)或其变体；(vii)人白细胞抗原g(hla
‑
g)；(viii)人白细胞抗原e(hla
‑
e)；(ix)白细胞表面抗原分化簇cd47(cd47)；
或其两种或更多种的任何组合；和/或(2)表现出以下中至少一种的功能丧失：(i)转化生长因子β受体2(tgfβr2)；(ii)腺苷a2a受体(adora2a)；(iii)具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)；(iv)β
‑
2微球蛋白(b2m)；(v)程序性细胞死亡蛋白1(pd
‑
1)；(vi)细胞因子诱导型含sh2蛋白(cish)；(vii)主要组织相容性复合体ii类反式激活因子(ciita)；(viii)自然杀伤细胞受体nkg2a(自然杀伤组2a)；(ix)两种或更多种hla ii类组织相容性抗原α链基因，和/或两种或更多种hla ii类组织相容性抗原β链基因；(x)分化簇32b(cd32b，fcgr2b)；(xi)t细胞受体α恒定区(trac)；或其两种或更多种的任何组合。31.如权利要求30所述的经修饰的细胞，其中该经修饰的细胞表现出以下的功能丧失：(i)tgfβr2、cish、tigit、adora2a、或nkg2a；(ii)tgfβr2和cish、tgfβr2和tigit、tgfβr2和adora2a、tgfβr2和nkg2a、cish和tigit、cish和adora2a、cish和nkg2a、tigit和adora2a、tigit和nkg2a、或adora2a和nkg2a；或(iii)tgfβr2、cish和tigit；tgfβr2、cish和adora2a；tgfβr2、cish和nkg2a；tgfβr2、tigit和adora2a；tgfβr2、tigit和nkg2a；tgfβr2、adora2a和nkg2a；cish、tigit和adora2a；cish、tigit和nkg2a；cish、adora2a和nkg2a；或tigit、adora2a和nkg2a。32.如权利要求30或31所述的经修饰的细胞，其中该经修饰的细胞是免疫细胞。33.如权利要求32所述的经修饰的细胞，其中该免疫细胞是淋巴细胞。34.如权利要求33所述的经修饰的细胞，其中该淋巴细胞是nk细胞。35.如权利要求30所述的经修饰的细胞，其中该细胞是多潜能干细胞，或由其衍生的分化的子细胞。36.如权利要求34或权利要求35所述的经修饰的细胞，其中该经修饰的细胞不表达内源t细胞共受体。37.如权利要求33所述的经修饰的细胞，其中该淋巴细胞是t细胞。38.如权利要求30所述的经修饰的细胞，其中该细胞包含重排的内源tcr基因座，其中该重排的tcr包含tcrαvj和/或tcrβv(d)j区段重排和完整的v
‑
结构域外显子。39.如权利要求30
‑
38中任一项所述的经修饰的细胞，其中该经修饰的细胞表达至少一种编码以下的内源基因：(i)cd56(ncam)、cd49和/或cd45；(ii)fcγriii(cd16)；(iii)自然杀伤组
‑
2成员d(nkg2d)；(iv)cd69；
(v)天然细胞毒性受体；或其两种或更多种的任何组合。40.如权利要求39所述的经修饰的细胞，其中该天然细胞毒性受体是nkp30、nkp44、nkp46、和/或cd158b。41.如权利要求30
‑
40中任一项所述的经修饰的细胞，其中该细胞表达至少一种nk细胞生物标记。42.如权利要求41所述的经修饰的细胞，其中该nk细胞生物标记是cd56、cd49和/或cd45。43.一个细胞群，其包含如权利要求1
‑
28中任一项所述的经修饰的淋巴细胞或如权利要求30
‑
42中任一项所述的经修饰的细胞。44.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求43所述的细胞群。45.一种分离的淋巴细胞群，其中该细胞群包含至少1x103、至少1x104、至少1x105、至少2x105、至少3x105、至少4x105、至少5x105、至少1x106、至少2x106、至少3x106、至少4x106、至少5x106、至少1x107、至少1x107、至少2x107、至少3x107、至少4x107、至少5x107、至少1x108、至少2x108、至少3x108、至少4x108、至少5x108、至少1x109、至少1x109、至少2x109、至少3x109、至少4x109、至少5x109、至少1x10
10
、至少2x10
10
、至少3x10
10
、至少4x10
10
、至少5x10
10
、至少1x10
11
、或至少1x10
12
个细胞，并且其中该细胞群中的淋巴细胞的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.9％、至少99.99％、至少99.999％、或几乎100％：(a)包含重排的t细胞受体(tcr)基因座；(b)不表达内源cd3；(c)表达内源cd56(ncam)、cd49和/或cd45；和(d)表达至少一种编码以下的内源基因：(i)fcγriii(cd16)；(ii)自然杀伤组
‑
2成员d(nkg2d)；(iii)cd69；(iv)天然细胞毒性受体；或其两种或更多种的任何组合；和其中该经修饰的淋巴细胞进一步：(1)包含至少一种外源核酸表达构建体，其包含编码以下的核酸序列：(i)嵌合抗原受体(car)；(ii)非天然存在的免疫球蛋白γfc区受体iii变体(fcγriii，cd16)；(iii)白细胞介素15(il
‑
15)；(iv)il
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15受体(il
‑
15r)或其变体；(v)白细胞介素12(il
‑
12)；(vi)il
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12受体(il
‑
12r)或其变体；(vii)人白细胞抗原g(hla
‑
g)；(viii)人白细胞抗原e(hla
‑
e)；(ix)白细胞表面抗原分化簇cd47(cd47)；
或其两种或更多种的任何组合；和/或(2)表现出以下中至少一种的功能丧失：(i)转化生长因子β受体2(tgfβr2)；(ii)腺苷a2a受体(adora2a)；(iii)具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)；(iv)β
‑
2微球蛋白(b2m)；(v)程序性细胞死亡蛋白1(pd
‑
1)；(vi)细胞因子诱导型含sh2蛋白(cish)；(vii)主要组织相容性复合体ii类反式激活因子(ciita)；(viii)自然杀伤细胞受体nkg2a(自然杀伤组2a)；(ix)两种或更多种hla ii类组织相容性抗原α链基因，和/或两种或更多种hla ii类组织相容性抗原β链基因；(x)分化簇32b(cd32b，fcgr2b)；(xi)t细胞受体α恒定区(trac)；或其两种或更多种的任何组合。46.如权利要求45所述的分离的淋巴细胞群，其中该经修饰的淋巴细胞表现出以下的功能丧失：(i)tgfβr2、cish、tigit、adora2a、或nkg2a；(ii)tgfβr2和cish、tgfβr2和tigit、tgfβr2和adora2a、tgfβr2和nkg2a、cish和tigit、cish和adora2a、cish和nkg2a、tigit和adora2a、tigit和nkg2a、或adora2a和nkg2a；或(iii)tgfβr2、cish和tigit；tgfβr2、cish和adora2a；tgfβr2、cish和nkg2a；tgfβr2、tigit和adora2a；tgfβr2、tigit和nkg2a；tgfβr2、adora2a和nkg2a；cish、tigit和adora2a；cish、tigit和nkg2a；cish、adora2a和nkg2a；或tigit、adora2a和nkg2a。47.如权利要求45或46所述的分离的淋巴细胞群，其中该重排的tcr基因座包含tcrαvj和/或tcrβv(d)j区段重排和完整的v
‑
结构域外显子。48.如权利要求47所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该重排的内源tcr基因座由不超过两个重排的等位基因组成。49.如权利要求45所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该天然细胞毒性受体是nkp30、nkp44、nkp46、和/或cd158b。50.如权利要求45
‑
49中任一项所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该细胞群不包含超过1％、超过0.1％、超过0.001％、超过0.0001％、超过0.00001％、超过0.000001％、超过0.0000001％、超过0.00000001％、超过0.000000001％、超过0.0000000001％、或超过超过0.00000000001％的表达来自外源核酸构建体的重编程因子的细胞。51.如权利要求50所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该细胞群不包含表达来自外源核酸构建体的重编程因子的细胞。52.如权利要求50或权利要求51所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该重编程因子是oct
‑
4和/或sox
‑
2。53.如权利要求45所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该细胞群不包含含有编码重编
程因子的游离型表达构建体的细胞。54.如权利要求45
‑
53中任一项所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该细胞群中的每个细胞包含(1)和(2)的相同组合。55.如权利要求45
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54中任一项所述的体外分离的淋巴细胞群，其中该细胞群包含少于0.001％、少于0.002％、少于0.003％、少于0.004％、少于0.005％、少于0.006％、少于0.007％、少于0.008％、少于0.009％、少于0.01％、少于0.02％、少于0.03％、少于0.04％、少于0.05％、少于0.06％、少于0.07％、少于0.08％、少于0.09％、少于0.1％、少于0.2％、少于0.3％、少于0.4％、少于0.5％、少于0.6％、少于0.7％、少于0.8％、少于0.9％、少于1％、少于2％、少于3％、少于4％、少于5％、少于6％、少于7％、少于8％、少于9％、或少于10％的含有染色体易位的细胞。56.一种治疗受试者的方法，该方法包括向有需要的受试者施用如权利要求1
‑
29中任一项所述的淋巴细胞、如权利要求30
‑
42中任一项所述的经修饰的细胞、如权利要求41所述的细胞群、如权利要求44所述的药物组合物、或如权利要求45
‑
55中任一项所述的体外分离的淋巴细胞群。57.如权利要求56所述的方法，其中该受试者患有或被诊断出增殖性疾病。58.如权利要求57所述的方法，其中该增殖性疾病是癌症。59.如权利要求58所述的方法，其中该癌症是乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肾细胞癌(rcc)、或非小细胞肺癌(nsclc)、实体瘤、膀胱癌、肝细胞癌、前列腺癌、卵巢癌/子宫癌、胰腺癌、间皮瘤、黑素瘤、胶质母细胞瘤、hpv相关和/或hpv阳性癌症如宫颈癌和hpv 头颈癌、口腔癌、咽癌、甲状腺癌、胆囊癌、软组织肉瘤和血液学癌症像all、cll、nhl、dlbcl、aml、cml、多发性骨髓瘤(mm)。60.一种产生如权利要求1
‑
29中任一项所述的淋巴细胞、如权利要求30
‑
42中任一项所述的经修饰的细胞、如权利要求43所述的细胞群、或如权利要求44
‑
54中任一项所述的体外分离的淋巴细胞群的方法，该方法包括：(a)获得诱导性多潜能干细胞(ipsc)；(b)修饰该ipsc或者其未分化的或分化的子细胞，以包含表达(1)的至少一个外源核酸表达构建体和/或包含(2)的至少一种基因的功能丧失；(c)使该ipsc的分化指向造血谱系细胞，其中这些造血谱系细胞保留在这些ipsc中包含的经编辑的遗传基因座。61.如权利要求60所述的方法，其中分化指向包括：(i)使ipsc与包含bmp路径激活剂和任选地bfgf的组合物接触，以获得中胚层细胞；和(ii)使这些中胚层细胞与包含bmp路径激活剂、bfgf和wnt路径激活剂的组合物接触，以获得具有确定性生血内皮(he)潜力的中胚层细胞，其中这些具有确定性生血内皮(he)潜力的中胚层细胞能够提供造血谱系细胞；其中中胚层细胞和具有确定性he潜力的中胚层细胞在步骤(i)和(ii)中获得，没有拟胚体形成的步骤；其中这些造血谱系细胞包含确定性生血内皮细胞、造血干细胞和祖细胞(hsc)、造血多能祖细胞(mpp)、前t细胞祖细胞、前nk细胞祖细胞、t细胞祖细胞、nk细胞祖细胞、t细胞、nk细胞、nkt细胞或b细胞。
62.如权利要求61所述的方法，其中使ipsc的分化指向造血谱系细胞进一步包括：使这些具有确定性he潜力的中胚层细胞与包含bfgf和rock抑制剂的组合物接触，以获得确定性he细胞。63.如权利要求60、权利要求61、或权利要求62所述的方法，该方法进一步包括：使这些确定性he细胞与以下的组合物接触，该组合物包含bmp激活剂和任选地rock抑制剂以及选自由tpo、il3、gmcsf、epo、bfgf、vegf、scf、il6、flt3l和il11组成的组的一种或多种生长因子和细胞因子，以获得造血多能祖细胞(mpp)。64.如权利要求60
‑
63中任一项所述的方法，该方法进一步包括使这些确定性he细胞与以下的组合物接触，该组合物包含选自由scf、flt3l和il7组成的组的一种或多种生长因子和细胞因子；以及任选地bmp激活剂、rock抑制剂、tpo、vegf和bfgf中的一种或多种，以获得前t细胞祖细胞、t细胞祖细胞和/或t细胞。65.如权利要求60
‑
63中任一项所述的方法，该方法进一步包括使这些确定性he细胞与以下的组合物接触，该组合物包含选自由scf、flt3l、tpo、il7和il15组成的组的一种或多种生长因子和细胞因子，以及任选地bmp激活剂、rock抑制剂、vegf和bfgf中的一种或多种，以获得前nk细胞祖细胞、nk细胞祖细胞和/或nk细胞。66.如权利要求60
‑
65中任一项所述的方法，该方法进一步包括：在步骤c)之前，使这些多潜能干细胞与包含mek抑制剂、gsk3抑制剂和rock抑制剂的组合物接触，以接种并扩增这些细胞。67.如权利要求60
‑
65中任一项所述的方法，该方法进一步包括检测这些造血谱系细胞中的重排t细胞受体(tcr)基因座。68.如权利要求67所述的方法，该方法进一步包括基于由结合目的抗原的重排的tcr基因座编码的tcr，选择包含该重排的tcr基因座的造血谱系细胞。69.如权利要求68所述的方法，其中该目的抗原是肿瘤抗原。70.一种方法，该方法包括：将供体细胞重编程为多能状态；编辑该供体细胞基因组中的靶基因座；以及使该重编程的供体细胞分化为淋巴细胞。71.如权利要求70所述的方法，其中该编辑在将该供体细胞重编程为多能状态的步骤之前或期间进行。72.如权利要求70或71所述的方法，其中该供体细胞是成纤维细胞、外周血细胞、淋巴细胞、或t细胞。73.一种方法，该方法包括：将经遗传修饰的多潜能干细胞分化为淋巴细胞，其中该经遗传修饰的多潜能干细胞包含：(1)外源核酸表达构建体，该外源核酸表达构建体包含：(i)编码嵌合抗原受体(car)的核酸序列；(ii)编码非天然存在的fcγriii变体(cd16)的核酸序列；(iii)编码白细胞介素15(il
‑
15)的核酸序列；(iv)编码白细胞介素15受体(il
‑
15r)或其变体的核酸序列；
(v)编码白细胞介素12(il12)的核酸序列；(vi)编码白细胞介素
‑
12受体(il
‑
12r)或其变体的核酸序列；(vii)编码人白细胞抗原g(hla
‑
g)的核酸序列；(viii)编码人白细胞抗原e(hla
‑
e)的核酸序列；(ix)编码白细胞表面抗原分化簇cd47(cd47)的核酸序列；或其两种或更多种的任何组合；和(2)在以下一个或多个遗传基因座中的外源核酸插缺或插入：(i)转化生长因子β受体2(tgfβr2)；(ii)腺苷a2a受体(adora2a)；(iii)具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)；(iv)β
‑
2微球蛋白(b2m)；(v)程序性细胞死亡蛋白1(pd
‑
1，cd279)；(vi)细胞因子诱导型含sh2蛋白(cish)；(vii)主要组织相容性复合体ii类反式激活因子(ciita)；(viii)自然杀伤细胞受体nkg2a(自然杀伤组2a)；(ix)两种或更多种hla ii类组织相容性抗原α链基因，和/或两种或更多种hla ii类组织相容性抗原β链基因；(x)分化簇32b(cd32b，fcgr2b)；(xi)t细胞受体α恒定区(trac)；或其两种或更多种的任何组合，其中该插缺或插入导致由对应的一个或多个遗传基因座编码的基因产物的功能丧失。74.如权利要求73所述的方法，其中外源核酸的插缺或插入是在以下遗传基因座中：(i)tgfβr2、cish、tigit、adora2a、或nkg2a；(ii)tgfβr2和cish、tgfβr2和tigit、tgfβr2和adora2a、tgfβr2和nkg2a、cish和tigit、cish和adora2a、cish和nkg2a、tigit和adora2a、tigit和nkg2a、或adora2a和nkg2a；或(iii)tgfβr2、cish和tigit；tgfβr2、cish和adora2a；tgfβr2、cish和nkg2a；tgfβr2、tigit和adora2a；tgfβr2、tigit和nkg2a；tgfβr2、adora2a和nkg2a；cish、tigit和adora2a；cish、tigit和nkg2a；cish、adora2a和nkg2a；或tigit、adora2a和nkg2a，其中该插缺或插入导致由对应的一个或多个遗传基因座编码的基因产物的功能丧失。75.如权利要求73或权利要求74所述的方法，其中(2)的外源核酸是(1)的外源核酸。76.如权利要求73或权利要求75所述的方法，其中该多潜能干细胞是ips细胞。77.如权利要求73或权利要求75所述的方法，其中该分化包括使该多潜能干细胞与一种分化培养基或一系列分化培养基接触。78.如前述权利要求中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该两种或更多种hlaii类组织相容性抗原α链基因选自hla
‑
dqa1、hla
‑
dra、hla
‑
dpa1、hla
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dma、hla
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dqa2、和hla
‑
doa。79.如前述权利要求中任一项所述的经修饰的淋巴细胞，其中该两种或更多种hlaii类组织相容性抗原β链基因选自hla
‑
dmb、hla
‑
dob、hla
‑
dpb1、hla
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dqb1、hla
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dqb3、hla
‑
dqb2、hla
‑
drb1、hla
‑
drb3、hla
‑
drb4、和hla
‑
drb5。
80.如权利要求1
‑
29和78
‑
79中任一项所述的经修饰的淋巴细胞、如权利要求30
‑
42中任一项所述的经修饰的细胞、如权利要求43所述的细胞群、如权利要求44所述的药物组合物、如权利要求45
‑
55中任一项所述的体外分离的淋巴细胞群、或如权利要求56
‑
77中任一项所述的方法，其中该外源核酸表达构建体包含在(1)下列出的在异源启动子的控制下的编码核酸序列。81.如权利要求80所述的经修饰的淋巴细胞、经修饰的细胞、细胞群、药物组合物、体外分离的淋巴细胞群、或方法，其中该异源启动子是nk细胞特异性启动子。82.如权利要求80所述的经修饰的淋巴细胞、经修饰的细胞、细胞群、药物组合物、体外分离的淋巴细胞群、或方法，其中该nk细胞特异性启动子是已知在nk细胞中特异性表达的基因的启动子，或其变体。83.如权利要求80所述的经修饰的淋巴细胞、经修饰的细胞、细胞群、药物组合物、体外分离的淋巴细胞群、或方法，其中该nk细胞特异性启动子是cd56(ncam)、cd49或cd45启动子，或其变体。84.如权利要求80所述的经修饰的淋巴细胞、经修饰的细胞、细胞群、药物组合物、体外分离的淋巴细胞群、或方法，其中该nk细胞特异性启动子是fcγriii启动子、nkg2d启动子、cd69启动子或天然细胞毒性受体启动子，或其变体。85.一种方法，该方法包括：向有需要的受试者施用如前述权利要求中任一项所述的经修饰的淋巴细胞、经修饰的细胞、或细胞群。86.如权利要求85所述的方法，其中该受试者患有或被诊断出增殖性疾病。87.如权利要求86所述的方法，其中该增殖性疾病是癌症。88.如权利要求87所述的方法，其中该癌症是乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肾细胞癌(rcc)、或非小细胞肺癌(nsclc)、实体瘤、膀胱癌、肝细胞癌、前列腺癌、卵巢癌/子宫癌、胰腺癌、间皮瘤、黑素瘤、胶质母细胞瘤、hpv相关和/或hpv阳性癌症如宫颈癌和hpv 头颈癌、口腔癌、咽癌、甲状腺癌、胆囊癌、软组织肉瘤和血液学癌症像all、cll、nhl、dlbcl、aml、cml、多发性骨髓瘤(mm)。

技术总结
本披露涉及由衍生自细胞例如发育成熟的T细胞的诱导性多潜能细胞产生NK细胞(或其他淋巴细胞)，及其用于免疫疗法的用途。及其用于免疫疗法的用途。


技术研发人员：G
受保护的技术使用者：爱迪塔斯医药公司
技术研发日：2020.02.14
技术公布日：2021/10/19