一种卵巢常温保存液及其保存方法与流程

1.本发明涉及生物领域，具体涉及一种卵巢常温保存液及其保存方法。


背景技术：

2.目前常温保存卵巢的最长时间仅为8小时左右，对于需要长途运输或者野外采集的情况来说过于紧迫。一旦超过8小时可采集到的卵泡细胞数量和质量大幅度下降，造成了卵泡细胞的极大浪费。


技术实现要素：

3.为解决上述问题，本发明提供了一种卵巢常温保存液及其保存方法，可以获得优质卵泡细胞。
4.为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种卵巢常温保存液，该卵巢常温保存液以生理盐水为基础液，添加有葡萄糖、mg
2
、辅酶q10和抗生素。
5.进一步地，该卵巢常温保存液葡萄糖的浓度为2mmol/l；mg
2
的浓度为15mmol/l；辅酶q10的浓度为10
µ
mol/l。
6.进一步地，所述抗生素为青霉素和链霉素，青霉素的浓度为0.07 mg/ml，链霉素的浓度为0.06mg/ml。
7.本发明还提供了上述一种卵巢常温保存液的卵巢常温保存方法，通过如下步骤完成：将卵巢用已经预热的pbs溶液清洗3次后，灭菌生理盐水漂洗1次，将其置于完成灭菌处理的卵巢常温保存液中，即可。
8.进一步地，卵巢保存温度为10～20℃。
9.进一步地，每升卵巢常温保存液中保存卵巢50～60个。
10.本发明具有以下有益效果：可以解决卵泡细胞在常温下保存，数量和质量大幅下降的问题，常温保存时间在22天
‑
37天左右，并获得优质卵泡细胞。
具体实施方式
11.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
12.实施例1一种卵巢常温保存方法，通过如下步骤完成：随机选取一只母鸭，麻醉处理后，颈部放血处死，迅速取出整个卵巢，用已经预热的pbs溶液清洗3次后，灭菌生理盐水漂洗1次，
将其置于完成灭菌处理的卵巢常温保存液中，15℃保存；该卵巢常温保存液以生理盐水为基础液，添加有葡萄糖、mg
2
、辅酶q10和抗生素，其中，该卵巢常温保存液葡萄糖的浓度为2mmol/l；mg
2
的浓度为15mmol/l；辅酶q10的浓度为10
µ
mol/l，青霉素的浓度为0.07 mg/ml，链霉素的浓度为0.06mg/ml。
13.实施例2 一种卵巢常温保存方法，通过如下步骤完成：随机选取一只母鸭，麻醉处理后，颈部放血处死，迅速取出整个卵巢，用已经预热的pbs溶液清洗3次后，灭菌生理盐水漂洗1次，将其置于完成灭菌处理的卵巢常温保存液中， 20℃保存；该卵巢常温保存液以生理盐水为基础液，添加有葡萄糖、mg
2
、辅酶q10和抗生素，其中，该卵巢常温保存液葡萄糖的浓度为2mmol/l；mg
2
的浓度为15mmol/l；辅酶q10的浓度为10
µ
mol/l，青霉素的浓度为0.07 mg/ml，链霉素的浓度为0.06mg/ml。
14.对比例1一种卵巢常温保存方法，通过如下步骤完成：随机选取一只母鸭，麻醉处理后，颈部放血处死，迅速取出整个卵巢，用已经预热的pbs溶液清洗3次后，灭菌生理盐水漂洗1次，将其置于完成灭菌处理的卵巢常温保存液中，15℃保存；该卵巢常温保存液以生理盐水为基础液，添加有葡萄糖、mg
2
和抗生素，其中，该卵巢常温保存液葡萄糖的浓度为2mmol/l；mg
2
的浓度为15mmol/l；青霉素的浓度为0.07 mg/ml，链霉素的浓度为0.06mg/ml。
15.对比例2一种卵巢常温保存方法，通过如下步骤完成：随机选取一只母鸭，麻醉处理后，颈部放血处死，迅速取出整个卵巢，用已经预热的pbs溶液清洗3次后，灭菌生理盐水漂洗1次，将其置于完成灭菌处理的卵巢常温保存液中，15℃保存；该卵巢常温保存液以生理盐水为基础液，添加有葡萄糖、辅酶q10和抗生素，其中，该卵巢常温保存液葡萄糖的浓度为2mmol/l；辅酶q10的浓度为10
µ
mol/l，青霉素的浓度为0.07 mg/ml，链霉素的浓度为0.06mg/ml。
16.对比例3一种卵巢常温保存方法，通过如下步骤完成：随机选取一只母鸭，麻醉处理后，颈部放血处死，迅速取出整个卵巢，用已经预热的pbs溶液清洗3次后，灭菌生理盐水漂洗1次，将其置于完成灭菌处理的卵巢常温保存液中，15℃保存；该卵巢常温保存液以生理盐水为基础液，添加有葡萄糖和抗生素，其中，该卵巢常温保存液葡萄糖的浓度为2mmol/l；青霉素的浓度为0.07 mg/ml，链霉素的浓度为0.06mg/ml。
17.对比例4一种卵巢常温保存方法，通过如下步骤完成：随机选取一只母鸭，麻醉处理后，颈部放血处死，迅速取出整个卵巢，用已经预热的pbs溶液清洗3次后，灭菌生理盐水漂洗1次，将其置于完成灭菌处理的卵巢常温保存液中，15℃保存；该卵巢常温保存液以生理盐水为基础液，添加有葡萄糖、mg
2
、辅酶q10和抗生素，其中，该卵巢常温保存液葡萄糖的浓度为16mmol/l；mg
2
的浓度为15mmol/l；辅酶q10的浓度为10
µ
mol/l，青霉素的浓度为0.07 mg/ml，链霉素的浓度为0.06mg/ml。
18.对比试验：实施例1、实施例2、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4所获得的卵巢均采用以下步骤进行处理：卵巢在25℃恢复20min，将卵巢移入35℃的pbs溶液中将卵巢髓质分离，而
后使用干净的pbs溶液冲洗卵巢皮质，将卵巢皮质放入70%的酒精清洗两次，每次10s，用生理盐水冲洗2次，去除血污和多余结缔组织，其次，在无钙镁离子的pbs溶液中3600rpm/min匀浆6min,离心，去除上清液。将过滤得到的组织匀浆液转至酶解液（150iu/mldnase i 0.75mg/ml胶原酶i α
‑
mem）中37℃水浴震荡消化40
‑
60min，消化结束后，用终止消化液（pbs 10%鸡血清）终止消化，最后使用巴士吸管反复吹打溶液以充分释放含卵泡的溶液，分离卵泡取得卵泡悬液，而后在体视显微镜下，用pbs溶液多次清洗后吸出各阶段卵泡（原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡）。
19.以新鲜的鸭卵巢的卵泡各阶段卵泡的数量及组织学特征为基准，测量在维持该基准不降低的情况下，测试实施例1、实施例2、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4中卵巢可保存的最长时间。试验结果：实施例1：37天、实施例2:22天、对比例1：18天、对比例2：18天、对比例3：0.35天、对比例4：32天。
20.以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本技术的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。