一种兽医临床用细菌采样培养与药敏的组合试剂盒的制作方法

1.本实用新型涉及兽医临床细菌学检验及治疗药物筛选，具体为一种快速细菌学采样培养与药敏试验组合试剂盒。


背景技术：

2.兽医临床业务范围很广，包括畜禽养殖行业、检疫行业、宠物行业、珍稀观赏动物饲养行业等。一直以来动物细菌病的诊断及抗菌药物使用有很大的盲目性，甚至一些小养殖场（户）存在抗生素滥用的问题。诊断失误及不合理使用抗菌药物带来的危害包括治疗效果差，动物死亡率高，浪费物力财力，更为严重的是导致了耐药菌株的出现。动物源细菌的耐药基因通过转移和传递导致感染人类的细菌的耐药性大大增强，对环境安全、食品安全、公共卫生安全构成了严重威胁。


技术实现要素：

3.针对兽医临床细菌学诊断与抗菌药物使用存在的问题，本实用新型提供了一种现场采样多种致病菌同步选择分离培养、同步药敏试验的组合试剂盒，解决兽医临床盲目使用抗菌药物、或者实验室检验周期长延误治疗的问题。
4.本实用新型采用的技术方案是：一种兽医临床用细菌采样培养与药敏的组合试剂盒， 它包括盒体和盒盖，所述盒体内设有固定圈，固定圈的一侧设置泡沫固定槽，泡沫固定槽内设置两根肉汤管；固定圈的另一侧设有棉棒；固定圈内放置培养皿，培养皿的上方设置药敏试纸圈和密封袋；固定圈的周边设有便于拿取的固定圈缺口，固定圈的顶部设有固定带；所述肉汤管采用管帽与管壁外侧螺纹连接，管壁内侧与管帽上的第一密封环、第二密封环相接触；管帽中间设置通孔，通孔的顶部设有带提手的柱塞；
5.所述培养皿采用平皿上设置皿盖，平皿通过环形隔段分为内圆和外环，内圆为第五区，外环由四个隔断均分为四个区，分别为第一区、第二区、第三区和第四区；所述药敏试纸圈上设置6片药敏纸片。
6.肉汤管配泡沫固定槽以保持直立，肉汤管中一管为胰蛋白胨大豆肉汤，另一管为疱肉汤。肉汤管设计两种封口模式，管帽完全封闭时用于厌氧菌培养，用提手打开柱塞时，用于需氧菌、兼性厌氧菌培养。
7.针对兽医临床常见的致病菌，包括肠杆菌科致病菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、嗜血及副嗜血杆菌等，设计了四种选择培养基，包括麦康凯琼脂培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、哥伦比亚cna血液琼脂、巧克力琼脂，同时对应设计了双环形5分区培养皿，制备好并经灭菌处理的四种选择培养基分别灌注到培养皿的外环4个分区中，中央区灌注药敏试验专用培养基（水解酪蛋白培养基）。所述试剂盒中设有3个培养皿，培养皿中第一区内设置麦康凯琼脂培养基，第二区内设置金黄色葡萄球菌显色培养基，第三区内设置哥伦比亚can血液琼脂，第四区内设置巧克力琼脂，第五区内设置水解酪蛋白培养基。
8.将兽医临床常用的有代表性的抗菌药物制成符合clsi标准的药敏纸片或购买商
品化药敏纸片。设计药敏纸片圈，将药敏纸片贴在药敏纸片圈上。每个药敏纸片圈可贴6片药敏纸片，药敏纸片圈以纸片向下的方式贴合于培养基平皿中央区的药敏试验培养基上。所述试剂盒中设有3种药敏试纸圈，第一种药敏试纸圈的药敏纸片上的药物为：青霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林、头孢噻肟、阿莫西林/克拉维酸；第二种药敏试纸圈的药敏纸片上的药物为庆大霉素、卡那霉素、土霉素、阿米卡星、多西环素、恩诺沙星；第三种药敏试纸圈的药敏纸片上的药物为氧氟沙星、氟苯尼考、红霉素、林可霉素、磺胺、磷霉素。
9.用双头棉棒进行细菌接种，棉棒尖头端可少量取样在四种培养基上划线分离细菌，圆头端可多量取样在药敏试验区均匀涂布，同时将取样后的圆头端剪下置于增菌肉汤管中做增菌培养。
10.本实用新型的有益效果为：该试剂盒包括培养皿、药敏试纸圈、肉汤管和泡沫固定槽，肉汤管设置在泡沫固定槽中保持直立。培养皿中划分为5个区，外环中划分4个区，分别放置常见致病菌的培养基；中央区灌注药敏试验专用培养基。增菌肉汤管包括胰蛋白胨大豆肉汤和疱肉汤（疱肉汤覆盖液体石蜡），当患病动物因病程长、迁延不愈、经过治疗等原因导致所采样品细菌量少或存在厌氧菌、苛养菌的情况，防止漏检而设计增菌培养。肉汤管的管帽设置有氧模式和厌氧模式。该试剂盒同步进行多种细菌选择性分离培养，缩短了实验室检验时间，防止对致病菌的漏检和误判。在细菌感染急性期,可直接用病料做药敏试验，快速筛选敏感药物用于治疗，可以缩短病程,节约开支，杜绝抗生素滥用。对于不易保存,短时间易死亡的细菌,在采样同时即进行培养比常规采样保存运输的方法检出率提高。
附图说明
11.图1是一种兽医临床用细菌采样培养与药敏的组合试剂盒的结构图。
12.图2是一种兽医临床用细菌采样培养与药敏的组合试剂盒的俯视图。
13.图3是肉汤管中管帽部分的放大图。
14.图4是培养皿的结构图。
15.图5是药敏试纸圈的结构图。
16.图中：1、盒盖，2、盒体，3、肉汤管，3a、管帽，3b、提手，3c、柱塞，3d、第一密封环，3e、第二密封环，3f、管壁，4、培养皿，4a、第一区，4b、第二区，4c、第三区，4d、第四区，4e、第五区，4f、皿盖，4g、平皿，5、药敏试纸圈，5a、药敏纸片，6、棉棒， 7、泡沫固定槽，8、固定圈，8a、固定圈缺口，8b、固定带，9、密封袋。
具体实施方式
17.以下结合附图及具体实施方式对本实用新型进行说明：
18.图1、图2示出了一种兽医临床用细菌采样培养与药敏的组合试剂盒，所述盒体2内设有固定圈8，固定圈8的一侧设置泡沫固定槽7，泡沫固定槽7内设置两根肉汤管3；固定圈8的另一侧设有棉棒6；固定圈8内放置培养皿4，培养皿4的上方设置药敏试纸圈5和密封袋9；固定圈8的周边设有便于拿取的固定圈缺口8a，固定圈8的顶部设有固定带8b。
19.图3示出了肉汤管管帽的结构，肉汤管3采用管帽3a与管壁3f外侧螺纹连接，管壁3f内侧与管帽3a上的第一密封环3d、第二密封环3e相接触；管帽3a中间设置通孔3g，通孔3g的顶部设有带提手3b的柱塞3c。所述肉汤管3中一管为胰蛋白胨大豆肉汤，另一管为疱肉
汤。
20.图4为培养皿的结构，培养皿4采用平皿4g上设置皿盖4f，平皿4g通过环形隔段4i分为内圆和外环，内圆为第五区4e，外环由四个隔断4h均分为四个区，分别为第一区4a、第二区4b、第三区4c和第四区4d；所述试剂盒中设有3个培养皿4，培养皿4中第一区4a内设置麦康凯琼脂培养基，第二区4b内设置金黄色葡萄球菌显色培养基，第三区4c内设置哥伦比亚can血液琼脂，第四区4d内设置巧克力琼脂，第五区4e内设置水解酪蛋白培养基。
21.图5为药敏试纸圈的结构，药敏试纸圈5上设置6片药敏纸片5a。所述试剂盒中设有3种药敏试纸圈5，第一种药敏试纸圈5的药敏纸片5a上的药物为：青霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林、头孢噻肟、阿莫西林/克拉维酸；第二种药敏试纸圈5的药敏纸片5a上的药物为庆大霉素、卡那霉素、土霉素、阿米卡星、多西环素、恩诺沙星；第三种药敏试纸圈5的药敏纸片5a上的药物为氧氟沙星、氟苯尼考、红霉素、林可霉素、磺胺、磷霉素。
22.试剂盒中包含3个具盖双环形与分区培养基平皿、3个双环形6片药敏纸片圈、2个具盖增菌肉汤管、10支双头棉棒和1个密封袋。
23.培养皿4中平皿4g为一次性硬塑材料，外环直径120mm，内环直径90mm，深度20mm，分隔成4个区，每区90
°
，4个区为4种固体细菌分离培养基。中间第5区为药敏试验培养基。皿盖4f的直径123mm，深度12mm。
24.药敏纸片圈5的外环直径88mm，内环直径76mm，厚度5mm，空心硬塑材料，圈上贴直径为6mm，厚度0.7mm的药敏纸片6片，每片纸片间隔60
°
，共计3个药敏纸片圈18种兽医临床常用药物，每个药敏试纸圈5都采用独立无菌包装。培养皿4与药敏试纸圈5统一被封在无菌袋中，放在在固定圈8内，不会随着试剂盒的运输而滚动。
25.增菌用肉汤管3为白色透明硬塑圆底小试管，高65mm，内径12mm，管帽3a有两种模式，第一种为管帽3a与管壁3f之间完全密封，隔绝空气。第二种将提手3b带柱塞3c拔出，管帽3a中间的通孔3g允许空气进入。肉汤管有两管，一管内装胰蛋白胨大豆肉汤（tsb），另一管装疱肉汤（pbm），液面高度35mm左右，肉汤管配泡沫固定槽以保持直立。双头棉棒：灭菌棉棒，一端为尖头，一端为圆头，棉棒长90mm。密封袋为30
×
20cm密封塑料袋。
26.采用上述技术方案工作时，采用以下步骤：
27.s1、打开盒盖后，将固定带取下；用棉棒圆头端以无菌术式蘸取病料后剪下置于增菌肉汤管中（两管），其中胰蛋白胨大豆肉汤(tsb)管帽为空气进入模式，疱肉汤管帽为隔绝空气模式，采样完成后用肉汤管用泡沫固定槽固立好直立放置；
28.s2、用棉棒尖头端以无菌术式少量蘸取病料在培养基平皿4个分离培养区逐一划线，估计细菌量多少可采用连续划线、二分划线、三分划线或四分划线；
29.s3、用棉棒圆头端蘸取组织渗出液、分泌物等在培养基平皿第五区药敏试验培养基表面均匀涂布3次，每次旋转60
°
，最后沿平板内缘涂抹一周，盖盖，静置3
‑
5min。
30.s4、将药敏纸片圈以纸片向下紧贴于培养基平皿第五区。
31.s5、 将接种好的培养基平皿正放置于密封袋中，带回实验室于37℃培养，如必要可将3个培养基平皿中的一个置于5%
‑
10% co2条件下培养。
32.s6、培养24h后，如药敏试验区的细菌呈均匀融合生长，抑菌圈呈半圆形，抑菌圈内及边缘完全完全无菌生长，则可以测量抑菌圈半径，得出抑菌圈直径，初步判断敏感，半价或耐药的抗菌药物。初判标准如表。
33.药敏试验初判标准
34.抑菌圈直径（mm）敏感性>20高敏感10
‑
19中敏感<10低敏感0不敏感
35.s7、根据培养基平皿1
‑
4区细菌分离培养结果进行进一步的细菌学检验及标准的药敏试验操作，以获得更为准确的结果。