一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法与流程

技术特征：
1.一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：所述干化标记方法包括以下步骤：将消毒灭菌处理后的沙地云杉的成熟种子进行剥离出胚，得到沙地云杉的成熟胚胎；将剥离出的沙地云杉成熟胚胎接种至培养基中培养，得到愈伤组织；将得到的沙地云杉愈伤组织接种到分化培养基中，诱导形成体细胞胚胎；采用“滤纸容器法”对沙地云杉的体细胞胚胎进行干化标记处理。2.根据权利要求1所述的一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：“滤纸容器法”指的是利用培养皿和滤纸的组合进行干化处理，再将至少两种“滤纸容器法”的干化处理结果进行比较，确定最佳干化处理方法。3.根据权利要求2所述的一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：所述的至少两种“滤纸容器法”中一种，即“滤纸容器法1”是将发育完全的沙地云杉的体细胞胚胎放置在底垫有两层滤纸的塑料培养皿中，塑料培养皿的最下面垫一层湿滤纸，在湿滤纸上垫一层干滤纸，将沙地云杉的体细胞胚胎放置在干滤纸上，然后将塑料培养皿用封口膜封口。4.根据权利要求2所述的一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：所述的至少两种“滤纸容器法”中一种，即“滤纸容器法2”将发育完全的沙地云杉的体细胞胚胎放置在底垫有两层干滤纸的塑料培养皿中，随后将塑料培养皿放置在另一玻璃培养皿内，在玻璃培养皿中放置适量无菌水，使沙地云杉的体细胞胚胎处于一个相对干燥的环境中，将沙地云杉的体细胞胚胎放置在塑料培养皿的干滤纸上，然后将玻璃培养皿用封口膜封口。5.根据权利要求2所述的一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：每种干化处理方法设置至少三次重复，每种干化方法的塑料培养皿内放20
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30个体细胞胚胎，一个培养皿为一次重复，随后将两种干化处理的体细胞胚胎分别放置在暗培养下培养，观察培养皿内体细胞胚胎的形态变化。6.根据权利要求3所述的一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：采用“滤纸容器法1”干化处理方式，干化处理0d、3d、6d、9d、12d、15d、18d、21d、24d、27d和30d后，分别进行萌发对比实验；每个处理设置三次重复，一个塑料培养皿内放置20
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30个发育完整的沙地云杉的体细胞胚胎作为一次重复，确定最佳干化时间。7.根据权利要求6所述的一种沙地云山体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：所述沙地云杉的体细胞胚胎的萌发培养基为1/2 ms 蔗糖30 g/l 琼脂6g/l，培养基ph 5.8，培养温度（23
±
1）℃，黑暗培养1周后转到光照培养条件下，三周后统计正常萌发的体细胞胚胎数量。8.根据权利要求6所述的一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，其特征在于：以沙地云杉的愈伤组织分化的体细胞胚胎为材料，采用“滤纸容器法1”干化处理方式，干化处理12 d后，根据干化处理后的颜色变化，将体细胞胚胎分为两种类型，分别为无颜色变化型以及绿色的子叶、胚轴和胚根型；分别将这两种类型的体细胞胚胎进行萌发比较，每个处理设置三次重复，每个塑料培养皿放置20
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30个发育完整的体细胞胚胎作为一个重复，进行体细胞胚胎的干化标记。

技术总结
本发明涉及一种沙地云杉体细胞胚胎萌发前的干化标记方法，包括如下步骤：（1）外植体的采集及处理，采集沙地云杉的成熟种子，对种子进行消毒灭菌。（2）外植体的接种，消毒灭菌后的种子剥离出胚接种至配制的培养基中培养，得到愈伤组织。（3）沙地云杉愈伤组织的分化，将步骤2所得到的愈伤组织接种到分化培养基中，诱导形成体细胞胚胎。（4）体细胞胚胎干化前的准备工作。提前准备好需要灭菌的培养皿，无菌水，滤纸。（5）沙地云杉体细胞胚胎干化，采用“滤纸容器法”干化方法。本发明的优点是：可以实现提高沙地云杉体细胞胚胎的萌发率和生根成苗率，为沙地云杉人工种子的制备与萌发提供了技术保障。障。


技术研发人员：娜苏勒玛 白玉娥 苗慧琴 樊雅婷 桑萨尔珠拉 石磊 赵玉蓉 张晓华 聂群 武慧峰 武泽峰
受保护的技术使用者：内蒙古蒙荣园林绿化工程有限责任公司
技术研发日：2021.08.19
技术公布日：2021/10/15