一种三维肝脏类器官复苏液和三维肝脏类器官的复苏方法与流程

技术特征：
1.一种三维肝脏类器官复苏液，其特征在于，其组分包括：烟酰胺50
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200mmol/l、胰岛素1
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50μg/ml、肝细胞生长因子1
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50ng/ml、表皮生长因子1
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50ng/ml、地塞米松1
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100μmol/l、胎牛血清8
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12 wt%、亚麻酸1
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50μg/ml和极性溶剂0.01
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0.1 wt %以及余量的基础培养基。2.根据权利要求1所述的三维肝脏类器官复苏液，其特征在于，其组分包括：烟酰胺80
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120mmol/l、胰岛素20
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30μg/ml、肝细胞生长因子20
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30ng/ml、表皮生长因子20
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30ng/ml、地塞米松40
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60μmol/l、胎牛血清9
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11 wt %、亚麻酸10
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25μg/ml和极性溶剂0.05
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0.08 wt%以及余量的基础培养基。3.根据权利要求1所述的三维肝脏类器官复苏液，其特征在于，所述烟酰胺和所述地塞米松用所述极性溶剂溶解后再加入所述基础培养基。4.根据权利要求1所述的三维肝脏类器官复苏液，其特征在于，所述极性溶剂为dmso。5.根据权利要求1所述的三维肝脏类器官复苏液，其特征在于，所述基础培养基选自dmem/f12细胞培养基、mem细胞培养基、william's e细胞培养基和dmem高糖细胞培养基中的一种。6.一种三维肝脏类器官的复苏方法，其特征在于，其包括：利用如权利要求1
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5任一项所述的三维肝脏类器官复苏液对冻存的三维肝脏类器官进行连续复苏培养。7.根据权利要求6所述的三维肝脏类器官的复苏方法，其特征在于，冻存的所述三维肝脏类器官中的目标肝细胞大于106；所述目标肝细胞选自肝癌细胞系或正常人肝细胞系。8.根据权利要求6所述的三维肝脏类器官的复苏方法，其特征在于，所述三维肝脏类器官包括聚球体、悬浮肝脏类器官或水凝胶类器官。9.根据权利要求6所述的三维肝脏类器官的复苏方法，其特征在于，所述连续复苏培养包括将所述三维肝脏类器官接种至低粘附孔板或者微球板中，放置于盛放有所述三维肝脏类器官复苏液的co2细胞培养箱中于35
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37℃下进行静置培养1
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5天；在所述连续复苏培养的时间内，每隔20
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30小时更换所述三维肝脏类器官复苏液；更换所述三维肝脏类器官复苏液包括：先弃去培养容器中的上清液，用缓冲液洗涤两次，接着再加入新鲜的所述三维肝脏类器官复苏液。10.根据权利要求6
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9任一项所述的三维肝脏类器官的复苏方法，其特征在于，在利用所述的三维肝脏类器官复苏液对冻存的三维肝脏类器官进行连续复苏培养之前，还包括对冻存的所述三维肝脏类器官进行预处理，所述预处理包括将冻存的所述三维肝脏类器官于35
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37℃下进行解冻，解冻后于500转/min下离心3
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5min，舍弃冻存液，采用磷酸缓冲溶液洗涤2
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3次。

技术总结
本发明公开了一种三维肝脏类器官复苏液和三维肝脏类器官的复苏方法，涉及细胞复苏液技术领域。该三维肝脏类器官复苏液的组分包括：烟酰胺50


技术研发人员：高毅 黎少 欧楚澎 彭青
受保护的技术使用者：广东乾晖生物科技有限公司
技术研发日：2021.09.14
技术公布日：2021/10/18