马来酸二乙酯在植物病害防治中作为杀菌增效剂的应用的制作方法

1.本发明涉及植物病害防治领域，具体涉及马来酸二乙酯在水稻纹枯病防治中作为杀菌增效剂的应用。


背景技术：

2.立枯丝核菌(rhizoctonia solani)是常见的土传病原真菌，腐生性强，寄主范围广，至少能够侵染200多种植物，可侵染导致水稻纹枯病、小麦纹枯病、棉花立枯病、马铃薯黑痣病、花生立枯病、白菜褐腐病等，是一种在全世界范围内普遍发生且危害严重的病害。给防治带来了严峻的挑战和困难。对于r.solani导致病害的防治目前最有效的仍然是化学防治，然而化学杀菌剂的长期使用很容易导致病原菌抗药性的发生，由此引发的环境污染和农药残留等问题也日益突出。实验室前期研究发现，由解偶联剂双苯菌胺诱导产生的r.solani抗性突变体不仅对同一作用机制的杀菌剂氟啶胺存在抗性，同时对不同作用机制的杀菌剂如甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂嘧菌酯、细胞色素bc1 qi位质体醌还原酶抑制剂氰霜唑、β
‑
微管蛋白抑制剂多菌灵、组氨酸激酶抑制剂咯菌腈、三唑类杀菌剂苯醚甲环唑以及多作用位点杀菌剂百菌清均存在敏感性显著降低的现象，即产生了多药抗性(multidrug resistance，mdr)。多药抗性的出现导致对该病原菌的防治变得更加困难，药剂轮换施用和混配施用等常规的治理方法均难以实现对该病害的有效控制。因此，r.solani的多药抗性治理问题亟需寻找新的解决策略。
3.通常情况下，一些农药研发机构通过不断设计开发新型作用机制的杀菌剂来替代现有药剂，试图解决病原菌抗性问题。但是，新药开发存在周期长、费用高、新靶标寻找困难、开发难度大等问题。针对现有杀菌剂进行增效剂开发，特别是提高杀菌剂对抗性群体的活性，将成为提升病原菌对药剂敏感性，减少农药施用量，解决r.solani多药抗性问题的有效途径。目前，有关这方面的报道较少，这类物质的开发和应用将为有效降低r.solani多药抗性群体的危害提供重要的科学参考和借鉴。


技术实现要素：

4.基于上述缺陷，本发明的第一目的，是提供马来酸二乙酯在植物病害防治中作为杀菌剂中的杀菌增效剂的应用。
5.所述的植物病害致病菌为对氧化磷酸化解偶联剂、线粒体呼吸抑制剂、信号传导抑制剂、β
‑
微管蛋白抑制剂、麦角甾醇生物合成抑制剂和多作用位点抑制剂中的两种或多种产生抗性的丝核菌；
6.和/或，所述的植物病害的致病菌为对取代苯胺类杀菌剂、酰胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、咪唑类杀菌剂、吡咯苯类杀菌剂、苯并咪唑类杀菌剂、三唑类杀菌剂和取代苯类杀菌剂中的两种或多种产生抗性的丝核菌。
7.优选地，所述的植物病害的致病菌为对氟啶胺(或，双苯菌胺)、嘧菌酯、氰霜唑、咯菌腈、多菌灵、苯醚甲环唑和百菌清中的两种或多种产生抗性的丝核菌。
8.更具体地，本发明提供了马来酸二乙酯在水稻纹枯病防治中作为杀菌增效剂的应用。
9.马来酸二乙酯对于多种不同作用机制的杀菌剂都具有显著的增效作用。马来酸二乙酯，又名顺丁烯二酸二乙酯，分子式c8h
40
o4，英文名diethyl maleate，cas号141
‑
05
‑
9。
10.本发明将马来酸二乙酯与杀菌剂混合后，意外发现其对r.solani多药抗性菌株有很好的增效作用，抑制率大大提高，并能够显著降低杀菌剂的使用剂量。
11.本发明一并提出如下改进：
12.所述杀菌剂为取代苯胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、三唑类杀菌剂以及取代苯类杀菌剂。
13.优选地，所述取代苯胺类杀菌剂为双苯菌胺和氟啶胺；
14.或，所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯；
15.或，所述三唑类杀菌剂为苯醚甲环唑；
16.或，所述取代苯类杀菌剂为百菌清。
17.本发明所提出的应用方法中，所述的水稻纹枯病致病菌r.solani为对取代苯胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、三唑类杀菌剂和取代苯类杀菌剂中的两种或多种产生抗性的菌株；
18.优选地，所述的致病菌r.solani为对双苯菌胺、氟啶胺、嘧菌酯、苯醚甲环唑以及百菌清中的两种或多种产生抗性的菌株；和/或，所述的致病菌r.solani为对取代苯胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、三唑类杀菌剂和取代苯类杀菌剂中的两种或多种产生抗性的菌株。本发明所提供的应用，针对上述抗性菌株具有卓越的抑菌效果。
19.本发明的第二个目的，是提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，包括(由以下组分组成)马来酸二乙酯和杀菌剂；
20.优选地，所述杀菌剂为取代苯胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、三唑类杀菌剂或取代苯类杀菌剂。本发明意外地发现，马来酸二乙酯能显著提升取代苯胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、三唑类杀菌剂和取代苯类杀菌剂的抑菌效果。
21.在所述组合物中，优选地，所述取代苯胺类杀菌剂为双苯菌胺或氟啶胺。
22.进一步地，所述马来酸二乙酯和所述取代苯胺类杀菌剂双苯菌胺的重量比为(2
‑
3000)：1；在此范围内，马来酸二乙酯的增效系数最高可达100以上。优选所述重量比(2
‑
1000)：1，(20
‑
1000)：1或(20
‑
80)：1。
23.进一步地，所述马来酸二乙酯和所述取代苯胺类杀菌剂氟啶胺的重量比为(2
‑
2000)：1；在此范围内，马来酸二乙酯的增效系数最高可达120以上。优选所述重量比为(2
‑
600)：1，(20
‑
600)：1或(20
‑
80)：1。
24.在所述组合物中，优选地，所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯。
25.进一步地，所述马来酸二乙酯与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的重量比为(2
‑
4000)：1；在此范围内，马来酸二乙酯的增效系数可达40以上。优选所述重量比为(2
‑
200)：1，(10
‑
200)：1或(20
‑
200)：1。
26.在所述组合物中，优选地，所述三唑类杀菌剂为苯醚甲环唑。
27.进一步地，所述马来酸二乙酯与三唑类杀菌剂的重量比为(2
‑
3000)：1；在此范围内，马来酸二乙酯的增效系数可达38以上。更优选所述重量比为(20
‑
300)：1，(2
‑
200)：1或
(20
‑
200)：1。
28.在所述组合物中，优选地，所述取代苯类杀菌剂为百菌清。
29.进一步地，所述马来酸二乙酯与取代苯类杀菌剂的重量比为(2
‑
200)：1；在此范围内，马来酸二乙酯的增效系数可达47以上。更优选所述重量比为(10
‑
200)：1，(10
‑
40)：1或(40
‑
200)：1。
30.本发明意外地发现了马来酸二乙酯对于取代苯胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、三唑类杀菌剂和取代苯类杀菌剂具有增效作用，与杀菌剂混合使用能提高杀菌剂的毒力，恢复多药抗性菌株对药剂的敏感性，可作为杀菌剂的增效剂使用，用于r.solani多药抗性治理。
31.本发明的优点在于：
32.1.马来酸二乙酯对杀菌剂具有增效作用，与杀菌剂混合使用可以提高杀菌剂的毒力，恢复抗药性菌株对杀菌剂的敏感性，增强杀菌剂对r.solani多药抗性的防治效果，并减少杀菌剂的用量，为现有杀菌剂新制剂的开发应用提供新的方法。
33.2.马来酸二乙酯是高分子化合物单体，是农药、医药、香料、水质稳定剂的中间体，对环境友好。本发明提供了该类化合物的新用途，可在农业领域用于病害防治，并为r.solani多药抗性治理提供新的途径。
具体实施方式
34.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
35.以下各实施例中，所涉及“质量份”按照本领域理解，为重量单位，可为“g”、“kg”、“mg”、“μg”等。
36.以下各实施例、试验例中涉及试剂披露如下：
37.双苯菌胺(98％，沈阳化工研究院有限公司)，氟啶胺(98％，江苏瑞邦农化股份有限公司)，嘧菌酯(96.5％，江苏辉丰农化股份有限公司)，苯醚甲环唑(96％，江苏新农化工有限公司)，百菌清(98.5％，山东潍坊润丰化工股份有限公司)，马来酸二乙酯(96％，上海麦克林生化科技有限公司)。
38.菌株来源如下：
39.立枯丝核菌敏感菌株x19从田间水稻发病植株采集分离、纯化鉴定，保存于中国农业大学种子病理杀菌剂药理学研究室；多药抗性菌株x19
‑
1和x19
‑
7均由敏感菌株x19经双苯菌胺诱导筛选获得，可由中国农业大学种子病理杀菌剂药理学研究室获得(cheng，x.k.，man，x.j.，wang，z.t.,liang，l.,zhang，f.，wang，z.w.，et al.(2020).fungicide syp
‑
14288inducing multi
‑
drug resistance in rhizoctonia solani.plant dis.doi:10.1094/pdis
‑
01
‑
20
‑
0048
‑
re)。上述两株菌株经检验，双苯菌胺对菌株x19
‑
1和x19
‑
7的的ec
50
值分别为0.05μg/ml和0.06μg/ml，抗性倍数分别为11倍和15倍；氟啶胺对菌株x19
‑
1和x19
‑
7的ec
50
值分别为0.21μg/ml和0.18μg/ml；嘧菌酯对菌株x19
‑
1和x19
‑
7的ec
50
值分别为0.10μg/ml和0.05μg/ml；苯醚甲环唑对菌株x19
‑
1和x19
‑
7的ec
50
值分别为0.41μg/ml和0.18μg/ml；百菌清对菌株x19
‑
1和x19
‑
7的ec
50
值分别为0.84μg/ml和0.58μg/ml。与敏感菌株x19相比，两株多抗菌株对这几类不同作用机制的杀菌剂敏感性显著降低。
40.实施例1
41.本实施例提供一种用于立枯丝核菌引起植物病害的防治组合物，由质量份数3000份马来酸二乙酯和1份双苯菌胺组成。
42.实施例2
43.本实施例提供一种用于立枯丝核菌引起植物病害的防治组合物，由质量份数1000份马来酸二乙酯和1份双苯菌胺组成。
44.实施例3
45.本实施例提供一种用于立枯丝核菌引起植物病害的防治组合物，由质量份数80份马来酸二乙酯和1份双苯菌胺组成。
46.实施例4
47.本实施例提供一种用于立枯丝核菌引起植物病害的防治组合物，由质量份数20份马来酸二乙酯和1份双苯菌胺组成。
48.实施例5
49.本实施例提供一种用于立枯丝核菌引起植物病害的防治组合物，由质量份数2份马来酸二乙酯和1份双苯菌胺组成。
50.应用例1
51.本应用例提供马来酸二乙酯在水稻纹枯病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与取代苯胺类杀菌剂以组合物的形式应用于纹枯病害的防治。
52.试验对象：实施例1
‑
5所提供的杀菌组合物，以及取代苯胺类杀菌剂(双苯菌胺)单剂和马来酸二乙酯单剂。
53.试验方法：
54.ec
50
的测定：双苯菌胺和马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：80、1：1000和1：3000的比例进行复配，并进行系列浓度稀释，试验使用的双苯菌胺终浓度范围为0.00025
‑
1μg/ml，马来酸二乙酯的终浓度范围为0.01
‑
40μg/ml。采用菌丝生长速率法测定杀菌剂对菌落直径扩展的抑制率，分别设置空白对照、双苯菌胺处理、马来酸二乙酯处理、双苯菌胺与马来酸二乙酯复配处理，每种处理3次重复，于25℃培养箱中黑暗培养，5d后测量菌落直径，计算各处理对菌株的抑制率，并计算各比例复配药液及单剂药液的ec
50
值。
55.抑制率按照如下公式计算：
[0056][0057]
增效性测定：测定双苯菌胺单剂和马来酸二乙酯单剂复配后对r.solani多抗菌株x19
‑
1和19
‑
7的ec
50
值，按照wadley方法评价复配后的相互作用程度。所用公式如下：
[0058][0059]
[0060]
其中，ec
50
(th)为杀菌剂和增效剂复配的理论值，ec
50
(ob)为杀菌剂和增效剂复配的实际观测值，增效系数sr为杀菌剂和增效剂的相互作用程度，a和b分别表示杀菌剂和增效剂在二者复配中的比例。若sr≥1.5，表明二者具有增效作用，若sr＜0.5，表明二者表现拮抗作用，若sr在0.5
‑
1.5之间，则表明二者具有加和作用。
[0061]
试验结果：
[0062]
双苯菌胺与马来酸二乙酯增效作用测定结果如表1和表2所示。结果表明马来酸二乙酯能够显著提高双苯菌胺对r.solani多抗菌株x19
‑
1和x19
‑
7的毒力。对于多抗菌株x19
‑
1，当双苯菌胺与马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：80和1：1000的比例复配后，sr分别为1.52、9.17、115.96和1.65，均表现为较高的增效性。其中，当双苯菌胺与马来酸二乙酯以1：80的比例复配时，表现为最佳增效作用。对于多抗菌株x19
‑
7，当双苯菌胺与马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：80和1：3000的比例复配后，sr分别为1.63、2.51、68.16和1.56，同样表现为较高的增效性。其中，当双苯菌胺与马来酸二乙酯以1：80的比例复配时，增效作用最佳。
[0063]
表1 马来酸二乙酯对双苯菌胺抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
1的增效作用
[0064][0065]
注：
“‑”
表示不适合。
[0066]
表2 马来酸二乙酯对双苯菌胺抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
7的增效作用
[0067][0068]
[0069]
注：
“‑”
表示不适合。
[0070]
实施例6
[0071]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数2000份马来酸二乙酯和1份氟啶胺组成。
[0072]
实施例7
[0073]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数600份马来酸二乙酯和1份氟啶胺组成。
[0074]
实施例8
[0075]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数80份马来酸二乙酯和1份氟啶胺组成。
[0076]
实施例9
[0077]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数20份马来酸二乙酯和1份氟啶胺组成。
[0078]
实施例10
[0079]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数2份马来酸二乙酯和1份氟啶胺组成。
[0080]
应用例2
[0081]
本应用例提供马来酸二乙酯在水稻纹枯病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与取代苯胺类杀菌剂以组合物的形式应用于纹枯病害的防治。
[0082]
试验对象：氧化磷酸化解偶联(氟啶胺)单剂、实施例6
‑
10所提供的组合物和马来酸二乙酯单剂。
[0083]
试验方法：
[0084]
ec
50
的测定：氟啶胺和马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：80、1：600、1：800和1：2000的比例进行复配，并进行系列浓度稀释，试验使用的氟啶胺终浓度范围为0.000625
‑
1.25μg/ml，马来酸二乙酯的终浓度范围为0.008
‑
40μg/ml。按照应用例1所记载的方法进行抑制率测定，并计算各比例复配药液及单剂药液的ec
50
值。
[0085]
增效性测定：按照应用例1所记载的方法分别测定氟啶胺单剂和马来酸二乙酯单剂复配后对r.solani多抗菌株x19
‑
1和19
‑
7的ec
50
值，按照wadley方法评价复配后的相互作用程度。
[0086]
试验结果：
[0087]
氟啶胺与马来酸二乙酯增效作用测定结果如表3和表4所示。马来酸二乙酯能够显著提高氟啶胺对r.solani多抗菌株x19
‑
1和x19
‑
7的毒力。对多抗菌株x19
‑
1，当氟啶胺与马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：80、1：600和1：2000的比例复配后，sr分别为1.55、8.18、125.84、5.70、和1.53，均表现为较高的增效性。并且氟啶胺与马来酸二乙酯以1：80比例复配时的增效作用优于其他复配比例。对多抗菌株x19
‑
7，当氟啶胺与马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：80和1：600的比例复配后，sr分别为1.52、8.28、40.50和1.57，均表现出一定的增效性。并且当氟啶胺与马来酸二乙酯以1：80比例复配时增效作用最大。
[0088]
表3 马来酸二乙酯对氟啶胺抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
1的增效作用
[0089][0090][0091]
注：
“‑”
表示不适合。
[0092]
表4 马来酸二乙酯对氟啶胺抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
7的增效作用
[0093][0094]
注：
“‑”
表示不适合。
[0095]
实施例11
[0096]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数4000份马来酸二乙酯和1份嘧菌酯组成。
[0097]
实施例12
[0098]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数200份马来酸二乙酯和1份嘧菌酯组成。
[0099]
实施例13
[0100]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数20份马来酸二乙酯和1份嘧菌酯组成。
[0101]
实施例14
[0102]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数10份马来酸二乙酯和1份嘧菌酯组成。
[0103]
实施例15
[0104]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数2份马来酸二乙酯和1份嘧菌酯组成。
[0105]
应用例3
[0106]
本应用例提供马来酸二乙酯在水稻纹枯病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂以组合物的形式应用于纹枯病害的防治。
[0107]
试验对象：甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂(嘧菌酯)单剂、实施例11
‑
15所提供的组合物和马来酸二乙酯单剂。
[0108]
试验方法：
[0109]
ec
50
的测定：嘧菌酯和马来酸二乙酯分别以1：2、1：10、1：20、1：200和1：4000的比例进行复配，并进行系列浓度稀释，试验使用的嘧菌酯终浓度范围为0.00025
‑
1μg/ml，马来酸二乙酯的终浓度范围为0.001
‑
40μg/ml。同时添加终浓度为100μg/ml的水杨羟肟酸。按照应用例1所记载的方法进行抑制率测定，并计算各比例复配药液及单剂药液的ec
50
值。
[0110]
增效性测定：按照应用例1所记载的方法分别测定嘧菌酯单剂和马来酸二乙酯单剂复配后对r.solani多抗菌株x19
‑
1和19
‑
7的ec
50
值，按照wadley方法评价复配后的相互作用程度。
[0111]
试验结果：
[0112]
嘧菌酯与马来酸二乙酯增效作用测定结果如表5和表6所示。马来酸二乙酯能够显著提高嘧菌酯对r.solani多抗菌株x19
‑
1和x19
‑
7的毒力。对多抗菌株x19
‑
1，当嘧菌酯与马来酸二乙酯分别以1：2、1：10、1：20、1：200和1：4000复配后，sr分别为1.57、1.85、48.52、2.99和1.52，均表现为较高的增效性。其中，嘧菌酯与马来酸二乙酯以1：20的比例复配时，增效作用最大。对多抗菌株x19
‑
7，当嘧菌酯与马来酸二乙酯分别以1：2、1：10、1：20、1：200和1：4000复配后，sr分别为1.52、1.80、11.23、1.69和1.54，同样表现出较高的增效性。其中，嘧菌酯与马来酸二乙酯以1：20的比例复配时，表现为最佳增效作用。
[0113]
表5 马来酸二乙酯对嘧菌酯抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
1的增效作用
[0114][0115]
注：
“‑”
表示不适合。
[0116]
表6 马来酸二乙酯对嘧菌酯抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
7的增效作用
[0117][0118]
注：
“‑”
表示不适合。
[0119]
实施例16
[0120]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数3000份马来酸二乙酯和1份苯醚甲环唑组成。
[0121]
实施例17
[0122]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数200份马来酸二乙酯和1份苯醚甲环唑组成。
[0123]
实施例18
[0124]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数20份马来酸二乙酯和1份苯醚甲环唑组成。
[0125]
实施例19
[0126]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数2份马来酸二乙酯和1份苯醚甲环唑组成。
[0127]
应用例4
[0128]
本应用例提供马来酸二乙酯在水稻纹枯病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与三唑类杀菌剂以组合物的形式应用于纹枯病害的防治。
[0129]
试验对象：三唑类杀菌剂(苯醚甲环唑)单剂、实施例16
‑
19所提供的组合物和马来酸二乙酯单剂。
[0130]
试验方法：
[0131]
ec
50
的测定：苯醚甲环唑和马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：200和1：3000的比例进行复配，并进行系列浓度稀释，试验使用的苯醚甲环唑终浓度范围为0.00025
‑
1μg/ml，马来酸二乙酯的终浓度范围为0.001
‑
40μg/ml。按照应用例1所记载的方法进行抑制率测定，并计算各比例复配药液及单剂药液的ec
50
值。
[0132]
增效性测定：按照应用例1所记载的方法分别测定苯醚甲环唑单剂和马来酸二乙酯单剂复配后对r.solani多抗菌株x19
‑
1和x19
‑
7的ec
50
值，按照wadley方法评价复配后的相互作用程度。
[0133]
试验结果：
[0134]
苯醚甲环唑与马来酸二乙酯增效作用测定结果如表7和表8所示。马来酸二乙酯能够显著提高苯醚甲环唑对r.solani多抗菌株x19
‑
1和x19
‑
7的毒力。对多抗菌株x19
‑
1，当苯醚甲环唑与马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：200和1：3000复配后，sr分别为1.61、30.67、2.27和1.52，均表现为较高的增效性。其中，当苯醚甲环唑与马来酸二乙酯以1：20的比例复配时，表现为最佳增效作用。对多抗菌株x19
‑
7，当苯醚甲环唑与马来酸二乙酯分别以1：2、1：20、1：200和1：3000复配后，sr分别为1.57、14.40、1.87和1.60，同样表现出较高的增效性。其中，苯醚甲环唑与马来酸二乙酯以1：20的比例复配，增效作用最佳。
[0135]
表7 马来酸二乙酯对苯醚甲环唑抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
1的增效作用
[0136][0137]
注：
“‑”
表示不适合。
[0138]
表8 马来酸二乙酯对苯醚甲环唑抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
7的增效作用
[0139][0140][0141]
注：
“‑”
表示不适合。
[0142]
实施例20
[0143]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数200份马来酸二乙酯和1份百菌清组成。
[0144]
实施例21
[0145]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数40份马来酸二乙酯和1份百菌清组成。
[0146]
实施例22
[0147]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数10份马来酸二乙酯和1份百菌清组成。
[0148]
实施例23
[0149]
本实施例提供一种用于水稻纹枯病防治的组合物，由质量份数2份马来酸二乙酯和1份百菌清组成。
[0150]
应用例5
[0151]
本应用例提供马来酸二乙酯在水稻纹枯病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与取代苯类杀菌剂以组合物的形式应用于纹枯病害的防治。
[0152]
试验对象：取代苯类杀菌剂(百菌清)单剂、实施例20
‑
23所提供的组合物和马来酸二乙酯单剂。
[0153]
试验方法：
[0154]
ec
50
的测定：百菌清和马来酸二乙酯分别以1：2、1：10、1：40、和1：200的比例进行复配，并进行系列浓度稀释，试验使用的百菌清终浓度范围为0.0025
‑
2.5μg/ml，马来酸二乙酯的终浓度范围为0.01
‑
40μg/ml。按照应用例1所记载的方法进行抑制率测定，并计算各比例复配药液及单剂药液的ec
50
值。
[0155]
增效性测定：按照应用例1所记载的方法分别测定百菌清单剂和马来酸二乙酯单剂复配后对r.solani多抗菌株x19
‑
1和x19
‑
7的ec
50
值，按照wadley方法评价复配后的相互作用程度。
[0156]
试验结果：
[0157]
百菌清与马来酸二乙酯增效作用测定结果如表9和表10所示。马来酸二乙酯能够显著提高百菌清对r.solani多抗菌株x19
‑
1和x19
‑
7的毒力。对多抗菌株x19
‑
1，当百菌清与马来酸二乙酯分别以1：2、1：10、1：40和1：200复配后，sr分别为1.50、10.91、38.09和1.54，均表现为较高的增效性。其中，当百菌清与马来酸二乙酯以1：40的比例复配时，表现为最佳增效作用。对多抗菌株x19
‑
7，当百菌清与马来酸二乙酯分别以1：2、1：10、1：40和1：200复配后，sr分别为1.51、7.12、47.86和1.60，同样表现出较高的增效性。其中，百菌清与马来酸二乙酯以1：40的比例复配，增效作用最佳。
[0158]
表9 马来酸二乙酯对百菌清抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
1的增效作用
[0159]
[0160]
注：
“‑”
表示不适合。
[0161]
表10 马来酸二乙酯对百菌清抑制立枯丝核菌多抗菌株x19
‑
7的增效作用
[0162][0163]
注：
“‑”
表示不适合。
[0164]
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。