对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的杂质检测方法与流程

对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮的杂质检测方法
技术领域
1.本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙 酮的杂质检测方法。


背景技术：

2.对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮，也称为α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基
‑4‑
硝基
‑ꢀ
苯丙酮，其结构式如下：
[0003][0004]
上述的对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮是氯霉素合成中的重要中间体； 在合成过程中，其中可能存在的杂质为4
‑
硝基
‑
(2
‑
乙酰氨基)苯乙酮，其结构 如下：
[0005][0006]
为了确保该中间体即对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮的质量，需要对其 进行检测分析以控制质量。
[0007]
目前，对于该中间体的检测项目为水分、熔点和外观，其纯度是否达标主 要熔点进行判断。但是，该方法存在一定的缺陷：其纯度虽然能通过熔点进行 判断，但其杂质的含量无法通过熔点测定来实现，即对杂质只能定性无法定量， 也就无法得知该中间体的纯度信息，从而无法确保后续步骤的收率和质量，给 工艺控制带来困难，甚至可能造成最终产品纯度不达标，造成严重的经济损失。


技术实现要素：

[0008]
本发明的目的，就在于提供一种对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮的杂质 检测方法，以解决上述问题。
[0009]
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是这样的：一种对硝基
‑
α
‑
乙酰 氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮的杂质检测方法，采用hplc方法。
[0010]
作为优选的技术方案，所述hplc方法的色谱条件为：
[0011]
色谱柱：c18；
[0012]
流动相：流动相a:乙腈
‑
水＝25:75；流动相b:乙腈，梯度洗脱，洗脱程 序为：
[0013]
时间ab0100041000105347
15534715.11000231000
[0014]
检测波长：266nm。
[0015]
作为优选的技术方案，样品采用水：乙腈＝50:50进行溶解，浓度为 0.5mg/ml。
[0016]
作为优选的技术方案，样品配置后，30min内完成进样。
[0017]
本发明的有益效果在于：采用本发明的方法，可以对对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑ꢀ
β
‑
羟基苯丙酮的杂质4
‑
硝基
‑
(2
‑
乙酰氨基)苯乙酮进行快速定量检测，确保后 续步骤的收率和质量。
附图说明
[0018]
图1为本发明实施例1的样品未精制的hplc检测图；
[0019]
图2为本发明实施例2的样品精制后的hplc检测图；
[0020]
图3为对比例1的hplc图；
[0021]
图4为对比例2的hplc图；
[0022]
图5为对比例3的hplc图；
具体实施方式
[0023]
下面将结合附图对本发明作进一步说明。
[0024]
实施例1
[0025]
一种对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮的杂质检测方法，采用hplc方法， 所述hplc方法的色谱条件为：
[0026]
色谱柱：c18，150
×
4.6mm 5μm；
[0027]
流动相：流动相a:乙腈
‑
水＝25:75；流动相b:乙腈，梯度洗脱，洗脱程 序为：
[0028]
时间ab010004100010534715534715.11000231000
[0029]
检测波长：266nm；
[0030]
准确称取未精制的样品25mg，加溶剂(水：乙腈＝50:50，体积比)溶解并 稀释至50ml，其浓度为0.5mg/ml；
[0031]
样品采用水：乙腈＝50:50进行溶解，浓度为0.5mg/ml，柱温：30℃流 速：1.0ml/min，进样量：4μm，进样时间：23min；结果见图1，对硝基
‑
α
‑ꢀ
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮的出峰时间为2.9min左右，杂质杂质4
‑
硝基
‑
(2
‑
乙酰 氨基)苯乙酮的出峰时间为3.7min左右，二者分离度3.66，达到要求，杂质4
‑ꢀ
硝基
‑
(2
‑
乙酰氨基)苯乙酮的含量为2.9％。
[0032]
实施例2
[0033]
本实施例与实施例1相比，区别仅仅是样品经过精制后，按照相同方法进 行检测，结果见图2，杂质4
‑
硝基
‑
(2
‑
乙酰氨基)苯乙酮的含量为1.2％；
[0034]
通过实施例1与实施例2的对比，说明本发明的方法，可以准确得知杂质 4
‑
硝基
‑
(2
‑
乙酰氨基)苯乙酮的含量为2.9％的含量变化。
[0035]
方法验证
[0036][0037]
验证过程：
[0038]
1.1专属性
[0039]
1.1.1溶液配制：
[0040]
空白溶剂：流动相；
[0041]
取本品约5mg置于10ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释成刻度，摇匀即 可。
[0042]
1.1.1操作步骤：
[0043]
进空白≥1针，确定基线，空白溶剂出峰对样品无干扰。
[0044]
供试品溶液一针，计算杂质分离度。
[0045]
结果计算：
[0046]
表3专属性检测结果
[0047][0048]
1.2检测限
[0049]
1.2.1溶液配制：准确称取约为2.5mg样品，于100ml容量瓶中，用稀释液 逐级稀释至s/n在2
‑
5范围内，将溶液作为检测限溶液。
[0050]
1.2.2测定方法：精密量取检测限溶液连续进样3次，记录色谱图。
[0051]
表4检测限检测结果
[0052][0053]
1.3精密度
[0054]
1.3.1重复性
[0055]
1.3.1.1溶液配制：
[0056]
供试品溶液制备：连续取6份本品约5mg置于10ml容量瓶中，用稀释液 溶解并稀释成刻度，摇匀即可。
[0057]
1.3.1.2操作步骤：
[0058]
空白1份；样品6份
[0059]
1.3.2中间精密度
[0060]
1.3.2.1溶液配制：
[0061]
供试品溶液制备：连续取6份本品约5mg置于10ml容量瓶中，用稀释液 溶解并稀释成刻度，摇匀即可。
[0062]
1.3.2.2操作步骤：
[0063]
空白1份；样品6份
[0064]
结果：
[0065]
表5重复性检测结果
[0066][0067]
表6精密度结果
[0068][0069]
1.4准确度
[0070]
1.4.1：80％限度溶液的配制：精密称取供试品约4mg，置3个不同的10ml 量瓶中，
加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0071]
1.4.2：100％限度溶液的配制：精密称取供试品约5mg，置3个不同的10ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0072]
1.4.3：120％限度溶液的配制：精密称取供试品6mg，置3个不同的10ml 量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0073]
表7准确度结果
[0074][0075]
2线性
[0076]
2.1.1线性
‑
140％限度溶液的配制：精密称取供试品约2mg，置10ml量瓶中， 加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0077]
2.1.2线性
‑
260％限度溶液的配制：精密称取供试品约3mg，置10ml量瓶中加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0078]
2.1.3线性
‑
380％限度溶液的配制：精密称取供试品4mg，置10ml量瓶中，加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0079]
2.1.4线性
‑
4100％限度溶液的配制：精密称取供试品5mg，置10ml量瓶中，加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0080]
2.1.5线性
‑
5120％限度溶液的配制：精密称取供试品6mg，置10ml量瓶中，加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0081]
表8线性结果
[0082][0083]
[0084]
对比例1
[0085]
本对比例与实施例1相比，流动相a用纯水，流动相b乙腈，仍然采用相 同的梯度洗脱程序，结果见图3，主峰和乙酰化杂质峰未分开。
[0086]
对比例2
[0087]
本对比例与实施例1相比，仅采用等度洗脱，其余条件均相同，结果见图4， 对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑
β
‑
羟基苯丙酮出峰时间1.4分钟，出峰时间过早，主峰和 乙酰化杂质峰未分开。
[0088]
对比例3
[0089]
本对比例与实施例1相比，仅将色谱柱替换为chiralpak ig250
×
4.6mm 5μmm，其余条件均相同，结果见图5，可见对硝基
‑
α
‑
乙酰氨基
‑ꢀ
β
‑
羟基苯丙酮峰分为了两个峰，说明此柱子不适合缩合物乙酰化杂质的检测。
[0090]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发 明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明 的保护范围之内。