一种酪氨酸激酶抑制剂及其应用的制作方法

1.本发明涉及药物技术领域，更涉及一种酪氨酸激酶抑制剂，以及在预防和治疗酪氨酸激酶介导的疾病中的应用，具体为一种酪氨酸激酶抑制剂及其应用。


背景技术：

2.肝癌是全球第六大癌症的病因，也是第四大常见的癌症死亡原因。中国是肝癌大国，据统计，全世界每年新增肝癌患者约70万，而中国约占一半，约36万左右。
3.肝细胞癌(hcc)占所有原发性肝癌的75％
‑
85％，它是一种具有高度血管依耐性的实体肿瘤。hcc发生过程中，血管内皮生长因子受体(vegfr)和血小板源生长因子受体(pdgfr)异常，可使ras/mapk通路下游上调，导致血管生成增加和细胞增殖，与hcc和转移相关。
4.乐伐替尼于2015年2月获fda批准用于晚期放射性
‑
碘难治性分化型甲状腺癌的治疗。2018年，fda证实批准乐伐替尼用于初治晚期不可手术的肝细胞肝癌的治疗。相隔不到一个月，中国cfda正式确认乐伐替尼在国内获批上市，用于晚期肝癌的一线治疗。虽然研究证实乐伐替尼药效要好于索拉菲尼，但乐伐替尼仍存在缺陷。
5.乐伐替尼开发之初，其目的是用于甲状腺癌的治疗，并不是针对hcc开发。其体外研究表明，其作用于vegfr效果较好，但作用于pdgfr效果较弱。作用于vegfr2
‑
3比作用于fgfr1、pdgfr选择性高10倍。
6.另外，由于乐伐替尼游离态(结构式如式
①
)在各种常用溶剂中均很难溶，合成其甲磺酸盐时，选用醋酸为溶剂，然后加入甲磺酸成盐(参考日本卫材专利wo2016/031841)，该工艺不可避免的会导致基因毒性杂质的出现(结构式如式
②
)，合成乐伐替尼时，只能尽可能的减少基因毒性杂质，而难以除去该杂质。
[0007][0008]
口服乐伐替尼不良反应较多，如高血压、腹泻、食欲降低、体重减轻和疲劳等。如此多的副反应，也可能与乐伐替尼各种基因毒性杂质太多有关。
[0009]
针对以上缺陷，本发明对乐伐替尼的结构进行了改良，以期望其针对肝癌能发挥出更好的药效，同时减少药物中基因毒性杂质，降低药物副作用；因此，我们提出一种酪氨酸激酶抑制剂及其应用，以便于解决上述中提出的问题。


技术实现要素：

[0010]
本发明的目的在于提供一种酪氨酸激酶抑制剂及其应用，用于预防和治疗酪氨酸激酶介导的疾病，包括甲状腺癌，肾细胞癌，肝癌，胃癌等。
[0011]
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐的结构如式(一)所示：
[0012][0013]
其中，r1、r3和r4独立地为氢、取代或未取代的c1
‑
4烷基；所述取代是被至少一个下述基团取代：卤素、硝基、氨基、氰基和苯基；
[0014]
r2独立地为氢、卤素、硝基、氰基、取代或未取代的c1
‑
2烷基、取代或未取代的c1
‑
2烷氧基；所述取代是被至少一个下述基团取代：卤素、硝基和苯基。
[0015]
优选的，所述酪氨酸激酶抑制剂或药学上可接受的盐的优选化合物的结构式如式(二)和式(三)所示：
[0016][0017]
优选的，所述的盐包括但不限于乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐和硫酸盐等。
[0018]
本发明提供另一种技术方案是提供一种酪氨酸激酶抑制剂的应用，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐在实际应用过程中以药物组合物的形式存在，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。
[0019]
优选的，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐还包括在制备预防或治疗酪氨酸激酶介导的疾病的药物中的应用.
[0020]
优选的，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐介导的疾病包括甲状腺癌，肾细胞癌，肝癌等，特别是肝细胞癌。
[0021]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该酪氨酸激酶抑制剂及其应用，能够用于预防和治疗酪氨酸激酶介导的疾病，包括甲状腺癌，肾细胞癌，肝癌等，主要是hcc。
附图说明
[0022]
图1为本发明中化合物(二)制备流程示意图；
[0023]
图2为本发明中实验数据分析图表示意图1；
[0024]
图3为本发明中实验数据分析图表示意图2；
[0025]
图4为本发明中实验数据分析图表示意图3；
[0026]
图5为本发明中实验数据分析图表示意图4；
[0027]
图6为本发明中实验数据分析图表示意图5。
具体实施方式
[0028]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0029]
本发明提供一种技术方案：一种酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐的结构如式(一)所示：
[0030][0031]
其中，r1、r3和r4独立地为氢、取代或未取代的c1
‑
4烷基；所述取代是被至少一个下述基团取代：卤素、硝基、氨基、氰基和苯基；
[0032]
r2独立地为氢、卤素、硝基、氰基、取代或未取代的c1
‑
2烷基、取代或未取代的c1
‑
2烷氧基；所述取代是被至少一个下述基团取代：卤素、硝基和苯基。
[0033]
本发明进一步的，所述酪氨酸激酶抑制剂或药学上可接受的盐的优选化合物的结构式如式(二)和式(三)所示：
[0034][0035]
本发明进一步的，所述的盐包括但不限于乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐和硫酸盐等。
[0036]
本发明提供另一种技术方案是提供一种酪氨酸激酶抑制剂的应用，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐在实际应用过程中以药物组合物的形式存在，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。
[0037]
本发明进一步的，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐还包括在制备预防或治疗酪氨酸激酶介导的疾病的药物中的应用.
[0038]
本发明进一步的，所述酪氨酸激酶抑制剂化合物或药学上可接受的盐介导的疾病包括甲状腺癌，肾细胞癌，肝癌等，特别是肝细胞癌。
[0039]
实施例1：
[0040]
化合物(二)的制备，如图1中所示；
[0041]
其中：化合物3的合成为；
[0042]
将900ml dmso加入3l反应瓶，再加入64g koh，抽真空，氮气置换一次，并保持通氮气下，向反应瓶中加入98.9g化合物1。
[0043]
用100ml dmso冲洗粘壁物料。将反应液冷却20
‑
25℃，向反应瓶中滴加水(滴加时间10
‑
15分钟)，(反应略有放热)控制温度小于40℃。
[0044]
水滴加完后，保持搅拌，待体系由红棕色变成暗黑色(约0.5
‑
1h)，体系变色后再继续搅拌10
‑
15分钟。
[0045]
一次性将100g化合物2加入到反应瓶中，升温至90℃，搅拌反应2小时，降温55℃，依次向反应液中滴加500ml丙酮和1000ml水，滴毕后保温50至55℃搅30分钟。降温至30
‑
35℃，再冰水浴降至5
‑
10℃，保温搅拌30分钟。
[0046]
抽滤，滤饼用100ml丙酮/200ml水的混合溶液洗涤，再用水洗涤滤饼至滤液基本无色；90℃以下，真空/鼓风干燥至水分小于0.2％，得类白色至红黄色固体(化合物3)132.0
‑
138.0g，收率：91
‑
95％；
[0047]
送检，若单一杂质≥0.2％，则进行纯化，纯化步骤如下：将粗品132g加入到10ml/g thf中，加热回流2
‑
3h，降温至10
‑
20℃，过滤，滤饼用少量thf淋洗。60
‑
80℃真空烘干，得成品118.8g，收率：85
‑
90％。
[0048]
其中：化合物4的合成；
[0049]
称取130g化合物3加入到氮气保护下的3l三口瓶，加1300ml dmf，加65.8g吡啶，5.4g水，搅拌，降温至0
‑
5℃，滴加142.0g氯甲酸苄酯到反应瓶中，滴毕，0
‑
10℃反应。
[0050]
滴加完后约30分钟，体系会析出固体，体系呈粘稠状。
[0051]
反应约3小时后。向反应液中滴加1300ml水，控温小于等于20℃滴加，(刚加水时会放热)滴毕，搅拌0.5小时，控温10
‑
20℃，抽滤，滤饼用520ml水洗涤。
[0052]
再用520ml丙酮洗涤，60℃
‑
70℃真空干燥至水分小于0.5％，得白色或类白色固体(化合物4)162g，收率约90％；
[0053]
其中化合物(二)的合成
[0054]
称取125.7g盐酸金刚烷胺，92.6g碳酸钾加入到氮气保护下的3l三口瓶，加800ml dmf，加热至50℃搅拌1小时，加入53g吡啶，然后加入160g化合物4，50℃搅拌反应约2小时后。向反应液中滴加1600ml水，控温小于等于20℃滴加，(刚加水时会放热)滴毕，搅拌0.5小时，控温10
‑
20℃，抽滤，滤饼用1120ml水洗涤，再用560ml乙醇洗涤。60℃
‑
70℃真空干燥至水分小于0.5％，得白色或类白色固体(化合物二)157g。收率约90％。
[0055]
精制：将所得粗品加入800ml乙醇回流1小时，冷却过滤即得纯品。
[0056]
ms：m/z(es):521.2,522.2[m 1]。
[0057]
1h nmr：
[0058]
(400mhz,d6
‑
dmso):8.67(d,2h),8.28(d,1h),8.01(s,1h),7.86(s,1h),7.75(s,1h),7.51(s,1h),7.47(d,1h),7.18～7.21(dd,1h),6.87(s,1h),6.52(d,1h),4.03(s,3h),2.03(s,3h),1.96(s,6h),1.64(s,6h)。
[0059]
实施例2：
[0060]
化合物(三)的制备：
[0061]
制备流程参考实施例1化合物(二)的合成；将盐酸金刚烷胺替换成盐酸美金刚，可制得化合物(三)。
[0062]
ms：m/z(es):549.2,550.2[m 1]。
[0063]
1h nmr：
[0064]
(400mhz,d6
‑
dmso):8.67(d,2h),8.27(d,1h),8.00(s,1h),7.86(s,1h),7.75(s,1h),7.51(s,1h),7.47(d,1h),7.18～7.21(dd,1h),6.90(s,1h),6.51(d,1h),4.03(s,3h),2.10(s,1h),1.78(s,2h),1.60(s,4h),1.35(d,2h),1.28(d,2h),1.12(s,2h),0.83(s,6h)。
[0065]
实施例3：
[0066]
化合物(二)盐酸盐的制备：
[0067]
称取10g化合物(二)，加入300ml乙醇溶清，滴加10ml 15％的氯化氢乙醇溶液，滴毕，室温搅拌2小时，过滤，乙醇洗涤滤饼，真空干燥得约9g白色固体。
[0068]
实施例4：
[0069]
化合物(三)盐酸盐的制备：
[0070]
制备流程参考实施实例3，可制得化合物(三)的盐酸盐。
[0071]
纯度实验1
[0072]
1、实验条件：
[0073]
检测器：紫外吸收计(测量波长：252nm)；
[0074]
柱子：wondasil c18 superb 5um 4.6mm*250mm；
[0075]
柱温：恒温接近40℃；
[0076]
流动相：如表1所示，用线性梯度洗提具有以下组成的溶液a和溶液b；
[0077]
溶液a：水/乙腈/70.0～72.0％分析纯高氯酸(990:10:1，v/v/v)；
[0078]
溶液b：水/乙腈/70.0～72.0％分析纯高氯酸(100:900:1，v/v/v)；
[0079]
流速：1.0ml/min
[0080][0081][0082]
【表1】
[0083]
2、实验原理：采用外标法检测文中实施例3或4制备的化合物(二)或(三)的盐酸盐和采用专利wo2016/031841方法制备的式
①
甲磺酸盐中式
②
的含量；
[0084]
3、实验结果：
[0085]
名称杂质式
②
的含量(按质量计)化合物(二)盐酸盐未检出化合物(三)盐酸盐未检出式
①
甲磺酸盐78ppm
[0086]
【表2】
[0087]
由表2可知，化合物(二)和化合物(三)盐酸盐，未检测出上文所述基因毒性杂质式
②
。而乐伐替尼甲磺酸盐现有工艺不可避免的会出现基因毒性杂质式
②
；
[0088]
试验例1：体外酶抑制活性测试：
[0089]
1、试验原理：
[0090]
通过envision检测assay plate中的化学发光，以化合物的ic50值为指标，来评价化合物对酪氨酸激酶的抑制作用。
[0091]
2、试验方法(以pdgfrα举例)：
[0092]
在激酶缓冲液中稀释酶，底物，atp和抑制剂。
[0093]
添加到384低容量板的孔中：1μl抑制剂或(5％dmso)、2微升酶(2ng)、2μl底物/atp混合物(25um atp，0.2μg/μlpolye4y1)，然后在25℃孵育120分钟。
[0094]
加入5μladp
‑
glo
tm
试剂在25℃孵育40分钟。
[0095]
加入10μl激酶检测试剂在25℃孵育30分钟。
[0096]
记录发光(积分时间0.5秒)。激酶缓冲液：40mm tris，ph 7.5；20mm氯化镁；0.1mg/ml牛血清白蛋白；50μmdtt；
[0097]
3、试验结果
[0098][0099]
【表3实施化合物对体外酶的抑制作用】
[0100]
由表3可知，实施例化合物(二)和(三)对试验中的酪氨酸激酶均具有抑制作用，且对pdgfrα激酶的抑制作用优于对照式
①
(乐伐替尼)，尤其是化合物(二)，其具体的试验数据分析见图2、图3、图4、图5和图6，其中图谱中的lqtx001
‑
a对应上文所述化合物(二)，lqtx001
‑
b对应上文所述化合物(三，lqtx001
‑
dz对应乐伐替尼。
[0101]
本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。