一种稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法与流程

技术特征：
1.一种稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记硝西泮内标试剂的化学结构如式(labeled
‑
nitrazepam)所示：其中r为h或d，*为
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c或
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c，其特征在于，其制备步骤总路线为：其中x和y分别为cl、br、i中的一种，制备步骤如下：(1)在催化剂、配体、添加剂、有机溶剂存在条件下，加入稳定同位素标记苯硼酸，然后加入2
‑
氨基
‑5‑
硝基苯甲腈，在30℃～120℃条件下，反应12～48小时；tlc跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，过滤，滤液用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记2
‑
氨基
‑5‑
硝基二苯甲酮；该步骤反应如下所示：
其中稳定同位素标记苯硼酸的化学结构如式(i)所示，稳定同位素标记2
‑
氨基
‑5‑
硝基二苯甲酮的化学结构如式(ii)所示，其中r为h或d，*为
12
c或
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c；(2)将稳定同位素标记2
‑
氨基
‑5‑
硝基二苯甲酮溶于有机溶剂中，加入卤乙酰卤，在20℃～80℃条件下，反应1～10小时；tlc跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，过滤，滤液用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记2
‑
氯乙酰胺基
‑5‑
硝基二苯甲酮；该步骤反应如下所示：其中稳定同位素标记2
‑
氯乙酰胺基
‑5‑
硝基二苯甲酮的化学结构如式(ⅲ)所示，其中r为h或d，*为
12
c或
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c；x和y分别为cl、br、i中的一种；(3)将稳定同位素标记2
‑
氯乙酰胺基
‑5‑
硝基二苯甲酮溶于有机溶剂中，加入乌洛托品和铵盐，在30℃～120℃条件下反应1
‑
8小时；tlc跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液旋干，加入水，用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥；减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记硝西泮。该步骤反应如下所示：其中稳定同位素标记硝西泮的化学结构如式(ⅳ)所示，其中r为h或d，*为
12
c或
13
c。2.根据权利要求1所述的稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，其特征在于所
述步骤(1)中，催化剂为醋酸钯、氯化钯、双(三苯基膦)二氯化钯、四(三苯基膦)钯、双(二苯基膦苯基醚)二氯化钯、双(二苯基膦二茂铁)二氯化钯、乙酰丙酮钯、三氟乙酸钯、双(二苯基磷)乙烷二氯化钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、三(二亚苄基丙酮)二钯氯仿加合物中的一种或几种；配体为2,2
’‑
联吡啶、4,4
’‑
二甲基
‑
2,2
’‑
联吡啶、5,5
’‑
二甲基
‑
2,2
’‑
联吡啶、4,4
’‑
二甲氧基
‑
2,2
’‑
联吡啶、1,10
‑
菲罗啉、4,7
‑
二甲基
‑
1,10
‑
菲罗啉、4,7
‑
二苯基
‑
1,10
‑
菲罗啉中的一种或几种；添加剂为盐酸、硫酸、冰醋酸、甲酸、三氟乙酸、二氯乙酸、甲烷磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸中的一种或几种；溶剂为四氢呋喃、二氧六环、甲苯、二甲苯、2
‑
甲基四氢呋喃、n,n
‑
二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、苯、氯苯中的一种或几种；稳定同位素标记的苯硼酸为氘标记的苯硼酸、
13
c标记的苯硼酸中的一种；反应温度为30℃～120℃；反应时间为12～48小时。3.根据权利要求1所述的稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中，卤乙酰卤为氯乙酰氯、氯乙酰溴、溴乙酰氯、溴乙酰溴、碘乙酰氯中的一种或几种；有机溶剂为四氢呋喃、2
‑
甲基四氢呋喃、二氧六环、苯、甲苯、二甲苯、乙腈、n,n
‑
二甲基甲酰胺中的一种或几种；20℃～80℃；反应时间为1～10小时。4.根据权利要求1所述的稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中，有机溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或几种；所用铵盐为氯化铵、甲酸胺、乙酸铵、硫酸铵中的一种或几种；反应温度为30℃～120℃；反应时间为1～8小时。

技术总结
本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。本发明以稳定同位素标记苯硼酸为原料，经催化加成、酰化、环合，最后分离纯化得到稳定同位素标记硝西泮。本发明工艺具有合成所需原料简单易得，操作简单，反应条件温和，最终产品化学纯度高、同位素丰度不稀释，并且不使用有毒及致癌的化学试剂，有效降低了人员健康及环境污染风险。本制备方法得到的稳定同位素标记硝西泮化学纯度可达98％以上，同位素丰度可达98％以上，能满足食品安全检测用液相色谱串联质谱法所需稳定同位素标记内标试剂的技术要求。位素标记内标试剂的技术要求。位素标记内标试剂的技术要求。


技术研发人员：李珂珂 王玮 潘黎东
受保护的技术使用者：谱同生物医药科技（常州）有限公司
技术研发日：2021.08.05
技术公布日：2021/10/15