一种蜡样芽孢杆菌及其应用的制作方法

1.本发明涉及蜡样芽孢杆菌技术领域，特别是涉及一种蜡样芽孢杆菌及其应用。


背景技术：

2.溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，uc)是炎症性肠病(inflammatory bowel disease，ibd)的一个主要类型，是一种原因不明的慢性非特异性肠道炎症。近年来我囯uc的患病人数呈明显上升趋势。uc病变主要位于结肠粘膜和粘膜下层；临床表现为腹泻、黏液脓血便、腹痛、里急后重等，多呈反复发作的慢性病程。目前治疗uc的方法主要包括药物治疗、营养治疗、心理治疗及手术治疗，其中药物治疗是最主要的方法。在临床上用于治疗uc的药物主要有氨基水杨酸类药物、肾上腺糖皮质激素类和免疫抑制剂类等。然而，这些药物不良作用大，易引起患者头疼、恶心，造成机体消化系统、血液系统异常、易导致机体耐药抗药性。为此，研发一种能够解决上述问题的产品是非常必要的。
3.益生菌可通过与有害菌竞争位点进而调控肠道菌群，有利于宿主健康。芽孢杆菌是应用较多且有较好效果的益生菌菌株之一，其能够产生耐性强的孢子，可抑制多种致病细菌的生长繁殖。然而，并非所有芽孢杆菌菌种都适合制成微生态制剂，部分菌株可能会产生致腹泻的毒素从而对宿主造成毒害作用。因此，有必要研发一种更加科学、安全地芽孢杆菌微生态制剂应用于溃疡性结肠炎的预防与治疗。


技术实现要素：

4.本发明实施例第一方面提供了一种蜡样芽孢杆菌，本发明实施例第二方面提供上述蜡样芽孢杆菌的应用，以解决上述背景技术中的部分问题。
5.本发明的实施例第一方面提出了一种蜡样芽孢杆菌，所述蜡样芽孢杆菌的科学命名为：bacillus cereus hmpm18123，保藏日期：2021年7月30日，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保存地点为：广州市先烈中路100号大院59号5楼，保藏编码为：gdmcc 61838。
6.进一步地，所述蜡样芽孢杆菌在ph 5至ph 6的环境中生长旺盛，在ph 4以下的环境生长抑制，生长温度不高于60℃。
7.本发明的实施例第二方面提出的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎、降低肠炎肠组织病理性损伤、抑制炎症、改善肠道屏障功能、改善肠道菌群组成的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
8.本发明的实施例第二方面提出的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
9.本发明的实施例第二方面提出的蜡样芽孢杆菌在制备减轻溃疡性结肠炎中肠道组织病理学损伤的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
10.本发明的实施例第二方面提出的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎造成的肠道组织炎症功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
11.本发明的实施例第二方面提出的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎中肠道屏障功能的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
12.本发明的实施例第二方面提出的蜡样芽孢杆菌在制备改善肠道菌群组成的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
13.本发明的优点具体如下：本发明实施例的蜡样芽孢杆菌hmpm18123能够产生耐性强的孢子，可抑制多种致病细菌的生长繁殖，能显著改善溃疡性结肠炎导致的腹泻、便血、体重下降、结肠缩短等肠道症状；显著改善结肠炎导致的肠上皮黏液层破坏、肠道屏障功能下降、肠道炎症、肠道菌群紊乱以及发挥抗氧化作用。具有实际应用价值高、毒副作用小的优点，对治疗溃疡性结肠炎具有十分明显的作用。
附图说明
14.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
15.图1是本发明一实施例中样芽孢杆菌的菌落形态图。
16.图2是本发明一实施例中样芽孢杆菌的放大外貌形态图。
17.图3是本发明一实施例中样芽孢杆菌在不同酸碱度环境中的生长态势图。
18.图4是本发明一实施例中样芽孢杆菌在30、40、50、60℃温度中的生长态势图。
19.图5是本发明一实施例中样芽孢杆菌在70℃培养后转入37℃温度中的生长态势图。
20.图6是本发明一实施例中样芽孢杆菌在人工模拟胃液、模拟人工肠液中的存活率实验结果图。
21.图7是本发明一实施例中样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠体重变化的影响的实验结果图。
22.图8是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠疾病活动指数评分影响的实验结果图。
23.图9是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠长度影响的实验结果图。
24.图10是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织病理影响的实验结果图。
25.图11是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠上皮黏液层影响的实验结果图。
26.图12是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠道紧密连接蛋白表达影响实验时对照组小鼠结肠上皮细胞分布图。
27.图13是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠道紧密连接蛋白表达影响的实验结果图。
28.图14是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织促炎因子(tnf
‑
α)水平影响的实验结果图。
29.图15是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织促炎因子(il
‑
1β)水平影响的实验结果图。
30.图16是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织促炎因子(il
‑
6)水平影响的实验结果图。
31.图17是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织促炎因子(il
‑
10)水平影响的实验结果图。
32.图18是本发明一实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠道菌群调节作用的实验结果图。
33.图19是本发明一实施例中溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织中还原型谷胱甘肽(gsh)水平影响的实验结果图。
34.注：附图中a，b，c表示不同字母所代表的组别都存在显著性差异(p<0.05)；空白对照组(control)、结肠炎模型组(dss)、蜡样芽孢杆菌干预组(bacillus cereus hmpm18123)。
具体实施方式
35.下面结合附图和实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例的详细描述和附图用于示例性地说明本发明的原理，但不能用来限制本发明的范围，即本发明不限于所描述的实施例，在不脱离本发明的精神的前提下覆盖了零件、部件和连接方式的任何修改、替换和改进。
36.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
37.下面将参照附图1
‑
19并结合实施例来详细说明本技术。
38.本发明实施例第一方面的一种蜡样芽孢杆菌，所述蜡样芽孢杆菌的科学命名为：bacillus cereus hmpm18123，保藏日期：2021年7月30日，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保存地点为：广州市先烈中路100号大院59号5楼，保藏编码为：gdmcc 61838。
39.具体地，所述蜡样芽孢杆菌在ph 5至ph 6的环境中生长旺盛，在ph 4以下的环境生长抑制，生长温度不高于60℃。例如，蜡样芽孢杆菌在ph＝5、ph＝5.5、ph＝6的环境中生长旺盛，在ph＝4或ph＝3.5的环境生长抑制，生长温度为60℃、55℃、50℃等。
40.本发明实施例第二方面的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎、降低肠炎肠组织病理性损伤、抑制炎症、改善肠道屏障功能、改善肠道菌群组成的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
41.本发明实施例第二方面的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
42.本发明实施例第二方面的蜡样芽孢杆菌在制备减轻溃疡性结肠炎中肠道组织病理学损伤的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
43.本发明实施例第二方面的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎造成的肠道组织炎症功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
44.本发明实施例第二方面的蜡样芽孢杆菌在制备改善溃疡性结肠炎中肠道屏障功能的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
45.本发明实施例第二方面的蜡样芽孢杆菌在制备改善肠道菌群组成的功能性菌剂、食品和或药物中的应用。
46.下面以另几个的制备、应用和具体试验来说明本发明的上述实施例。
47.实施例1：本发明实施例的蜡样芽孢杆菌hmpm18123的培养和鉴定。蜡样芽孢杆菌hmpm18123，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心，保存地点为：广州市先烈中路100号大院59号5楼，保藏编号为：gdmcc 61838。
48.本发明实施例的蜡样芽孢杆菌hmpm18123菌株的培养方法：
49.有氧液体培养蜡样芽孢杆菌选用lb液体培养基。具体配方为10g胰蛋白胨、5g酵母提取物和10g nacl，双蒸水定容至1000ml，在121℃条件下灭菌20min。培养前将保藏菌株以1％的比例接入lb液体培养基，于37℃，120rpm的条件下活化12h后再以1％的接种量接入lb液体培养基中以37℃，120rpm进行培养。
50.有氧固体培养蜡样芽孢杆菌选用lb固体培养基。具体配方为10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10g nacl和17g琼脂，双蒸水定容至1000ml，在121℃条件下灭菌20min。培养前将保藏菌株以1％的比例接入lb液体培养基，于37℃，120rpm的条件下活化12h后稀释105倍涂布于lb固体培养基上中在37℃恒温培养箱中进行培养。
51.厌氧液体培养蜡样芽孢杆菌选用bhi液体培养基。具体配方为3.7g脑心浸出液、0.05g l
‑
半胱氨酸和5ul刃天青，双蒸水定容至100ml，培养瓶内冲入氮气让培养基颜色呈淡黄色，在121℃条件下灭菌20min。培养前将保藏菌株以1％的比例接入bhi液体培养基，于37℃，120rpm的条件下活化12h后再以1％的接种量接入bhi液体培养基在37℃厌氧箱中进行培养。
52.厌氧固体培养蜡样芽孢杆菌选用bhi固体培养基。具体配方为3.7g脑心浸出液、0.05g l
‑
半胱氨酸、5μl刃天青和1.7g琼脂，双蒸水定容至100ml，培养瓶内冲入氮气让培养基颜色呈淡黄色，在121℃条件下灭菌20min。培养前将保藏菌株以1％的比例接入bhi液体培养基，于37℃，120rpm的条件下活化12h后稀释105倍涂布于bhi固体培养基上中在37℃厌氧培养箱中进行培养。
53.本发明实施例的菌株的鉴定(16s rdna序列)：
54.ctcaggatgaacgctggcggcgtgcctaatacatgcaagtcgagcgaatggattaagagcttgctcttatgaagttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcccataagactgggataactccgggaaaccggggctaataccggataacattttgaaccgcatggttcgaaattgaaaggcggcttcggctgtcacttatggatggacccgcgtcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttagggaagaacaagtgctagttgaataagctggcaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggtggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactgggagacttgagtgcagaagaggaaagtggaattccatgtgtagcggtgaaatgcgtagagatatggaggaacaccagtggcgaaggcgactttctggtctgtaactgacactgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgaagttaacgcattaagcactccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgaa
aaccctagagatagggcttctccttcgggagcagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccatcattaagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggacggtacaaagagctgcaagaccgcgaggtggagctaatctcataaaaccgttctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagctggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtggggtaacctttttggagccagccgcctaaggtgggacagatgattggggtgaagtcgta
55.菌落形态描述：
56.如附图1本发明实施例中样芽孢杆菌的菌落形态图所示，在lb培养基培养16h后可以观察到分离菌株菌落较大，淡黄色、不透明，菌落近似圆形表面呈融蜡状，边缘呈扩展状。
57.生理生化鉴定结果：
58.如附图2本发明施例中样芽孢杆菌的放大外貌形态图所示，该菌芽孢呈杆状，无苏云金芽孢杆菌特有的伴晶芽孢结构。如附图3本发明实施例中样芽孢杆菌在不同酸碱度环境中的生长态势图所示，该菌在ph 5和ph 6的环境中生长旺盛，在ph 4以下的环境其生长被抑制。如附图4本发明实施例中样芽孢杆菌在30、40、50、60℃温度中的生长态势图所示，该菌在30和40℃时生长旺盛，在50和60℃条件下该菌生长速度缓慢，在70℃条件下不生长。如附图5本发明实施例中样芽孢杆菌在70℃培养后转入37℃温度中的生长态势图所示，在70℃条件下培养的菌液转接入37℃培养24h生长速度可以立即恢复继续生长。
59.实施例2：蜡样芽孢杆菌hmpm18123在体外模拟胃肠液的存活率情况
60.实验方法：模拟人工胃液(sgf)：通过将nacl(32.0g)和胃蛋白酶(2g)溶解在1l去离子水中制备，并用稀盐酸溶液将ph调节至2.0。
61.模拟人工肠液(sif)：通过将kh2po4(6.8g)溶解在250ml去离子水中，然后加入77ml 0.2mol/lnaoh溶液、200ml去离子水和胰蛋白酶(10g)。用naoh溶液将混合物的ph调节至6.8。
62.将保藏菌株37℃活化12h后，以1％的接种量接入sgf和sif中，37℃培养。分别于0h、1h、2h和3h将菌液取出，稀释不同比例，取100μl菌液涂布于lb固体平板上，10h后进行菌落计数。
63.实验结果：如附图6左侧的本发明实施例中样芽孢杆菌在人工模拟胃液中存活率实验结果图所示。蜡样芽胞杆菌hmpm18123在人工模拟胃液中培养2h内存活率在80％左右，3h后存活率可达50％。如附图6右侧的本发明实施例中样芽孢杆菌在模拟人工肠液中存活率实验结果图所示。在模拟人工肠液中，蜡样芽胞杆菌存活率hmpm18123在100％。
64.实施例3：蜡样芽孢杆菌对c57bl/6j小鼠无毒副作用
65.将蜡样芽孢杆菌菌体重悬于生理盐水中，制成浓度为1
×
109cfu/ml的菌悬液。取体重20
±
2g的健康雄性c57bl/6j小鼠10只，适应环境1周后，每日每只小鼠给予2
×
108cfu菌悬液灌胃一次，观察一周，记录死亡和体重情况。
66.结果如表1所示，喂食浓度2
×
108cfu的蜡样芽孢杆菌未对小鼠造成明显影响，体重无显著变化，无死亡现象。
67.表1灌胃1周蜡样芽孢杆菌后小鼠体重变化及死亡情况
[0068][0069]
注：—：小鼠无死亡。
[0070]
实施例4：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠体重变化的影响
[0071]
取体重20
±
2g的健康雄性c57bl/6j小鼠30只，适应环境1周，随机分为3组：空白对照组(control)、结肠炎模型组(dss)、蜡样芽孢杆菌干预组(b.cereus)。每组小鼠含10只小鼠，蜡样芽孢杆菌干预组小鼠灌胃菌悬液的剂量为2
×
108cfu，重悬于200μl生理盐水中，灌胃时间为21天，对照组与结肠炎模型组灌胃等量的生理盐水。第14天至21天，给予结肠炎模型组和蜡样芽孢杆菌干预组2.5％葡聚糖硫酸钠(dss)溶液自由饮用，用于实验性溃疡结肠炎小鼠模型造模，每天测量小鼠体重的变化。
[0072]
干预实验的第21天，收集小鼠新鲜粪便冻存于
‑
80℃，提取粪便中的dna，用于肠道菌群组成测序及分析。干预实验结束后，小鼠禁食不禁水12小时。小鼠麻醉后，采血并以颈椎脱臼法处死。收集小鼠结肠组织置于预冷的生理盐水中漂洗，拍照并测量结肠长度。一部分结肠组织放入多聚甲醛固定，其余结肠组织冻存，液氮中速冻并转移至
‑
80℃。
[0073]
结肠组织均浆制备方法如下：称取一定量结肠组织，按照组织重量与生理盐水比例(1:9)混合，以4000r研磨10min后，5000g在4℃离心15min后，取上清液冻存备用。
[0074]
实验结果如附图7本发明实施例中样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠体重变化的影响的实验结果图所示，在dss处理的7天内，与对照组小鼠相比，模型组小鼠体重逐渐降低，而蜡样芽孢杆菌干预处理可显著改善小鼠体重下降的程度。
[0075]
实施例5：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠疾病活动指数(disease activity index，dai)评分的影响
[0076]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。在蜡样芽孢杆菌干预小鼠过程中，每天记录小鼠的粪便形状、便血以及体重变化情况。dai评分按以下标准进行，体重变化评分：体重未变化，记为0分；体重下降1～5％，记为1分；下降5～10％，记为2分；下降10～20％，记为3分；下降大于20％，记为4分。大便形状评分：正常，0分；粪便较软，1分；湿软，2分；半稀便，3分；稀便，4分。便潜血评分：无血便，0分；稍有血便，2分；明显血便，4分。干预实验结束后，计算各组小鼠dai评分。
[0077]
实验结果如附图8本发明实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠疾病活动指数评分影响的实验结果图所示，在dss处理的7天内，与对照组小鼠相比，模型组小鼠dai评分增加，说明模型组小鼠的腹泻及便血情况加重，而蜡样芽孢杆菌可显著改善小鼠腹泻及便血的程度。
[0078]
实施例6：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠长度的影响
[0079]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同上述实施例2。小鼠处死前，禁食不禁水12h，完整取结肠组织，生理盐水清洗后，拍照并测量其长度。
[0080]
实验结果如附图9本发明实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠长度影响的实验结果图所示，与对照组小鼠相比，模型组小鼠结肠长度显著缩短，然而蜡样芽孢杆菌干预可显著改善结肠炎模型小鼠结肠缩短的情况。
[0081]
实施例7：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织病理的影响
[0082]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。小鼠处死前，禁食不禁水12h，颈椎脱臼处死，取部分结肠组织并制作石蜡切片，经苏木精—伊红(he)染色后，光镜下观察组织形态并拍照，进行病理评价。
[0083]
实验结果如附图10本发明实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织病理影响的实验结果图所示，对照组小鼠结肠组织完整，黏膜无明显缺损，腺体无萎缩，黏膜固有层炎性细胞浸润少；而模型组黏膜下层炎性细胞浸润多，黏膜固有层的腺体出现萎缩，大量的炎性细胞，隐窝结构被破坏。蜡样芽孢杆菌干预后对结肠组织有明显改善作用，表现为黏膜固有层的腺体排列较为整齐，炎性细胞数量显著减少。
[0084]
实施例8：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠上皮黏液层的影响
[0085]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。小鼠处死前，禁食不禁水12h，颈椎脱臼处死，取部分结肠组织并制作石蜡切片，经阿利新蓝染色后，光镜下观察组织形态并拍照。
[0086]
实验结果如附图11本发明实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠上皮黏液层影响的实验结果图所示，对照组小鼠结肠含有大量杯状细胞且覆盖粘液，黏液层分布完整均匀。模型组小鼠结肠大量杯状细胞被破坏，粘液大量减少，黏液层分布缺失导致黏液层受损。蜡样芽孢杆菌干预后保持了黏液层的完整性，与模型组相比，其杯状细胞排列整齐且覆盖较多粘液，粘液均匀分布于整个肠黏膜上皮。
[0087]
实施例9：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠道紧密连接蛋白(zo
‑
1、occludin)表达的影响
[0088]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。小鼠处死前，禁食不禁水12h，颈椎脱臼处死，取部分结肠组织并制作石蜡切片，经免疫组化染色后，光镜下观察组织形态并拍照，对小鼠结肠中紧密连接蛋白zo
‑
1及occludin进行半定量。
[0089]
实验结果如附图12和附图13所示，对照组小鼠的结肠上皮细胞间整齐且均匀分布zo
‑
1(附图12)及occludin蛋白(附图13)，阳性细胞标记数量较多，颜色较深。与对照组相比，模型组中阳性细胞标记数量显著减少，阳性染色显著降低，阳性细胞百分率显著降低，模型组小鼠肠上皮细胞上的zo
‑
1及occludin蛋白数量显著减少，肠道屏障受损。蜡样芽孢杆菌干预显著提高肠上皮阳性细胞的数量，显著提高zo
‑
1及occludin蛋白阳性细胞百分率。
[0090]
实施例10：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织促炎因子(tnf
‑
α、il
‑
1β、il
‑
6)水平的影响
[0091]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。小鼠处死前，禁食不禁水12h，颈椎脱臼处死，取结肠组织研磨，离心，取上清液。按照elisa试剂盒的说明书测定结肠组织中tnf
‑
α、il
‑
1β、il
‑
6的含量。
[0092]
实验结果如附图14
‑
附图16所示，与对照组小鼠相比，溃疡性结肠炎模型组小鼠结肠组织上清中tnf
‑
α(附图14)、il
‑
1β(附图15)、il
‑
6(附图16)水平显著升高。与模型组相
比，蜡样芽孢杆菌干预组小鼠结肠组织上清中tnf
‑
α、il
‑
1β、il
‑
6水平显著降低。
[0093]
实施例11：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织抗炎因子(il
‑
10)的影响
[0094]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。小鼠处死前，禁食不禁水12h，颈椎脱臼处死，取结肠组织研磨，离心，取上清液。按照elisa试剂盒的说明书测定结肠组织中il
‑
10的含量。
[0095]
实验结果如附图17本发明实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织促炎因子(il
‑
10)水平影响的实验结果图所示，与对照组小鼠相比，溃疡性结肠炎模型组小鼠结肠组织上清中il
‑
10水平显著降低。与模型组相比，蜡样芽孢杆菌干预组小鼠结肠组织上清中il
‑
10水平显著升高。
[0096]
实施例12：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠道菌群的调节作用
[0097]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。干预实验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于
‑
80℃，提取粪便中的dna，并利用16srrna对肠道菌群结构进行分析。
[0098]
实验结果如附图18本发明实施例中蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠肠道菌群调节作用的实验结果图所示，与对照组相比，结肠炎模型组小鼠肠道中akkermansia属的丰度显著降低。与模型组相比，模型组小鼠经蜡样芽孢杆菌干预后，肠道中akkermansia属丰度显著提高。已有研究表明，akkermansia属丰度与肥胖、糖尿病及肠炎等疾病呈负相关，因此，本发明具有降低肠道炎症等疾病发生的作用。
[0099]
实施例13：蜡样芽孢杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织中还原型谷胱甘肽(gsh)水平的影响。
[0100]
c57bl/6j小鼠分组、干预、造模以及处理方法同实施例2。按照还原型谷胱甘肽(gsh)试剂盒的说明书测定结肠组织中gsh的含量。
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实验结果如附图19本发明实施例中溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织中还原型谷胱甘肽(gsh)水平影响的实验结果图所示，与对照组相比，模型组小鼠结肠组织中还原型谷胱甘肽(gsh)的水平显著低于对照组，具有显著差异。与模型组相比，蜡样芽孢杆菌显著提高了结肠炎模型小鼠结肠组织中还原型谷胱甘肽(gsh)的水平。
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综上所述，经过实施例1至实施例13的验证，可以发现本发明实施例的蜡样芽孢杆菌hmpm18123能够产生耐性强的孢子，可抑制多种致病细菌的生长繁殖，能显著改善溃疡性结肠炎导致的腹泻、便血、体重下降、结肠缩短等肠道症状；显著改善结肠炎导致的肠上皮黏液层破坏、肠道屏障功能下降、肠道炎症、肠道菌群紊乱以及发挥抗氧化作用。具有实际应用价值高、毒副作用小的优点，对治疗溃疡性结肠炎具有十分明显的作用。
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需要明确的是，本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述，各个实施例之间相同或相似的部分互相参见即可，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处。对于方法的实施例而言，相关之处可参见设备实施例的部分说明。本发明并不局限于上文所描述并在图中示出的特定步骤和结构。并且，为了简明起见，这里省略对已知方法技术的详细描述。
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以上所述仅为本技术的实施例而已，并不限制于本技术。在不脱离本发明的范围的情况下对于本领域技术人员来说，本技术可以有各种更改和变化。凡在本技术的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术的权利要求范围内。