一种脱毒紫杉醇及其制备方法、具有抗癌作用的中药组合物和应用与流程

1.本发明属于生物技术领域，具体涉及一种脱毒紫杉醇及其制备方法、具有抗癌作用的中药组合物和应用。


背景技术：

2.紫杉醇是目前世界上治疗癌症的最有效的广谱药物，但由于紫杉醇毒性很大，未经脱毒的紫杉醇会产生抑止骨髓造血功能、白细胞下降等严重毒副作用。在临床应用上，未经脱毒的紫杉醇常常造成过敏反应、骨髓抑制反应、神经毒性反应、心血管毒性反应、胃肠道反应、肝脏毒性反应和/或脱发反应等不良反应。可见，紫杉醇中毒性成分大大限制了紫杉醇在药物制备和临床中的应用。


技术实现要素：

3.有鉴于此，本发明的目的在于提供一种脱毒紫杉醇及其制备方法，能够有效脱除紫杉醇的毒性成分。
4.本发明的目的提供一种具有抗癌作用的中药组合物和应用，所述中药组合物将红豆杉提取物(脱毒紫杉醇)融入中药复配而成，具有调节人体功能、促进细胞生长、增强机体免疫力、促进人体新陈代谢、抑制癌细胞病变、增强体力各组织器官的功能。
5.本发明提供了一种脱毒紫杉醇的制备方法，包括以下步骤：
6.1)将s7红豆杉新鲜枝叶经蒸汽蒸制，得到蒸制的s7红豆杉材料；
7.2)将所述蒸制的s7红豆杉材料用老醋润湿，加热处理，降温至0～2℃，得到预处理的s7红豆杉材料；
8.3)将所述预处理的s7红豆杉材料与红岩土混合，翻炒，分离s7红豆杉材料与草姜液混合脱毒，得到脱毒后的s7红豆杉材料；
9.4)将所述脱毒后的s7红豆杉材料粉碎后，用水浸提，所得浸提液加热萃取，得到含脱毒紫杉醇的提取物。
10.优选的，步骤1)中蒸汽蒸制的温度为280～320℃；
11.所述蒸汽蒸制的的时间为3～8min。
12.优选的，步骤2)中所述加热处理的时间为15～25min。
13.优选的，步骤3)中所述翻炒为文火翻炒；
14.所述翻炒的时间为12～15min。
15.优选的，步骤3)中分离s7红豆杉材料与草姜液混合脱毒进行两次；
16.第一次脱毒时，s7红豆杉新鲜枝叶和草姜液的质量比为1:(0.8～3.6)；
17.所述第一次脱毒后，将s7红豆杉材料再与草姜液混合进行第二次脱毒；
18.所述粉末和草姜液的质量比为1:(0.2～1.6)。
19.优选的，步骤4)中粉碎后所述粉末的粒径为100～150目；
20.步骤4)中用水浸提时，粉碎后所述粉末与水的质量比为1:(2～5)；
21.所述加热萃取的温度为25～52℃；
22.所述加热萃取的时间为10～15min。
23.本发明提供了所述制备方法制备得到的脱毒紫杉醇。
24.本发明提供了一种具有抗癌作用的中药组合物，包括以下重量份的原料：s7红豆杉新鲜枝叶21～63份、野甘草0.2～0.7份、冬虫夏草0.3～0.55份、蒲公英0.3～0.9份、乌贼骨0.02～0.05份、黄精0.3～0.7份、丹参0.2～0.8份、蜈蚣0.1～0.4份、沉香0.02～0.1份、黄芪0.3～1.1份、红花0.1～0.5份和土茯苓0.3～1.4份。
25.优选的，还包括以下重量份的辅料：粮制酒750～1750份、老醋500～1500份、蜂蜜水200～350份和草姜液210～530份。
26.本发明提供了所述中药组合物在制备抗癌药物中的应用。
27.本发明提供了一种脱毒紫杉醇的制备方法，本发明首先将s7红豆杉新鲜枝叶进行蒸汽蒸制，可起到保护活性成分的作用，再用老醋处理，对s7红豆杉新鲜枝叶中起到分解作用，在用红岩土进行翻炒实现分离毒素作用，最后用草姜液进行脱毒，再经水溶提取，实现紫杉醇提取的同时去除毒性物质，得到脱毒紫杉醇浸膏原料药。本发明提供的制备方法能够将发挥药效成分的生物碱全部保留下来，去除全部或大部分毒性成分，从而实现脱毒紫杉醇的应用范围。同时本发明提供的制备方法工艺步骤简洁，操作容易，而且安全无污染，容易推广使用。
28.本发明提供了一种具有抗癌作用的中药组合物，将脱毒紫杉醇与有抗肿瘤、抗菌疗效的中草药物一起协同作用，沿用祖传的九味七制扶正固本、清热解毒秘制技术工艺基础上，又采用祖传的火、热、凉、草姜配方、三元灸制技术工艺进行脱毒，又附集了活血化瘀、排异体内病毒、护肾养肝突击疗效。同时在匹配中草药上改良了其中传统中药的炮制工艺，提升其中药潜在及复方制剂功效；调节肿瘤细胞信号传导、抑制端粒酶活性等作用机制达到抗肿瘤的目的。因此，所述中药组合物具有调节人体功能、促进细胞生长、增强机体免疫力、促进人体新陈代谢、抑制癌细胞病变、增强体力各组织器官的功能。
具体实施方式
29.本发明提供了一种脱毒紫杉醇的制备方法，包括以下步骤：
30.1)将s7红豆杉新鲜枝叶经蒸汽蒸制，得到蒸制的s7红豆杉材料；
31.2)将所述蒸制的s7红豆杉材料用老醋润湿，加热处理，降温至0～2℃，得到预处理的s7红豆杉材料；
32.3)将所述预处理的s7红豆杉材料与红岩土混合，翻炒，分离s7红豆杉材料与草姜液混合脱毒，得到脱毒后的s7红豆杉材料；
33.4)将所述脱毒后的s7红豆杉材料粉碎后，用水浸提，所得浸提液加热萃取，得到含脱毒紫杉醇的提取物。
34.本发明将s7红豆杉新鲜枝叶经蒸汽蒸制，得到蒸制的s7红豆杉材料。
35.在本发明中，所述s7红豆杉新鲜枝叶的种类没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的红豆杉的品种即可。在本发明实施例中，以s7红豆杉品种为例加以说明脱毒效果。所述s7红豆杉新鲜枝叶优选包括红豆杉的鲜枝叶材料和红豆杉茎枝材料等。所述蒸制前优
选讲所述s7红豆杉新鲜枝叶剪碎后漂洗。所述剪碎后材料的长度优选为2～3cm，更优选为2.5cm。
36.在本发明中，蒸汽蒸制的温度优选为280～320℃，更优选为300℃。所述蒸汽蒸制的的时间优选为3～8min，更优选为5～7min。所述蒸汽蒸制优选在雾化蒸汽装置中进行。所述s7红豆杉新鲜枝叶优选置于竹匾筛内进行蒸制。所述蒸汽蒸制的过程中优选伴随翻动，以便使s7红豆杉新鲜枝叶受热均匀。
37.蒸制后，本发明将所述蒸制的s7红豆杉材料用老醋润湿，加热处理，降温至0～2℃，得到预处理的s7红豆杉材料。
38.在本发明中，所述加热处理的时间优选为15～25min，更优选为18～22min，最优选为20min。本发明对所述老醋的用量没有特殊限制，以润湿s7红豆杉新鲜枝叶表面的程度为宜。
39.得到预处理的s7红豆杉材料后，本发明将所述预处理的s7红豆杉材料与红岩土混合，翻炒，分离s7红豆杉材料与草姜液混合脱毒，得到脱毒后的s7红豆杉材料。
40.在本发明中，所述预处理的s7红豆杉材料和红岩土的质量比为1:0.2～3，更优选为1:0.5～2.5，进一步优选为1:1～2.0，最优选为1:1.5。所述翻炒优选为文火翻炒。所述翻炒的时间优选为12～15min，更优选为13～14min。所述翻炒优选在铁锅中进行。所述翻炒后，优选进行降温后再与草姜液混合。所述降温至5～8℃。
41.在本发明中，分离s7红豆杉材料与草姜液混合脱毒优选进行两次。第一次脱毒时，s7红豆杉材料和草姜液的质量比优选为1:(0.8～3.6)，更优选为1:1～3.2，进一步优选为1:1.5～2.8，最优选为1:2.2。所述第一次脱毒后，优选将s7红豆杉材料再与草姜液混合进行第二次脱毒。所述粉末和草姜液的质量比优选为1:(0.2～1.6)，更优选为1:0.4～1.2，进一步优选为1:0.6～1.0，最优选为1:0.8。
42.得到脱毒后的s7红豆杉材料后，本发明将所述脱毒后的s7红豆杉材料粉碎后，用水溶浸提，所得浸提液加热萃取，得到脱毒紫杉醇。
43.在本发明中，粉碎后所述粉末的粒径优选为100～150目，更优选为120～140目，最优选为130目。用水溶浸提时，粉碎后所述粉末与水的质量比优选为1:(2～5)，更优选为1:3～4。所述加热萃取的温度优选为25～52℃，更优选为30～48℃，进一步优选为35～42℃，最优选为38℃。所述加热萃取的时间优选为10～15min，更优选为12～14min，最优选为13min。
44.在本发明中，所述加热萃取后，优选将所得萃取液进行浓缩后得到浸膏，再经灭菌和干燥后，得到含脱毒紫杉醇的提取物。
45.本发明提供了所述制备方法制备得到的脱毒紫杉醇浸膏原料药(固体、液体或粉末)。
46.本发明提供了一种具有抗癌作用的中药组合物，包括以下重量份的原料：所述s7红豆杉新鲜枝叶21～63份、野甘草0.2～0.7份、冬虫夏草0.3～0.55份、蒲公英0.3～0.9份、乌贼骨0.02～0.05份、黄精0.3～0.7份、丹参0.2～0.8份、蜈蚣0.1～0.4份、沉香0.02～0.1份、黄芪0.3～1.1份、红花0.1～0.5份和土茯苓0.3～1.4份。
47.在本发明中，所述中药组合物，包括以下重量份的原料：所述s7红豆杉新鲜枝叶28～57份、野甘草0.25～0.6份、冬虫夏草0.35～0.5份、蒲公英0.4～0.8份、乌贼骨0.022～0.04份、黄精0.4～0.6份、丹参0.3～0.7份、蜈蚣0.2～0.3份、沉香0.04～0.08份、黄芪0.4
～1.0份、红花0.2～0.4份和土茯苓0.5～1.2份，优选为所述s7红豆杉鲜枝叶45份、野甘草0.39份、冬虫夏草0.40份、蒲公英0.45份、乌贼骨0.025份、黄精0.5份、丹参0.3份、蜈蚣0.2份、沉香0.045份、黄芪0.4份、红花0.25份和土茯苓0.6份。本发明按中医复方互补、相似相容原理，还根据我国千年中医巨著《黄帝内经》的就用“气、血、阴、阳”中医调补辩证补益法，融入含有机硒元素s7红豆杉所具有的抗癌特性植物紫杉醇提取物，与有抗肿瘤、抗菌疗效的中草药物一起协同作用，沿用祖传的九味七制扶正固本、清热解毒秘制技术工艺基础上，又采用祖传的火、热、凉、草姜配方、三元灸制技术工艺进行脱毒，又附集了活血化瘀、排异体内病毒、护肾养肝突击疗效。同时在匹配中草药上改良了其中传统中药的炮制工艺，提升其中药潜在及复方制剂功效；调节肿瘤细胞信号传导、抑制端粒酶活性等作用机制达到抗肿瘤的目的。
48.在本发明中，所述中药组合物优选还包括以下重量份的辅料：粮制酒750～1750份、老醋500～1500份、蜂蜜水200～350份和草姜液210～530份。所述蜂蜜水的体积百分含量为80％～120％，更优选为90％。
49.在本发明中，所述中药组合物的制备方法，优选包括以下步骤：
50.1)将野甘草、冬虫夏草、蒲公英、乌贼骨和老醋混合，用武火炒制，炒制后的混合物经晾晒、烘干后粉碎、过筛得到第一粉末；
51.2)将蜈蚣、丹参、红花、沉香、黄芪、土茯苓与粮制酒、老醋、蜂蜜水和草姜液进行翻炒，炒制的混合物经晾晒、烘干后粉碎，得到第二粉末；
52.3)将所述第一粉末、第二粉末和上述技术方案制备的含脱毒紫杉醇的提取物混合后，使用含微量食用表面活性剂的混合溶剂全量提取，分子筛进行多重分离，得到粗品；
53.4)将所述粗品经粉碎、水溶浸提、浸提液收集膜下物后去除水分，得到中药组合物。
54.在本发明中，所述武火炒制的时间优选为1～3min，更优选为2min。所述翻炒的时间优选为3～8min，更优选为4～7min，最优选为5～6min。所述翻炒的温度优选为120～200℃，更优选为150～180℃，最优选为160～170℃。所述含微量食用表面活性剂的混合溶剂优选为老醋和草姜液按照体积比为100～300:20～65混合形成的混合溶剂。所述食用表面活性剂优选为草姜液。
55.本发明提供了所述中药组合物在制备抗癌药物中的应用。同时所述中药组合物具有调节人体功能、促进细胞生长、增强机体免疫力、促进人体新陈代谢、抑制癌细胞病变、增强体力各组织器官的功能，本发明还提供了所述中药组合物在制备提高机体免疫力、促进人体新陈代谢的药物中的应用。
56.下面结合实施例对本发明提供的一种脱毒紫杉醇及其制备方法、具有抗癌作用的中药组合物和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
57.实施例1
58.一种脱毒紫杉醇的制备方法
59.1)将新鲜s7红豆杉的茎和枝叶为材料，剪成2～3cm长的碎段或碎片，漂洗干净后放入竹匾筛内在300℃蒸汽中不停翻动，蒸制5分钟后，再在100℃进行干炒雾化至枝叶收缩，软感、色鲜时(干炒雾化7分钟)，再加入老醋拌均匀，继续高温加湿浸润25分钟，然后倒入竹匾，散开吹凉4小时，稳定0～2℃下保存备用；
60.2)取上述备用的新鲜s7红豆杉茎和枝叶加1倍质量的红岩土混合，置于铁锅上进行文火翻炒12分钟，翻炒后分离红豆杉茎和枝叶，放在青石板降温至8℃成热，喷施2.4重量倍的草姜液搅拌均匀，放置阴凉1～3℃，再加1倍重量的草姜液使鲜枝叶脱毒，脱毒后的红豆杉茎和枝叶烘干，粉碎至150目粉末，加水加热浸提(20℃)得滤液，将滤液加热至52℃，加热15分钟得萃取液，萃取液经3次减压浓缩脱毒得到浸膏晶体，再经过红外线灭菌、焙干、粉碎至200～300目过筛，收集s7红豆杉粉末备用。
61.实施例2
62.一种脱毒紫杉醇的制备方法
63.1)将新鲜s7红豆杉的茎和枝叶为材料，剪成2～3cm长的碎段或碎片，漂洗干净后放入竹匾筛内在280℃蒸汽中不停翻动，蒸制5分钟后，再在130℃进行干炒雾化至枝叶收缩，软感、色鲜时(干炒雾化5分钟)，再加入老醋拌均匀，继续高温加湿浸润15分钟，然后倒入竹匾，散开吹凉3小时，稳定0～2℃下保存备用；
64.2)取上述备用的新鲜s7红豆杉茎和枝叶加2倍质量的红岩土混合，置于铁锅上进行文火翻炒12分钟，翻炒后分离红豆杉茎和枝叶，放在青石板降温至8℃成热，喷施3.6重量倍的草姜液搅拌均匀，放置阴凉1～3℃，再加1倍重量的草姜液使鲜枝叶脱毒，脱毒后的红豆杉茎和枝叶烘干，粉碎至100目粉末，加水加热浸提(35℃)得滤液，将滤液加热至25℃，加热25分钟得萃取液，萃取液经3次减压浓缩脱毒得到浸膏晶体，再经过红外线灭菌、焙干、粉碎至200～300目过筛，收集s7红豆杉粉末备用。
65.实施例3
66.一种具有抗癌作用的中药组合物的制备方法
67.1.准确称量以下质量的组分：
68.中药原料：实施例1或2中用s7红豆杉鲜枝叶45kg制备的s7红豆杉粉末、野甘草0.39kg、冬虫夏草0.40kg、蒲公英0.45kg、乌贼骨0.025kg、丹参0.3kg、黄精0.5kg、蜈蚣0.2kg、沉香0.045kg、黄芪0.4kg、红花0.25kg和土茯苓0.6kg。
69.辅料：粮制酒1250kg、老醋1000kg、蜂蜜水250kg和草姜液400kg。
70.2.具体炮制工艺
71.1)将野甘草、冬虫夏草、蒲公英、乌贼骨和总质量50％的老醋混合，用武火炒制2min，炒制后的混合物经晾晒、红外线慢烘干后粉碎、过筛，收集筛下物，得到第一粉末；
72.2)将蜈蚣、丹参、红花、沉香、黄芪、土茯苓与粮制酒、剩余量的老醋、蜂蜜水和草姜液混合，在150℃下翻炒5min，炒制的混合物经晾晒、红外线慢烘干后粉碎和过筛，收集筛下物，得到第二粉末；
73.3)将所述第一粉末、第二粉末和s7红豆杉粉末混合后，使用混合溶剂(老醋：草姜液＝200:35，v/v)和微量食用表面活性剂(96％)全量提取，分子筛进行多重分离，得到粗品；
74.4)将所述粗品经粉碎至100目，然后加入5倍质量的水浸提28小时，获得的浸提液进行膜过滤(过滤膜的孔径为0.03μm)，收集膜下物后经浓缩和烘干去除水分，经获得固体粉碎至200～300目粉末，经真空包装，得到中药组合物。
75.实施例4
76.将实施例3制备的中药组合物的灌胃给予sd大鼠的急性毒性试验
77.1.给药方法
78.sd大鼠30只，雌雄各半，随机分成3组，每组10只(5雌5雄)，分别在阴性对照组、供试低剂量组和供试高剂量组，分别灌胃给予氯化钠注射液、实施例3制备的中药组合物5g/kg和10g/kg，与1天内分2次给药，两次给药间隔2～3h，动物组别及给药剂量见表1。给药2周(d15)，所有动物均进行大体解剖，记录肉眼可见病变，对不能排除与供试品毒性相关的大体解剖所见异常的组织器官，用10％中性缓冲液福尔马林溶液固定并进行组织病例学检测。
79.表1动物分组及给药剂量
[0080][0081]
2.结果
[0082]
2.1死亡率
[0083]
试验期间，各组均未见动物死亡
[0084]
2.2给药后2周(d15)
[0085]
对所有动物进行大体解剖，各组均未见大体病变。
[0086]
在本实施例条件下，中药组合物灌胃给予sd大鼠，给药2周后，≤10g/kg未见供试品相关性大体病变。
[0087]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。