用于培养蛭弧菌的弧菌饵料的制作方法

1.本发明涉及蛭弧菌培养技术领域，具体涉及一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料。


背景技术：

2.水产养殖业在近几十年例随着人们生活水平提高而日益发展，取得了长足的进步。但随着养殖规模的不断扩大，养殖环境也逐步恶化，养殖病害越发严重，给水产养殖业带来了巨量的经济损失。当中，细菌性疾病是制约水产养殖业的一个重要原因。抗生素等药物虽然是防治疾病较为有效的手段但是细菌容易产生耐药性，并且会对人体健康产生影响，这迫使人们寻找能够解决防病治病的新途径，生物防治成为人们的关注热点。蛭弧菌不光在水产养殖具有重要作用，在家禽养殖、食品保藏、医学治疗等领域也有非常好的应用前景。
3.蛭弧菌具有一般细菌的特性，革兰氏染色呈阴性，短杆或弧状。也有螺旋状，个体一般小于普通细菌，能通过过滤器；体型宽0.25～0.4μm，长0.8～1.2μm，细胞的一端有极长的鞭毛，鞭毛常带有鞘，是细胞壁的衍生物，同时包有丝状体。蛭弧菌进入宿主菌体中，形成蛭质体，随后蛭质体自身的外膜逐渐破裂，而蛭弧菌本身的细胞核由紧密状态向四周扩大，随着自身外膜的彻底破裂，开始进行延伸生长阶段。蛭弧菌常侵染的宿主菌包括杀对虾弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌等。
4.副溶血性弧菌是一种嗜盐的革兰氏阴性菌，最适宜生长在含盐量为2％～4％的环境中，因此主要存在于江河湖海、海底沉积物、各类海产品及盐渍食品中。该菌在天然水产品中有很高的携带率，在温暖的季节尤其是夏季检出率可以高达90％。
5.近年来，植物源活性物质因具有天然、安全和营养等优点而受到广泛关注，越来越多的研究者将目光投向天然的植物源活性物质，研究其抑制食源性致病菌的功效。


技术实现要素：

6.针对上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料。
7.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
8.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
9.所述培育过程为：将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于摇床中。
10.优选的，所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为40
‑
80rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.3
‑
8.7；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到109‑
10
10
cfu/ml时完成培育。
11.最优选的，所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧
量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
12.所述增透培养基由混合蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、酵母浸膏、蒸馏水、芳香植物提取物混合均匀得到。
13.优选的，所述增透培养基由8
‑
12重量份混合蛋白胨、27
‑
35重量份氯化钠、0.1
‑
4重量份磷酸氢二钾、0.1
‑
3.8重量份磷酸二氢钾、1
‑
5重量份酵母浸膏、900
‑
1100重量份蒸馏水、0.4
‑
0.55重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
14.最优选的，所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.5重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
15.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨中的一种或者两种的混合物。优选的，所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比(0.1
‑
5):(0.1
‑
5)的混合物。最优选的，所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
16.所述芳香植物提取物的制备方法为：
17.⑴
将芳香植物粉碎后过筛，采用co2超临界萃取；萃取完毕后得到油状物；
18.⑵
将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并搅拌，得到所述芳香植物提取物。
19.优选的，所述芳香植物提取物的制备方法为：
20.⑴
将芳香植物粉碎后过10
‑
20目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力21
‑
24mpa，萃取温度43
‑
47℃，解析压力6
‑
9mpa，解析温度18
‑
26℃，co2流量为3
‑
5l/h，萃取时间2
‑
4h；萃取完毕后得到油状物；
21.⑵
在12
‑
17℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以60
‑
180rpm的转速搅拌10
‑
30min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为(80
‑
120):(20
‑
40):(5
‑
20):(1
‑
5)。
22.最优选的，所述芳香植物提取物的制备方法为：
23.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
24.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
25.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹中的一种或者多种的混合物。优选的，所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比(1
‑
10):(1
‑
10):(1
‑
10):(1
‑
10):(1
‑
10)的混合物。最优选的，所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
26.所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙中的一种或者两种的混合物。优选的，所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙按质量比(0.1
‑
5):(0.1
‑
5)的混合物。最优选的，所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙按质量比1:1的混合物。
27.采用本发明特定方法制得的芳香植物提取物中含有丰富的环柠檬醛、异环柠檬醛、香柠檬醛、香叶醇、橙花醇、柠檬腈、香茅醛等物质，这些物质能使副溶血弧菌细胞膜电
位去极化，影响了副溶血弧菌膜外蛋白的表达，改变了副溶血弧菌细胞膜的通透性，这就为蛭弧菌侵染副溶血弧菌提供了便利；并且，由本发明特定方法制得的弧菌饵料，虽然副溶血弧菌的细胞膜通透性发生变化，但并不会阻碍副溶血弧菌的正常生理活动，因此仍然能够繁殖出充足浓度的副溶血弧菌并供于蛭弧菌侵染，以达到增大蛭弧菌产率的目的。采用co2超临界萃取可以增大对于芳香植物中活性成分的萃取效率并保证其活性和纯度。异芒果苷和虎杖甙的分子结构中含有丰富的酚羟基因而具有较强的还原性，可以减缓芳香植物提取物的氧化过程，增大了芳香植物提取物中的活性成分的反应活性和持效时间；虎杖甙中的酮基和异芒果苷中的碳碳双键使得该两种抗氧化剂在复配使用时可以进一步增大了芳香植物提取物中的活性成分的反应活性和持效时间，达到协同增效的效果。
28.本发明的有益效果：提供了一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，该饵料容易被蛭弧菌侵染，可以显著增大蛭弧菌的产率。
具体实施方式
29.下面结合具体实施方式对本发明的上述发明内容作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。
30.本技术中部分原料的介绍：
31.副溶血弧菌：vibrio parahaemolyticus，cgmcc：1.1997，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。作用：作为被蛭弧菌寄生的宿主菌，即饵料本身。
32.氯化钠，cas：7647
‑
14
‑
5，购于南京化学试剂股份有限公司，货号：c0130514023，等级：acs。作用：维持培养基的渗透压，提供副溶血弧菌生存和繁殖所必需的盐度。
33.磷酸氢二钾，cas：7758
‑
11
‑
4，购于南京化学试剂股份有限公司，货号：c0113530275，等级：ar。作用：提供培养基中钾元素和磷元素、稳定培养基的ph。
34.磷酸二氢钾，cas：7778
‑
77
‑
0，购于南京化学试剂股份有限公司，货号：c0113510276，等级：ar。作用：提供培养基中钾元素和磷元素、稳定培养基的ph。
35.酵母浸膏，cas：8013
‑
01
‑
2，购于西亚化学科技(山东)有限公司，货号：a12839
‑
500g。作用：碳源。
36.鱼蛋白胨，购于西亚化学科技(山东)有限公司，货号：a14516
‑
250g。作用：氮源、碳源。
37.胰蛋白胨，cas：76
‑
84
‑
6，购于西亚化学科技(山东)有限公司，货号：a15132
‑
250g。作用：氮源、碳源。
38.食用明胶，cas：9000
‑
70
‑
8，购于西亚化学科技(山东)有限公司，货号：a12803
‑
500g。作用：碳源、氮源、芳香植物提取物的增稠剂。
39.罗勒：ocimum basilicum，购于济南绿禾农业科技开发有限公司。作用：芳香植物提取物的制备原料。
40.苦橙：citrus aurantium l.，购于博白县三滩镇展宏农副产品经营部。作用：芳香植物提取物的制备原料。
41.青柠：citrus aurantiifolia，购于阳谷润泽方圆粮食种植专业合作社。作用：芳香植物提取物的制备原料。
42.佛手柑：citrus medica l.var.sarcodactylis swingle，购于亳州市亿弘堂药业
有限公司。作用：芳香植物提取物的制备原料。
43.欧芹：petroselinum crispum(mill.)hill，购于兴化市嘉禾食品有限公司。作用：芳香植物提取物的制备原料。
44.异芒果苷，cas：24699
‑
16
‑
9，购于四川省维克奇生物科技有限公司，货号：wkq
‑
00661，纯度:hplc≥98％。作用：防止芳香植物提取物被氧化。
45.虎杖甙，cas：65914
‑
17
‑
2，购于默克化工技术(上海)有限公司，货号15721，等级：ar。作用：防止芳香植物提取物被氧化。
46.实施例1
47.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
48.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
49.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.5重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
50.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
51.所述芳香植物提取物的制备方法为：
52.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
53.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
54.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
55.所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙按质量比1:1的混合物。
56.实施例2
57.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
58.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
59.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.5重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
60.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
61.所述芳香植物提取物的制备方法为：
62.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
63.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂
混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
64.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
65.所述抗氧化剂为异芒果苷。
66.实施例3
67.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
68.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
69.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.5重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
70.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
71.所述芳香植物提取物的制备方法为：
72.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
73.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
74.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
75.所述抗氧化剂为虎杖甙。
76.对比例1
77.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
78.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
79.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.5重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
80.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
81.所述芳香植物提取物的制备方法为：
82.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
83.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶的质量比为100:30:15。
84.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
85.对比例2
86.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
87.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
88.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水混合均匀得到。
89.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
90.对比例3
91.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
92.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
93.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.3重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
94.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
95.所述芳香植物提取物的制备方法为：
96.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
97.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
98.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
99.所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙按质量比1:1的混合物。
100.对比例4
101.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
102.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
103.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.4重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
104.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
105.所述芳香植物提取物的制备方法为：
106.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45
℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
107.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
108.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
109.所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙按质量比1:1的混合物。
110.对比例5
111.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
112.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
113.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.6重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
114.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
115.所述芳香植物提取物的制备方法为：
116.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
117.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
118.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
119.所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙按质量比1:1的混合物。
120.对比例6
121.一种用于培养蛭弧菌的弧菌饵料，由经过增透培养基培育的副溶血弧菌组成。
122.所述培育过程为：在36℃将副溶血弧菌接种到所述增透培养基上并将所述增透培养基置于转速为60rpm的摇床中；接种量为108cfu/ml；所述增透培养基的溶氧量为20％；所述增透培养基的ph为8.6；在恒温36℃下培养；当副溶血弧菌的浓度达到10
10
cfu/ml时完成培育。
123.所述增透培养基由10重量份混合蛋白胨、30重量份氯化钠、3重量份磷酸氢二钾、1.3重量份磷酸二氢钾、3重量份酵母浸膏、1000重量份蒸馏水、0.7重量份芳香植物提取物混合均匀得到。
124.所述混合蛋白胨为鱼蛋白胨、胰蛋白胨按质量比1:3的混合物。
125.所述芳香植物提取物的制备方法为：
126.⑴
将芳香植物粉碎后过10目筛，采用co2超临界萃取；萃取压力22mpa，萃取温度45℃，解析压力7mpa，解析温度20℃，co2流量为4l/h，萃取时间3h；萃取完毕后得到油状物；
127.⑵
在15℃、氮气氛围保护下，将由步骤
⑴
所得油状物、蒸馏水、食用明胶、抗氧化剂混合并以120rpm的转速搅拌15min，得到所述芳香植物提取物；所述油状物、蒸馏水、食用明
胶、抗氧化剂的质量比为100:30:15:3。
128.所述芳香植物为罗勒、苦橙、青柠、佛手柑、欧芹按质量比1:1:1:1:1的混合物。
129.所述抗氧化剂为异芒果苷、虎杖甙按质量比1:1的混合物。
130.测试例1
131.弧菌饵料被蛭弧菌侵染的难易程度测试：采用双层平板法检测蛭弧菌对由本发明各实施例和对比例所得弧菌饵料的侵染能力，具体操作如下：吸取0.5ml、浓度10
10
cfu/ml所述副溶血弧菌和0.5ml、浓度10
14
cfu/ml的蛭弧菌充分混匀，然后加入3.5mldnb上层培养基上下摇动使其混合均匀，倾注于dnb下层平板中。待其冷凝后倒置于30℃的恒温培养箱中连续培养3天后观察噬菌斑的面积。通过噬菌斑面积来表征弧菌饵料被蛭弧菌侵染的难易程度，以培养基中噬菌斑的平均直径来表示噬菌斑的面积。测试结果如表1所示。
132.表1本发明各实施例和对比例所得弧菌饵料被蛭弧菌侵染的难易程度
[0133] 噬菌斑直径(mm)实施例12.85实施例22.59实施例32.42对比例12.09对比例21.21对比例32.57对比例42.72对比例52.96对比例63.22
[0134]
实施例1(采用异芒果苷、虎杖甙按质量比1:1的混合物作为所述抗氧化剂)的噬菌斑直径＝2.85mm明显优于实施例2
‑
3(采用异芒果苷、虎杖甙中的一种作为所述抗氧化剂)和对比例1(未采用所述抗氧化剂)的噬菌斑直径＝(2.09
‑
2.59)mm，这是因为：异芒果苷和虎杖甙的分子结构中含有丰富的酚羟基因而具有较强的还原性，可以减缓芳香植物提取物的氧化过程，增大了芳香植物提取物中的活性成分的反应活性和持效时间；虎杖甙中的酮基和异芒果苷中的碳碳双键使得该两种抗氧化剂在复配使用时可以进一步增大了芳香植物提取物中的活性成分的反应活性和持效时间，达到协同增效的效果。
[0135]
实施例1(使用由特定方法制备的芳香植物提取物)的噬菌斑直径明显优于对比例1(未采用所述抗氧化剂)、对比例2(未采用芳香植物提取物)的噬菌斑直径＝(1.21
‑
2.09)mm，这是因为：采用本发明特定方法制得的芳香植物提取物中含有丰富的环柠檬醛、异环柠檬醛、香柠檬醛、香叶醇、橙花醇、柠檬腈、香茅醛等物质，这些物质能使副溶血弧菌细胞膜电位去极化，影响了副溶血弧菌膜外蛋白的表达，改变了副溶血弧菌细胞膜的通透性，这就为蛭弧菌侵染副溶血弧菌提供了便利；并且，由本发明特定方法制得的弧菌饵料，虽然副溶血弧菌的细胞膜通透性发生变化，但并不会阻碍副溶血弧菌的正常生理活动，因此仍然能够繁殖出充足浓度的副溶血弧菌并供于蛭弧菌侵染，以达到增大蛭弧菌产率的目的。采用co2超临界萃取可以增大对于芳香植物中有效活性成分的萃取效率并保证其活性和纯度。
[0136]
测试例2
[0137]
弧菌饵料的生化性状测试：根据gb 4789.7
‑
2013《食品安全国家标准食品微生物
学检验副溶血性弧菌检验》测试由本发明实施例1所得弧菌饵料的生化性状。测试结果如表2所示。
[0138]
表2本发明实施例1所得弧菌饵料的生化性状
[0139][0140][0141]
对于由本发明特定方法培养的弧菌饵料，虽然副溶血弧菌的细胞膜通透性发生变化，但并不会阻碍副溶血弧菌的正常生理活动，因此仍然能够繁殖出充足浓度的副溶血弧菌并供蛭弧菌侵染，从而能够达到增大蛭弧菌产率的目的。
[0142]
测试例3
[0143]
芳香植物提取物的添加量对于副溶血弧菌繁殖速率的影响测试：本发明对比例3
‑
6中采用的芳香植物提取物的重量份分别为0.3、0.4、0.6和0.7，本发明实施例1中采用的芳香植物提取物的重量份为0.5重量份；实施例1和对比例3
‑
6中，将副溶血弧菌从浓度105cfu/ml培养至10
10
cfu/ml的用时如表3所示。
[0144]
表3副溶血弧菌培养用时
[0145][0146]
结合测试例1和测试例3的测试结果可知，实施例1和对比例3
‑
4三者的副溶血弧菌培养用时接近，但实施例1(采用0.5重量份芳香植物提取物)的噬菌斑直径＝2.85mm明显优于对比例3
‑
4(采用0.3或0.4重量份芳香植物提取物)的噬菌斑直径＝(2.57
‑
2.72)mm，这说明：在培养用时接近的情况下，采用0.5重量份所述芳香植物提取物能达到更好的效果，即增大蛭弧菌对于副溶血弧菌的侵染率。
[0147]
而对比例5
‑
6(采用0.6或0.7重量份的芳香植物提取物)的噬菌斑直径＝(2.96
‑
3.22)mm虽然优于实施例1的噬菌斑直径＝2.85mm，但是对比例5
‑
6的培养用时＝(57.9
‑
59.3)h显然大于实施例1的培养用时＝55.3h，这说明：在限定了副溶血弧菌的接种量和培养完成时的菌浓度的情况下，在一定范围内增大所述芳香植物提取物的用量会增大副溶血弧菌的培养用时；考虑到经济因素故选择芳香植物提取物的用量为0.5重量份。
[0148]
需要说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本邻域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围。