空间邻近化学发光法检测D-二聚体的试剂盒的应用的制作方法

技术特征：
1.d
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二聚体的检测试剂盒在空间邻近化学发光法检测d
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二聚体中的应用，其特征在于，所述d
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二聚体的检测试剂盒包括：酶标记物、发光标记物、辅助剂、触发剂和校准品；所述酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的d
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dimer检测抗体，所述发光标记物的原料组分包括9,10
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二氢吖啶标记的d
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dimer捕获抗体；所述酶标记物的原料组分还包括0.05m磷酸盐缓冲液；所述酶标记物的制备方法包括：称取5mg hrp溶解于1ml蒸馏水中，加入0.2ml新配的0.1m过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mm ph4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；加入20μl 0.2m ph9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入1mg抗d
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dimer单克隆抗体室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/ml硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15m ph 7.4pbs透析，4℃过夜；取出透析物，加适量甘油后置于
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20℃冰箱保存；所述发光标记物的原料组分还包括0.05mtris缓冲液；所述发光标记物的制备方法包括：将发光底物acridan用500μl的dmf溶解；吸取溶解的acridan 41.3μl，加入0.05m硼酸钠缓冲液708.7μl，再加入250μl抗ddimer单克隆抗体，翻转混匀4～5次，室温静置30min；将标记反应管置于摇床上，于2～8℃下混合过夜，取出加入适量甘油后置于
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20℃冰箱保存。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述校准品包括不同浓度d
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dimer抗原的校准品和0.1m校准品稀释液；所述校准品稀释液的制备方法包括：称取磷酸二氢钾14.1g，nah2po4·
2h2o 3.0g，加超纯水溶解，proclin
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300 0.5～1ml，混匀后，加超纯水定容至1000ml，得到校准品稀释液，2～8℃储存备用；所述校准品的制备方法：校准品的浓度为0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、10000ng/ml，用所述校准品稀释液将纯化d
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二聚体稀释至相应浓度，2～8℃储存备用。3.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述d
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二聚体的检测试剂盒在空间邻近化学发光法检测d
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二聚体的方法，包括步骤：s1：分别加入25μl标准品、25μl过氧化物酶标记的d
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dimer检测抗体和25μl发光标记物至化学发光反应管；s2：于37℃恒温箱反应15min；s3：分别加入5μl辅助剂至化学发光反应管，震荡混匀，静置1～2min；之后分别加入触发剂75μl，震荡混匀，立即检测，读取信号值；s4：对校准品的浓度和发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。

技术总结
本发明涉及一种空间邻近化学发光法检测D


技术研发人员：奚伟红 朱丹丹 廖鸳鸯
受保护的技术使用者：无锡壹闪生物科技有限公司
技术研发日：2018.09.25
技术公布日：2021/10/19