转基因阮蛋白羊品系特异性数字PCR检测试剂盒及检测方法与流程

技术特征：
1.一种用于转基因阮蛋白羊品系特异性检测的引物对和探针组合，其特征在于，所述引物对的序列如下：上游引物q
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gm
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prion
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f：tgctgacaccctctttattttgc；下游引物q
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gm
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prion
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r：gattgtctgttgtgcccagtc；所述探针的序列如下：探针q
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gm
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prion
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p：tagccgaatagcctctccacccaagcg。2.根据权利要求1所述的用于转基因阮蛋白羊品系特异性检测的引物对和探针组合，其特征在于，所述探针的5’端包含有荧光报告基团，3’端包含有荧光淬灭基团。3.一种转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的引物对和探针组合。4.根据权利要求3所述的转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dna提取试剂、数字pcr预混液、微滴生成卡、微滴发生油、微滴读取油和96孔反应板。5.一种转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：a.受检样本的前处理及dna的提取；b.针对特异性序列设计并合成数字pcr引物对和探针；c.提供待测样本dna，制备反应体系并进行数字pcr检测；所述反应体系包括步骤b中的pcr引物和探针以及待测样本dna。6.根据权利要求5所述的转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，步骤b中，所述数字pcr引物对的序列如下：上游引物q
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gm
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prion
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f：tgctgacaccctctttattttgc；下游引物q
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gm
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prion
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r：gattgtctgttgtgcccagtc；所述探针的序列如下：探针q
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gm
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prion
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p：tagccgaatagcctctccacccaagcg。7.根据权利要求6所述的转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，步骤c中，所述反应体系为10ul ddpcr预混液，1ul上游引物q
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gm
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prion
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f，lul下游引物q
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gm
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r，0.5ul探针q
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gm
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prion
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p，5.5ul h2o，2ul dna，共20ul体系。8.根据权利要求6所述的转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，步骤c中，将待测样品dna稀释后加入反应体系中，通过微滴生成器生成油包水微滴，将所有微滴经常规pcr进行扩增，扩增结束后通过微滴分析仪识别所有微滴的荧光信号并给出计数结果。9.根据权利要求8所述的转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，待测样品dna稀释液的浓度为10
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20ng/μl；数字pcr有效微滴数＞8000。10.根据权利要求6所述的转基因阮蛋白羊品系特异性微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，步骤c中，pcr扩增程序为：步骤1：95℃ 5min；步骤2：95℃ 30sec，58℃ 1min，转到步骤2，39个循环；98℃ 10min；4℃ 1min。

技术总结
本发明公开了一种转基因阮蛋白羊品系特异性数字PCR检测试剂盒及检测方法；包括：受检样本的前处理及DNA的提取；针对特异性序列设计数字PCR引物和探针；优化的实验扩增体系；将待测DNA稀释后加入反应体系中，通过微滴生成仪生成油包水微滴，经PCR进行扩增，通过微滴分析仪识别所有微滴的荧光信号并给出计数结果。本发明相比传统的qPCR技术具有灵敏度显著提升，特异性强，精确度好，以及不依赖标准曲线，可以对样本进行绝对定量，缩小假阴性的优势，特别在对低拷贝数和痕量样本具有重要意义；本方法对于转基因羊的常规监管和检测提供技术依据，对于科研单位和高校的转基因羊研究同样适用，有广泛的潜在应用前景。有广泛的潜在应用前景。有广泛的潜在应用前景。


技术研发人员：杨立桃 徐文婷 张大兵
受保护的技术使用者：上海交通大学
技术研发日：2021.08.27
技术公布日：2021/10/15