一种杜仲木脂素的提取方法及其应用与流程

1.本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种杜仲木脂素的提取方法及其应用。


背景技术：

2.杜仲(学名eucommiaulmoidesoliver)，又名胶木，为杜仲科杜仲属植物。杜仲的干燥树皮是中国传统的滋补类药材，其药用作用历史悠久，从《神农本草经》到《本草纲目》均有记载。2010年版的《中国药典》中记载：杜仲，性味甘温，肾经，归肝，无毒，强筋骨，有补肝肾，安胎等功效，可用于肝肾不足，筋骨无力，腰膝酸痛，妊娠漏血，头晕目眩，胎动不安等的症状。
3.杜仲中的化学成分主要为黄酮类、环烯醚萜类、木脂素类、三萜类、酚类、多糖类、杜仲胶等，杜仲中的木脂素又可以分为四氢呋喃型木脂素、骈四氢呋喃型木脂素、新木脂素、倍半木脂素、松脂素香草酸醚二糖甙、丁香素香草酸醚二糖甙和环橄榄素等，目前鉴定的已有40多种。
4.对于杜仲木脂素提取，现有技术中大多是以70％
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90％的乙醇进行提取后，再对提取液进行进一步提取纯化得到。
5.中国专利申请cn108042600a公开一种杜仲木脂素及杜仲提取物在制备hsp90α抑制剂和抗肿瘤药物中的应用，特别是在制备热休克蛋白90α(heat shock protein 90，hsp90α)选择性c
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端抑制剂及用于抗乳腺癌和前列腺癌中的应用。其中所述杜仲木脂素的制备方法为：取杜仲树皮，用体积分数为60
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70％的乙醇回流提取，提取液浓缩后用大孔吸附树脂柱层析，柱层析的方法为：使用大孔吸附树脂拌样上样，先水洗2.5
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4倍柱体积，再用质量分数为1％的氨水继续洗2.5
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4倍柱体积，再水洗至中性，再用体积分数为15
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25％的乙醇洗脱2
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4倍柱体积，用体积分数为40
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50％的乙醇洗2
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3倍柱体积，将体积分数为40
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50％的乙醇洗脱得到的洗脱液浓缩，干燥，得到杜仲木脂素。
6.中国专利申请cn105582000a涉及杜仲皮或杜仲叶中萜类和木脂素类物质的制备方法及其在制备治疗老年性痴呆以及阿尔茨海默病药物或保健食品中的应用。所制备的杜仲皮或杜仲叶中萜类物质本身是指1
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脱氧
‑△
4,5
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杜仲醇、2,3
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二羟基
‑△
4,5
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杜仲醇、杜仲醇苷a、杜仲叶苷a、杜仲叶苷b等中的一种或多种。其中木脂素类物质的制备方法包括以下步骤(1).将杜仲皮或杜仲叶药材粉碎成粗粉，用0
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100％乙醇浸泡，加入4
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12倍量溶剂加热回流提取若干次，过滤，合并滤液；(2).上述滤液减压浓缩至0.5
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1.8g生药材/ml，冷藏过夜，析胶，过滤，滤液再用有机溶剂萃取或滤液上大孔吸附树脂进行梯度洗脱，回收有机溶剂，得浸膏上硅胶柱；(3).上硅胶柱后依次用三氯甲烷：甲醇或二氯甲烷：甲醇或三氯甲烷：甲醇：水或二氯甲烷：甲醇：水梯度洗脱，合并相应流份。
7.中国专利申请cn104435067a公开了一种治疗心血管疾病的杜仲组分组合物。该组合物的成分均来自中药杜仲，其具体由重量百分比为10～80％的杜仲总黄酮，10～80％的杜仲环烯醚萜和10～80％的杜仲木脂素组成。其中杜仲木脂素的制备：取杜仲树皮(去外皮)2kg，用8l65％乙醇回流提取两次，每次lh，过滤，合并两次提取液浓缩至800ml。用d101
大孔树脂拌样上样(大孔树脂柱体积3l)，水洗3倍柱体积，1％氨水继续洗3倍柱体积，再水洗至中性。用20％乙醇洗脱2倍柱体积，用45％乙醇洗2.5倍柱体积。45％乙醇洗脱液浓缩至600ml。洗脱液浓缩后干燥成粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提取物经紫外检测木脂素成分含量为85％，经hplc检测松脂醇二葡萄糖苷含量为12.5％。


技术实现要素：

8.但是由于杜仲中木脂素种类较多，虽然都分为木质素类化合物，但是结构相差较大，现有技术的提取方法存在提取不完全的缺陷，有漏提木脂素有效成分的可能。而且目前也未见杜仲木脂素提取物在制备治疗关节炎的产品中的应用。
9.本发明的目的是提供一种杜仲木脂素的提取方法及所述方法提取得到的木脂素在制备治疗关节炎的产品中的应用。
10.一种杜仲木脂素的提取方法，包括以下步骤：
11.s1：取干燥的杜仲皮研磨，得杜仲皮粉；
12.s2：将s1得到的杜仲皮粉悬浮于苯甲醚和水两相溶剂中，加热提取；
13.s3：s2提取完成后，过滤，滤液静置分层，分出苯甲醚相；在水相中加入硫酸铵至饱和，后加入乙醇萃取，回收乙醇相；
14.s4：将苯甲醚相和乙醇相合并，减压移除溶剂，残留物使用大孔树脂分离，即得所述杜仲木脂素。
15.进一步地，s1中，将杜仲皮研磨至200
‑
300目粉。
16.进一步地，s2中，按重量份数计，水的用量为杜仲皮的4
‑
6倍。
17.进一步地，s2中，按重量份数计，苯甲醚的用量为杜仲皮的3
‑
5倍。
18.进一步地，s2中，所述加热是将体系加热至40
‑
60℃。
19.进一步地，s2中，加热提取时间为1
‑
2h。
20.进一步地，s3中，所述乙醇为无水乙醇。
21.进一步地，s3中，按重量份数计，乙醇的用量为杜仲皮的2
‑
4倍。
22.进一步地，s4中，所述大孔树脂选自非极性大孔树脂，具体可选自d101型大孔树脂。
23.进一步地，s4中，所述分离具体洗脱过程为，2
‑
3倍柱体积水，2
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3倍柱体积10
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20％乙醇，2
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3倍柱体积40
‑
50％乙醇，2
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3倍柱体积60
‑
80％乙醇，合并40
‑
50％乙醇和60
‑
80％乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得所述木脂素提取物。
24.本发明还提供一种所述木脂素提取物的应用，所述应用为制备抗炎产品中的应用，尤其适合用于制备治疗关节炎的产品。
25.本发明的优势在于：
26.1.本发明意外地发现苯甲醚相对于乙酸乙酯更适合作为杜仲类木脂素的提取剂，采用苯甲醚
‑
水两相提取后，对水相进行乙醇
‑
盐水提取，再经过大孔树脂分离得到一种杜仲木脂素提取物，具有较好的抗炎能力，尤其适用于制备治疗关节炎的产品。
27.2.本发明得到的木脂素提取物，可以在较低剂量下具有较好的抗炎效果。
具体实施方式
28.本发明的总木质素检测方法以松脂醇二葡萄糖苷作为对照品使用紫外可见分光光度法进行测定。
29.实施例1
30.一种杜仲木脂素的制备方法
31.s1：取干燥的杜仲皮1kg研磨至200目，得杜仲皮粉；
32.s2：将s1得到的杜仲皮粉悬浮于3kg苯甲醚和6kg水两相溶剂中，加热至60℃提取1h；
33.s3：s2提取完成后，过滤，滤液静置分层，分出苯甲醚相；在水相中加入硫酸铵至饱和，后加入2kg乙醇萃取，回收乙醇相；
34.s4：将苯甲醚相和乙醇相合并，减压移除溶剂，残留物使用大孔树脂分离，洗脱过程为2倍柱体积水，2倍柱体积20％乙醇，3倍柱体积50％乙醇，2倍柱体积60％乙醇，合并50％乙醇和60％乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得所述木脂素提取物。检测得提取物中总木质素含量为57.3％。
35.实施例2
36.一种杜仲木脂素的制备方法
37.s1：取干燥的杜仲皮1kg研磨至300目，得杜仲皮粉；
38.s2：将s1得到的杜仲皮粉悬浮于5kg苯甲醚和6kg水两相溶剂中，加热至40℃提取1h；
39.s3：s2提取完成后，过滤，滤液静置分层，分出苯甲醚相；在水相中加入硫酸铵至饱和，后加入4kg乙醇萃取，回收乙醇相；
40.s4：将苯甲醚相和乙醇相合并，减压移除溶剂，残留物使用大孔树脂分离，洗脱过程为3倍柱体积水，2倍柱体积20％乙醇，2倍柱体积40％乙醇，3倍柱体积80％乙醇，合并40％乙醇和80％乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得所述木脂素提取物。检测得提取物中总木质素含量为63.1％。
41.实施例3
42.一种杜仲木脂素的制备方法
43.s1：取干燥的杜仲皮1kg研磨至300目，得杜仲皮粉；
44.s2：将s1得到的杜仲皮粉悬浮于5kg苯甲醚和4kg水两相溶剂中，加热至60℃提取2h；
45.s3：s2提取完成后，过滤，滤液静置分层，分出苯甲醚相；在水相中加入硫酸铵至饱和，后加入2kg乙醇萃取，回收乙醇相；
46.s4：将苯甲醚相和乙醇相合并，减压移除溶剂，残留物使用大孔树脂分离，洗脱过程为3倍柱体积水，3倍柱体积20％乙醇，3倍柱体积50％乙醇，2倍柱体积60％乙醇，合并50％乙醇和60％乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得所述木脂素提取物。检测得提取物中总木质素含量为66.8％。
47.实施例4
48.一种杜仲木脂素的制备方法
49.s1：取干燥的杜仲皮1kg研磨至200目，得杜仲皮粉；
50.s2：将s1得到的杜仲皮粉悬浮于3kg苯甲醚和4kg水两相溶剂中，加热至60℃提取1h；
51.s3：s2提取完成后，过滤，滤液静置分层，分出苯甲醚相；在水相中加入硫酸铵至饱和，后加入2kg乙醇萃取，回收乙醇相；
52.s4：将苯甲醚相和乙醇相合并，减压移除溶剂，残留物使用大孔树脂分离，洗脱过程为3倍柱体积水，3倍柱体积20％乙醇，3倍柱体积50％乙醇，3倍柱体积70％乙醇，合并50％乙醇和70％乙醇洗脱液，浓缩、干燥即得所述木脂素提取物。检测得提取物中总木质素含量为64.6％。
53.对比例1
54.和实施例1的区别在于，将苯甲醚替换为乙酸乙酯。检测得提取物中总木质素含量为42.2％。
55.对比例2
56.和实施例1的区别在于，s3中，不加入硫酸铵，将乙醇替换为正丁醇萃取。检测得提取物中总木质素含量为54.3％。
57.对比例3
58.取杜仲树皮(去外皮)2kg，用8l65％乙醇回流提取两次，每次1h，过滤，合并两次提取液浓缩至800ml。用d101大孔树脂拌样上样(大孔树脂柱体积3l)，水洗3倍柱体积，1％氨水继续洗3倍柱体积，再水洗至中性。用20％乙醇洗脱2倍柱体积，用45％乙醇洗2.5倍柱体积。45％乙醇洗脱液浓缩只至600ml。洗脱液浓缩后干燥成粉末。检测得提取物中总木质素含量为83.5％。
59.效果例
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抗炎功效实验
60.本发明的木脂素提取物通过角叉菜胶致大鼠足肿胀动物模型验证其急性抗炎功效。
61.实验动物：5周龄sd大鼠，每组10只。
62.实验动物分为正常组、模型组、阳性对照组、实施例1低剂量组、实施例1中剂量组、实施例1高剂量组、对比例1高剂量组、对比例2高剂量组和对比例3高剂量组。
63.给药方式：
64.正常组和模型组给予生理盐水；
65.阳性对照组给予吲哚美辛10mg/kg/d；
66.实施例1低剂量组、实施例1中剂量组、实施例1高剂量组分别给予实施例1的提取物50mg/kg/d、100mg/kg/d和200mg/kg/d。
67.对比例1高剂量组、对比例2高剂量组和对比例3高剂量组分别给予相应对比例提取物200mg/kg/d。
68.所有组别通过灌胃方式，在每天同一时间灌胃给药。
69.所有实验动物适应性饲养3天，禁食不禁水24h后，除正常组外，其余实验动物按照剂量灌胃给药1h后，将1％角叉菜胶溶液0.1ml注入右后肢脚掌皮下，并记录造模前和致炎后1、2、3、4h、6h、8h右后肢踝关节一下的容积，并通过公式
70.足趾容积变化率(％)＝(造模后容积
‑
造模前容积)/造模前容积
×
100％
71.计算各组实验动物足趾容积变化率，来评价本发明产品在急性炎症中的抑制肿胀
作用。
72.实验结果见表1。
73.表1实验动物足趾容积变化率(％)
[0074][0075][0076]
和模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01。
[0077]
可以看出本发明实施例1高剂量组的提取物在角叉菜胶致大鼠足肿胀动物模型中，取得了较好的抑制肿胀的效果，其效果较吲哚美辛更好。而对比例1高剂量组、对比例2高剂量组和对比例3高剂量组的虽然也有一定的效果，但是和实施例1高剂量组相比较差，甚至不如实施例1中剂量组或仅能和实施例1中剂量组持平。
[0078]
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。