利用人肝癌细胞HepG2/C3A作为生物反应器生产重组人血清白蛋白的制作方法

技术特征：
1.一种载体，其包含表达框，所述表达框自5’端到3’端依次包含：激活型akt1基因、ires以及mek1变体基因；相比akt1，所述激活型akt1为含src蛋白的肉豆蔻基化细胞膜定位信号的akt1；相比mek1，所述激活型mek1是指mek1变体的ser218和ser222突变为模拟磷酸化的谷氨酸。2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述src蛋白的肉豆蔻基化细胞膜定位信号的肽段氨基酸序列如seq id no: 2所示。3.如权利要求2所述的载体，其特征在于，表达所述src蛋白的肉豆蔻基化细胞膜定位信号的基因序列如seq id no: 1所示。4.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述含src蛋白的肉豆蔻基化细胞膜定位信号的akt1氨基酸序列如seq id no: 4所示。5.如权利要求4所述的载体，其特征在于，表达所述含src蛋白的肉豆蔻基化细胞膜定位信号的akt1基因序列如seq id no: 3所示。6.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述ires序列如seq id no: 5所示。7.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述mek1变体的氨基酸序列如seq id no: 7所示。8.如权利要求7所述的载体，其特征在于，所述mek1变体基因序列如seq id no: 6所示。9.如权利要求1~8任一项所述的载体，其特征在于，所述载体的骨架为质粒pgk
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h2bmcherry。10.一种包含如权利要求1~9任一项所述的载体的转化体，所述转化体为人源细胞，优选的为人肝癌细胞hepg2/c3a。11.如权利要求10所述的转化体，其特征在于，所述转化体为人肝癌细胞hepg2/c3a。12.一种包含如权利要求1~9任一项所述的载体的慢病毒载体系统，其还包含包装辅助质粒pax2以及包装辅助质粒vsv
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g。13.一种利用如权利要求12所述的慢病毒载体系统制备得到的病毒。14.利用如权利要求13所述的病毒感染宿主细胞后得到的表达细胞，所述宿主细胞优选人肝癌细胞hepg2/c3a。

技术总结
本发明在人肝癌细胞系HepG2/C3A中同时稳定表达激活型的AKT1和激活型的MEK1，首次获得可在无血清添加和无生长因子添加的完全化学成分限定培养基中生长的人肝癌细胞群C3A810。利用该细胞群作为反应器成功重组表达人血清白蛋白（human serum albumin，HSA），表明该细胞可作为包括人血清白蛋白在内的血浆蛋白药物、人血清白蛋白融合的细胞长效细胞因子等多种人用重组蛋白药物的反应器。种人用重组蛋白药物的反应器。种人用重组蛋白药物的反应器。


技术研发人员：朱颂成 赵晓梅 倪华
受保护的技术使用者：上海安民生物技术有限公司
技术研发日：2021.09.07
技术公布日：2021/10/11