一种高表达司美鲁肽前体重组工程菌及其构建方法与流程

技术特征：
1.一种优化的编码融合多肽的基因片段，其序列如seq id no.7或seq id no.8所示。2.一种重组表达载体，其特征在于，所述表达载体包含权利要求1所示的基因片段。3.一种表达司美鲁肽前体的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌包含权利要求2所述的重组表达载体。4.根据权利要求3所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组表达载体为重组pet
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30a( )表达载体，所述宿主工程菌选自大肠杆菌bl21(de3)。5.根据权利要求4所述的重组工程菌，其特征在于，所述工程菌按照如下方法构建：（1）合成seq id no.7或seq id no.8所示的融合多肽编码基因；（2）将上述编码基连接至表达载体pet
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30a( )中，构建得到重组表达载体；（3）将步骤（2）构建的重组表达载体转化至大肠杆菌bl21(de3)中，得到所述重组工程菌。6.根据权利要求5所述的重组工程菌，其特征在于，所述方法的步骤（2）具体为：将步骤（1）中所述编码基因序列的5’端添加ndei酶切位点，3’端添加终止密码子以及xhoi酶切位点，然后通过酶切克隆到表达载体pet
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30a( )的ndei和xhoi酶切位点之间，从而构建得到重组表达载体pet
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a1
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glp
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1或pet
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1。7.根据权利要求6所述的重组工程菌，其特征在于，所述方法的步骤（3）具体为：将重组表达载体pet
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30a( )
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1通过热击法转化导入到大肠杆菌表达宿主bl21(de3)中，筛选得到所述重组基因工程菌。8.一种表达司美鲁肽前体的重组工程菌的构建方法，所述方法包括如下步骤：（1）合成seq id no.7或seq id no.8所示的融合多肽编码基因；（2）将上述编码基连接至表达载体pet
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30a( )中，构建得到重组表达载体；（3）将步骤（2）构建的重组表达载体转化至大肠杆菌bl21(de3)中，得到所述重组基因工程菌。9.根据权利要求8所述构建方法，其特征在于，所述方法的步骤（2）具体为：将步骤（1）中所述编码基因序列的5’端添加ndei酶切位点，3’端添加终止密码子以及xhoi酶切位点，然后通过酶切克隆到表达载体pet
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30a( )的ndei和xhoi酶切位点之间，从而构建得到重组表达载体pet
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1或pet
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1。10.根据权利要求8
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9任一项所述的构建方法，其特征在于，所述方法的步骤（3）具体为：将重组表达载体pet
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1通过热击法转化导入到大肠杆菌表达宿主bl21(de3)中，筛选得到所述重组基因工程菌。

技术总结
本发明提供了一种高效表达司美鲁肽前体的重组大肠杆菌。本发明通过在司美鲁肽前体的前端设计添加两种不同的前导肽和肠激酶酶切位点，构建一种融合多肽结构，并通过将优化后的所述多肽结构的编码基因插入pET


技术研发人员：曹海燕 连婕妮 林兆生 朱志伟 王惠 张世野
受保护的技术使用者：吉林惠升生物制药有限公司
技术研发日：2021.09.10
技术公布日：2021/10/15