包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的制备方法与流程

1.本发明涉及微纳米材料制备与应用领域，尤其涉及包覆金属纳米壳层的荧光编码微球、制备方法及其应用。


背景技术：

2.液相生物芯片技术是以编码微球作为液相反应的载体，根据蛋白质-蛋白质、核酸-核酸等相互作用规律，以快速高通量的流式细胞术作为分析手段，对蛋白、核酸等进行快速高通量的多元定量检测，在蛋白表达、核酸分析、疾病早期诊断以及预后等领域有着非常广泛的应用。相比于传统的检测手段，尽管液相芯片技术已经达到较高的检测灵敏度，但是随着纳米科学和纳米技术的快速发展，尤其面对精准诊断日益增加的需求，其性能还有继续提升的空间和潜能。液相生物芯片的技术核心是带有编码信号的聚合物微球，目前常用的编码信号有光谱信号编码、图形(图像)编码、化学信号编码、物理信号编码等。其中光谱信号编码由于编码灵活、解码快速且方便而运用最为广泛。
3.大量研究发现贵金属纳米材料在光入射的条件下所产生的局域表面等离子体共振 (localized surface plasmon resonance,lspr)效应可用来有效增强连接在其表面荧光分子 /颗粒的荧光信号强度进而提高检测灵敏度，而且研究表明当荧光分子/颗粒的吸收峰/发射峰与贵金属表面等离子体共振峰重叠时，增强效果更为显著。如果能在荧光编码微球表面成功控制包覆具有强lspr效应的贵金属纳米壳层，则有望有效增强荧光报告分子的荧光强度，增加其光学稳定性，提高检测灵敏度。
4.目前在聚合物微球表面包覆贵金属纳米壳层的方法主要通过种子生长法、层层自组装法、原位化学还原法、溶剂溶胀共沉积法和pickering乳液聚合法等来实现。但是这些制备方法普遍面临的问题是：表面包覆率低、均一性差、复杂的制备过程以及不可控的lspr峰等。


技术实现要素：

5.因此，本领域的技术人员致力于开发一种制备过程简单、均一性好(数据支持cv＜10％)以及lspr峰可控(数据支持400-900nm)的聚合物微球表面包覆金属纳米壳层的制备方法，以便获得高稳定性、高重复性和高灵敏度的液相生物芯片检测技术为疾病的诊断提供强有力的工具。
6.为实现上述目的，根据本发明的一方面，提供了一种包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的制备方法(spg法)，主要包括以下步骤：
7.步骤一：将所述重悬于溶剂中的金属纳米材料分散于超纯水中，形成连续相；
8.步骤二：将所述的荧光材料、聚合物溶解到一定量的有机溶剂中，形成分散相；
9.步骤三：在压力作用下，利用膜乳化装置，挤压分散相通过spg膜，在连续相作用下，在spg膜表面形成水包油液滴。
10.进一步地，步骤三所述的压力，优选为气体压力。
11.进一步地，步骤三所述的水包油液滴在连续相的剪切力作用下，液滴脱离spg膜的表面，形成均一的水包油乳液。
12.进一步地，所得的均一的水包油乳液，经室温下磁力搅拌使得乳液中的有机溶剂挥发，贵金属纳米材料均匀包覆在聚合物微球表面，制备出包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球。
13.进一步地，所述金属纳米材料为贵金属纳米材料。
14.进一步地，所述贵金属纳米材料包括金纳米颗粒、金纳米棒、金纳米双锥、银纳米球、银纳米立方体、金@银核壳纳米颗粒、银@金纳米核壳颗粒、金/银合金纳米颗粒中的一种。
15.进一步地，步骤一所述的溶剂为乙醇。
16.进一步地，所述聚合物有苯乙烯-马来酸酐共聚物、苯乙烯-丙烯酸共聚物、聚苯乙烯等；
17.进一步地，所述荧光编码材料包括量子点(cdse/zns、cdse/cds、cdtese/zns、 cdte/cdse/zns、cdte、ag2s、ag2se、inas、inp、hgte、pbs、pbse、cuins2、cuinse2、 cdsete、cdhgte、inp/zns、inas/cdse、cdte/cds、cdte/zns、cdte/cdse、znte/cdte、 znte/cdse、znte/cds、cdsete/cds、cu:cds/zns、mn:znse/zns、cuins2/zns、cuinse2/zns、 cspbcl3、cspbbr3、cspbi3、cspb(cl/br)3、cspb(br/i)3、ch3nh3pbi3、ch3nh3pbbr3)、聚集诱导发光材料(1,1,2,3,4,5-六苯基噻咯(hps)、四苯乙烯(tpe)、9，10-二苯基乙烯基蒽(dsa)、三苯胺、四苯基乙烯-苝酰亚胺衍生物(pbi-tpe,pbi-2tpe)、三苯胺-富马酸腈化合物(bdabfn)，四苯乙烯-三苯胺衍生物(tpe-tpa-dcm)、四苯乙烯-磺酸盐衍生物 (bspotpe)、氰基取代的二芳基乙烯衍生物以及硼系、硅系aie分子及其衍生物)中的一种或多种。
18.进一步地，所述金属纳米材料在水相中的浓度为0～0.3g/ml。
19.进一步地，所述荧光编码材料在油相中的浓度为0～50mg/ml。
20.进一步地，所述聚合物在油相中的浓度为0～2g/ml。
21.进一步地，步骤二所述的有机溶剂为甲苯、三氯甲烷、二氯甲烷中的一种。
22.本发明的另一方面，提供了一种通过上述包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的制备方法(spg-pickering乳液法)获得的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球，所述荧光编码微球包括贵金属纳米壳层、聚合物、荧光编码材料，所述荧光编码微球的粒径为1μm～20μm，变异系数cv＜10％。
23.根据本发明的又一方面，还提供了一种如上所述包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球的应用，所述包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球可用于一种或多种蛋白或核酸的检测。
24.本发明提供了一种包覆金属纳米壳层的荧光编码微球、制备方法及其应用，通过 spg-pickering乳液法，利用修饰一定配体的金属纳米材料在乳化过程中作为新的表面活性剂，在聚合物微球内部掺入不同种类、不同含量的荧光材料，一步即可制备出内部具有不同荧光编码信号、表面包覆均匀的金属纳米壳层的荧光编码微球。
25.该制备方法制备过程简单、表面包覆率高、均一性好以及lspr峰可控，解决了目前常用的金属纳米壳层包覆方法中出现的表面包覆率低、均一性差、制备过程复杂以及不可控的lspr 峰等问题。利用这种表面包覆金属纳米壳层的荧光编码微球作为载体，对蛋白、
核酸等进行快速高通量的多元定量检测，可大幅提高编码微球的稳定性，改善检测灵敏度，在液相生物芯片检测技术中有着非常重要的意义和广泛的应用前景。
附图说明
26.图1是本发明一个较佳实施例中得到的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的sem图片(实施例1)
27.图2是本发明一个较佳实施例中得到的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的激光共聚焦图片(实施例2)
28.图3是本发明一个较佳实施例中得到的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的吸收光谱 (实施例3)
29.图4是本发明一个较佳实施例中得到的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球在温度、ph、缓冲液、时间的稳定性(实施例4)
30.图5是本发明一个较佳实施例中得到的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球为载体对肺炎支原体dna检测的标准曲线(实施例5)
31.图6是本发明一个较佳实施例中得到的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球为载体对肿瘤标志物癌胚抗原cea检测的标准曲线(实施例6)
32.图7是本发明采用的spg膜乳化装置示意图(日本spg公司生产，型号：mn-20)
33.详细说明
34.下面对本发明涉及的结构或这些所使用的技术术语做进一步的说明。这些说明仅仅是采用举例的方式进行说明本发明的方式是如何实现的，并不能对本发明构成任何的限制，本发明的范围由权利要求进行限定和表达。
35.检测
36.检测表示化验或测试一种物质或材料是否存在，比如，但并不限于此，化学物质、有机化合物、无机化合物、新陈代谢产物、药物或者药物代谢物、有机组织或有机组织的代谢物、核酸、蛋白质或聚合物。另外，检测表示测试物质或材料的数量或者存在。进一步说，化验还表示免疫检测，化学检测、酶检测、核酸检测等。
37.金属悬浮液作为连续相
38.连续相(continuous phase)，在分散体系中分散其他物质的物质称连续相。本发明可以包括金属微粒的溶液来作为连续相。金属微粒子，例如纳米颗粒，可以作为悬浮液的形式存在。一般采用制备悬浮溶液的溶剂是极性溶剂，例如乙醇或者水，或者能够溶于水的溶剂。这里的金属是指：一种具有光泽(即对可见光强烈反射)、富有延展性、容易导电、导热等性质的物质。金属可分为黑色金属、有色金属、常见金属、稀有金属、轻金属、重金属、贵金属、准金属元素、稀有难熔金属、稀有分散金属、稀土金属、放射性金属和合成金属。
39.黑色金属：铁、铬、锰三种，亦包括这三种金属的合金，尤其是合金黑色金属钢及钢铁。
40.有色金属：铝、镁、钾、钠、钙、锶、钡、铜、铅、锌、锡、钴、镍、锑、汞、镉、铋、金、银、铂、钌、铑、钯、锇、铱、铍、锂、铷、铯、钛、锆、铪、钒、铌、钽、钨、钼、镓、铟、铊、锗、铼、镧、铈、镨、钕、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥、钪、钇、硅、硼、硒、碲、砷、钍。
41.常见金属：如铁、铝、铜、锌、锡、汞、钛、钨、铅、镍、反常组织的钢、耐磨钢、酸性转炉
钢、酸性高频感应电炉钢、酸性平炉钢等。
42.稀有金属：如锆、铪、铌、钽、锂、铍、钛、钒、锗、铌、钼、铯、镧、钨、镭、铷、铂、铱、锇、镓、铈、钕、钋、镭、锕、铀、钚、锂、铟、铊、铼、硒、碲、钪、钇、钫、钍、镤、铀、锝、钷等。
43.轻金属：密度小于4500千克/立方米，如钛、铝、镁、钾、钠、钙、锶、钡等。
44.重金属：密度大于4500千克/立方米，如铜、镍、钴、铅、锌、锡、锑、铋、镉、汞等。
45.贵金属：如金、银、铂族金属(钌、铑、钯、锇、铱、铂)等。
46.准金属元素：性质价于金属和非金属之间，如硅、硒、碲、砷、硼、钋、锗和锑等。
47.放射性金属：如镭、钫、钋、锕、铀、钍、镤、铀、锝、钜、镎、钚、镅、锔、锫、锎、锿、镄、钔、锘、铹以及锕系后元素，目前已合成的有104号元素至109号元素等。
48.合成金属：一类不含金属元素单质但具有金属导电性的化合物，如聚乙炔、钙钛矿型氧化物、钨青铜、过渡金属一稀土类钙钛矿型氧化物、lanio3等。
49.合金：由两种或两种以上化学元素，且其中至少有一种是金属元素所组成具有金属特性的物质。由两种元素组成的合金统称为“二元合金”，由三种以上元素组成的合金通称为“多元合金”。如镍铬合金、铝合金、铍青铜等。
50.在一些方式中，所谓的金属为贵金属。贵金属主要指金、银和铂族金属(钌、铑、钯、锇、铱、铂)等8种金属元素。这些金属大多数拥有美丽的色泽，价格比一般常用金属昂贵，地壳丰度低，提纯困难，具有较强的化学稳定性，一般条件下不易与其他化学物质发生化学反应。这里贵金属可以用来制备连续相。
51.纳米
52.这里的金属一般是以颗粒的形式存在，颗粒的粒径具有一定大小。可以是纳米颗粒，也可以是非纳米颗粒。在一些优选的方式中，金属可以为纳米颗粒。纳米颗粒：又称超微粉或超细粉，一般指粒度在100纳米以下的粉末或颗粒，是一种介于原子、分子与宏观物体之间处于中间物态的固体颗粒材料。
53.贵金属纳米材料：尺寸在纳米级的贵金属材料，其光学、热学、电学、磁学、力学及化学各方面的性质发生了显著的变化，同时具有许多新奇的性能，主要体现在表面与界面效应、体积效应、量子尺寸效应和宏观量子隧道效应。主要包括金纳米颗粒、金纳米棒、金纳米双锥、金纳米团簇、金纳米纤维、金纳米球、金纳米立方体、金纳米陶瓷、金纳米块体、金纳米粉末、金纳米膜、纳米金线、金纳米片、银纳米颗粒、银纳米棒、银纳米双锥、银纳米团簇、银纳米纤维、银纳米球、银纳米立方体、银纳米陶瓷、银纳米块体、银纳米粉末、银纳米膜、纳米银线、银纳米片、铂纳米颗粒、铂纳米棒、铂纳米双锥、铂纳米团簇、铂纳米纤维、铂纳米球、铂纳米立方体、铂纳米陶瓷、铂纳米块体、铂纳米粉末、铂纳米膜、纳米铂线、铂纳米片、钌纳米颗粒、钌纳米棒、钌纳米双锥、钌纳米团簇、钌纳米纤维、钌纳米球、钌纳米立方体、钌纳米陶瓷、钌纳米块体、钌纳米粉末、钌纳米膜、纳米钌线、铂纳钌片、铑纳米颗粒、铑纳米棒、铑纳米双锥、铑纳米团簇、铑纳米纤维、铑纳米球、铑纳米立方体、铑纳米陶瓷、铑纳米块体、铑纳米粉末、铑纳米膜、纳米铑线、铑纳米片、钯纳米颗粒、钯纳米棒、钯纳米双锥、钯纳米团簇、钯纳米纤维、钯纳米球、钯纳米立方体、钯纳米陶瓷、钯纳米块体、钯纳米粉末、钯纳米膜、纳米钯线、钯纳米片、锇纳米颗粒、锇纳米棒、锇纳米双锥、锇纳米团簇、锇纳米纤维、锇纳米球、锇纳米立方体、锇纳米陶瓷、锇纳米块体、锇纳米粉末、锇纳米膜、纳米锇线、锇纳米片、铱纳米颗粒、铱纳米棒、铱纳米双锥、铱纳米团簇、铱纳米纤维、铱纳米球、铱纳米立方
体、铱纳米陶瓷、铱纳米块体、铱纳米粉末、铱纳米膜、纳米铱线、铱纳米片、金@银核壳纳米颗粒、金@铂核壳纳米颗粒、金@钌核壳纳米颗粒、金@铑核壳纳米颗粒、金@钯核壳纳米颗粒、金@锇核壳纳米颗粒、金@铱核壳纳米颗粒、银@金纳米核壳颗粒、银@铂纳米核壳颗粒、银@钌纳米核壳颗粒、银@铑纳米核壳颗粒、银@钯纳米核壳颗粒、银@锇纳米核壳颗粒、银@铱纳米核壳颗粒、金/银合金纳米颗粒、金/铂合金纳米颗粒、金/钌合金纳米颗粒、金/铑合金纳米颗粒、金/钯合金纳米颗粒、金/锇合金纳米颗粒、金/铱合金纳米颗粒、银/铂合金纳米颗粒、银/钌合金纳米颗粒、银/铑合金纳米颗粒、银/钯合金纳米颗粒、银/锇合金纳米颗粒、银/铱合金纳米颗粒等。
54.在一些方式中，本发明的贵金属纳米材料可以为金纳米颗粒、金纳米棒、金纳米双锥、银纳米球、银纳米立方体、金@银核壳纳米颗粒、银@金纳米核壳颗粒、金/银合金纳米颗粒中的一种。
55.溶剂指在化学组成上不发生任何变化并能溶解其他物质(一般指固体)的液体，或者与固体发生化学反应并将固体溶解的液体。溶解生成的均匀混合物体系称为溶液。在溶液中过量的成分叫溶剂，量少的成分叫溶质。溶剂也称为溶媒，即含有溶解溶质的媒质之意。除水之外的溶剂称为非水溶剂或有机溶剂，水、液氨、液态金属、无机气体等则称为无机溶剂。溶剂按化学组成分为有机溶剂和无机溶剂，通常拥有比较低的沸点和容易挥发，或是可以由蒸馏来去除，从而留下被溶物。溶剂可从混合物萃取可溶化合物。溶剂通常是透明，无色的液体，大多都有独特的气味。
56.这里使金属纳米颗粒重悬的溶剂是两性溶剂。所谓的“两性溶剂”即给出质子和接受质子能力相当的溶剂，如水、甲醇、乙醇等。在一些优选的方式中，为乙醇，例如含量为20-90％的乙醇溶液。在配置连续相前，可以让金属纳米壳体可以重悬于乙醇中，配置时可以将重悬于乙醇的金属纳米材料分散于超纯水中，形成连续相。
57.分散相
58.本发明作为分散相的是聚合物和荧光编码材料作为溶质，而有惰性机溶剂作为溶剂，从而配置形成分散相。这里的聚合物可以是任何的聚合物，该聚合物和荧光编码材料一起形成分散相中的溶质。所谓惰性的有机溶剂既不能给出质子也不能接受质子的溶剂。
59.聚合物
60.所谓的聚合物，是由一种单体经聚合(加聚)反应而成的产物。分子具有重复的结构单位。分子量低的称低聚物，分子量高的，达几千甚至几百万的称高聚物或高分子化合物。
61.聚合物主要有三聚甲醛、有机硅低聚物、硅氧烷低聚物、聚乙烯蜡低聚物、聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酰胺、聚氯乙烯、聚苯乙烯、树脂、聚酯、橡胶、苯乙烯-马来酸酐共聚物，苯乙烯-丙烯酸共聚物，聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚乙酸乙酯、聚苯乙烯甲基丙烯酸共聚物、马来酸酐-1-十八烯共聚物、聚二甲基硅氧烷、聚乙氧基化三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸羟乙基酯、聚乙二醇二丙烯酸酯、聚乙二醇、聚(n-异丙基丙烯酰胺)、蛋白质、淀粉、聚乳酸、纤维素、聚乙烯[—ch2—ch2—]n、尼龙 6[—nh(ch2)5co—]n、酚醛树脂、脲醛树脂、硫化橡胶、酚醛树脂、胺醛树脂、环氧树脂、聚酯树脂、化学纤维、聚酰胺、聚醚、烯类聚合物、醋酸纤维素、丙烯酸酯、聚碳酸酯，聚醚醚酮，聚砜，聚苯硫醚、对苯二酸酯、氟橡胶、丁腈橡胶等。
[0062]
在一些方式中，本发明与荧光编码材料形成分散相的聚合物可以为苯乙烯-马来酸酐共聚物，聚丙烯酰胺，马来酸酐-1-十八烯共聚物等。
[0063]
荧光编码材料
[0064]
荧光编码材料主要包括量子点和聚集诱导发光材料。
[0065]
量子点是在把激子在三个空间方向上束缚住的半导体纳米结构。有时被称为“人造原子”、“超晶格”、“超原子”或“量子点原子”，是20世纪90年代提出来的一个新概念。量子点是一种半径小于或者接近玻儿激子半径的半导体纳米晶粒，由于具有独特的荧光纳米效应，其激发谱宽而且连续分布，发射谱狭窄而对称，发射波长可通过改变粒径和组成进行调控，荧光强度强、漂白速率慢、灵敏度高，广泛应用于光催化、光敏传感器、发光材料、荧光探针标记等领域。尤其是ⅱb族与
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a族元素组成的量子点(如cdse),由于具有特殊优良的可见及近红外光谱区荧光发射性质，在生物医学荧光探针标记物和传感器方面有重要价值。量子点具有分离的量子化的能谱。所对应的波函数在空间上位于量子点中，但延伸于数个晶格周期中。一个量子点具有少量的(1-100个)整数个的电子、电洞或电子电洞对，即其所带的电量是元电荷的整数倍。量子点主要包括cdse/zns、cdse/cds、 cdtese/zns、cdte/cdse/zns、cdte、ag2s、ag2se、inas、inp、hgte、pbs、pbse、cuins2、 cuinse2、cdsete、cdhgte、inp/zns、inas/cdse、cdte/cds、cdte/zns、cdte/cdse、znte/cdte、 znte/cdse、znte/cds、cdsete/cds、cu:cds/zns、mn:znse/zns、cuins2/zns、cuinse2/zns、 cspbcl3、cspbbr3、cspbi3、cspb(cl/br)3、cspb(br/i)3、ch3nh3pbi3、ch3nh3pbbr3、cdse、cds、znse、znte、zno、hgse、hgs、caas、incaas、cdse/znse、cds/zns、cds/ag2s、cds/cd(oh)2、 cdse/znse、cds/hgs、cds/hgs/cds、zns/cds、zns/cds/zns、zns/hgs/zns/cds、cdse/cuse、 cdsete/cds/zns、cdse/cds/zns、cds:mn、zns:mn、cds:cu、zns:cu、cds:tb、zns:tb等。
[0066]
聚集诱导发光材料主要包括环状多烯化合物，如silole衍生物、四噻吩基噻吩、氰取代二苯乙烯型化合物、四苯乙烯型化合物、二乙烯基蒽型化合物、三苯乙烯型化合物、二咔唑三苯乙烯、1,1,2,3,4,5-六苯基噻咯(hps)、四苯乙烯(tpe)、9，10-二苯基乙烯基蒽(dsa)、三苯胺、四苯基乙烯-苝酰亚胺衍生物(pbi-tpe,pbi-2tpe)、三苯胺-富马酸腈化合物 (bdabfn)，四苯乙烯-三苯胺衍生物(tpe-tpa-dcm)、四苯乙烯-磺酸盐衍生物(bspotpe)、氰基取代的二芳基乙烯衍生物以及硼系、硅系aie分子及其衍生物、三苯乙烯衍生物、四
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(4-甲基联苯)乙烯等。
[0067]
在一些方式中，本发明与聚合物形成分散相的荧光编码材料可以为量子点(cdse/zns、 cdse/cds、cdtese/zns、cdte/cdse/zns、cdte、ag2s、ag2se、inas、inp、hgte、pbs、pbse、 cuins2、cuinse2、cdsete、cdhgte、inp/zns、inas/cdse、cdte/cds、cdte/zns、cdte/cdse、 znte/cdte、znte/cdse、znte/cds、cdsete/cds、cu:cds/zns、mn:znse/zns、cuins2/zns、 cuinse2/zns、cspbcl3、cspbbr3、cspbi3、cspb(cl/br)3、cspb(br/i)3、ch3nh3pbi3、ch3nh3pbbr3)、聚集诱导发光材料(1,1,2,3,4,5-六苯基噻咯(hps)、四苯乙烯(tpe)、9， 10-二苯基乙烯基蒽(dsa)、三苯胺、四苯基乙烯-苝酰亚胺衍生物(pbi-tpe,pbi-2tpe)、三苯胺-富马酸腈化合物(bdabfn)，四苯乙烯-三苯胺衍生物(tpe-tpa-dcm)、四苯乙烯-磺酸盐衍生物(bspotpe)、氰基取代的二芳基乙烯衍生物以及硼系、硅系aie分子及其衍生物) 等。
[0068]
有机溶剂
[0069]
有机溶剂即是包含碳原子的有机化合物，是一大类在生活和生产中广泛应用的有机化合物，分子量不大，常温下呈液态。有机溶剂包括多类物质，如链烷烃、烯烃、醇、醛、胺、酯、醚、酮、芳香烃、氢化烃、萜烯烃、卤代烃、杂环化物、含氮化合物及含硫化合物等等，多数对人体有一定毒性。它存在于涂料、粘合剂、漆和清洁剂中。经常使用有机溶剂，如，苯乙烯、全氯乙烯、三氯乙烯、乙烯乙二醇醚和三乙醇胺。
[0070]
有机溶剂是能溶解一些不溶于水的物质(如油脂、蜡、树脂、橡胶、染料等)的一类有机化合物，其特点是在常温常压下呈液态，具有较大的挥发性，在溶解过程中，溶质与溶剂的性质均无改变。溶剂不可以对溶质产生化学反应。它们必须为惰性。
[0071]
惰性有机溶剂主要包括苯，苯、甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、六甲基苯、乙苯、正丙苯、异丙苯、联苯、二苯甲烷、三苯甲烷、苯乙烯、苯乙炔、萘、四氢化萘、蒽、菲、芘、氯仿、n甲基吡咯烷酮、二苯醚、丙酮、甲基丁酮、甲基异丁酮、环己酮、异氟尔酮、二丙酮醇、硅酮、四乙二醇二甲醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙二醇单丁醚、硝基苯、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、二氯苯、二氯甲烷、氯化苦、溴甲烷、二氯丙烷、二溴乙烯、三氯甲烷、二甲亚砜、丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、四氯化碳、环己烷、环己酮、甲苯环己酮、吡啶、苯酚、四氯化碳、异辛烷、乙醚、戊烷、己烷、环氧丙烷等。
[0072]
在一些方式中，本发明让聚合物和荧光编码材料与有机溶剂形成分散相所用的有机溶剂为甲苯、三氯甲烷、二氯甲烷中的一种。
[0073]
在发明中，让聚合物和荧光编码材料与有机溶剂形成分散相，从而可以与连续相一起形成乳液，例如在一些方式中，本发明的聚合物与荧光编码材料形成分散相，进入连续相，形成水包油的乳液，或者形成水包油的小液滴，然后通过后面步骤，让有机相挥发。
[0074]
spg膜
[0075]
spg膜为shirasu porous glass membrane的简称，是一种多孔玻璃膜。spg膜乳化法的特征是用极少量的表面活性剂就可得到良好的乳化物。spg膜规格：外径10mm，内径8mm，长20～500mm，孔径0.1-19.6μm。所述的孔径的大小是决定分散相形成液滴的大小的尺寸，另外一个因素就是压力的大小。例如如图7所示，spg膜类似中空的圆柱体，该膜具有一定的刚性。在膜的中空中可以让分散相，该分散相受到了一定的压力，从而在压力的作用下，分散相穿过薄膜，在薄膜的表面形成液滴，该液滴进入到连续相中，在连续相的作用下，形成包裹的液滴。当然，可以采用图7所述的设备来制造。通过这样的形成制作的液滴，然后对液滴进行缓慢搅拌，让惰性有机试剂挥发，从而让金属颗粒覆盖在连续相上，从而形成金属壳的结构包裹在聚合物和荧光材料形成的核结构表面。
[0076]
在一些方式中，可以让分散相位于圆柱形状的spg膜的外面(与图7所示的位置相反)，而让连续相位于中空的腔体中。施加给spg膜外的分散相一定的压力，从而让从而在压力的作用下，分散相穿过薄膜，在薄膜的表面形成液滴，该液滴进入到连续相中，在连续相的作用下，形成包裹的液滴。这里的压力一般是通过给予惰性气体施加压力，该惰性气体不会对分散相具有化学性质的影响。通过本发明的合适的分散相和连续相的配比已经一些参数的调整，制备出来的颗粒均一，而且使用该材料可以高灵敏度的检测被分析物质。
[0077]
pickering乳液法
[0078]
pickering乳液法是指以超细固体颗粒作为乳化剂而得到的乳状液，超细的固体颗粒可用作水包油或油包水型乳化剂，所得乳状液的类型取决于哪一相优先润湿固体颗
粒，通常优先润湿固体颗粒的一相为外相。如有时固体颗粒更易被油相所润湿，乳状液为w/o(油包水) 型；反之，如固体颗粒更易被水相所润湿，乳状液为o/w(水包油)型。用作乳化剂的固体粉末有黏土、二氧化硅、金属氢氧化物、石墨、炭黑等。乳状液的稳定性与固体颗粒的浓度、颗粒大小、润湿性等有关。
[0079]
被分析物质
[0080]
本发明制备的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球可以用来检测蛋白或者核酸，这些检测的目的是检测液体样本中是否含有蛋白或者核酸类的被分析物质。例如被分析物质可以是蛋白或核酸的检测。对于核酸类的，可以检测病毒、细菌或真菌的核酸，如艾滋病核酸检测、乙肝病毒核酸检测、丙肝病毒核酸检测、甲型流感病毒通用型核酸检测、甲型h1n1流感(2009) 核酸检测、中东呼吸综合征(mers)冠状病毒核酸检测、腺病毒核酸检测、嗜肺军团杆菌(lp) 核酸检测、呼吸道合胞病毒检测、肺炎衣原体(cp)核酸检测、登革病毒通用型核酸检测、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核酸检测、乙型流感病毒核酸检测、新型冠状病毒 2019-ncov核酸检测、结核分枝杆菌(tb)核酸检测、肺炎支原体(mp)核酸检测、人乳头瘤病毒核酸检测、沙眼衣原体核酸检测等。当然，还可以检测与肿瘤相关的核酸。
[0081]
蛋白检测主要用于肿瘤筛查、原发性肝细胞性肝癌检测、生殖腺胚胎癌(睾丸癌、卵巢癌，恶性畸胎瘤等)检测、病毒性肝炎检测、肝硬化检测、胰腺癌检测、胃癌检测、腺癌检测、骨髓瘤检测、肝脏功能检测、肝豆状核变性疾病检测、心血管疾病检测、血脂水平检测、卵巢浆液性囊腺癌检测、粘液性囊腺癌检测、前列腺癌检测、甲状腺髓样癌检测、小细胞性肺癌检测、肝纤维化检测、肝硬化检测、心脏病检测、胃溃疡检测、先天性无纤维蛋白原血症检测、先天性纤维蛋白原异常或功能不全检测、突发性胎盘早期剥离大出血检测、嗜铬细胞瘤检测，甲状腺髓样癌检测等。
[0082]
蛋白检测时的被分析物质还可以包括癌胚抗原cea、甲胎蛋白(aep)、糖类抗原125 (ca125)、前列腺特异抗原(psa)、降钙素(ct)、绒毛膜促性腺激素(hcg)、白蛋白、甲种球蛋白、乙种球蛋白、丙种球蛋白、免疫球蛋白、胎盘球蛋白、血清蛋白、铜蓝蛋白、c—反应蛋白、总蛋白、血红蛋白、丙氨酸氨基转移酶(alt)、天门冬氨酸氨基转移酶(ast)、总胆红素、直间接胆红素、尿胆红素、尿胆原、血胆汁酸、谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、透明质酸、层连蛋白、胶原、胃蛋白酶、肾病、血色素沉着、铁蛋白、钙卫蛋白、肌钙蛋白、抗甲状腺球蛋白抗体、纤维蛋白原、嗜铬粒蛋白等。
[0083]
流体样本
[0084]
本发明的检测的样品包括生物液体(例如病例液体或者临床样品)。液体样品或者液体样本，或者流体样本或者流体样品，可以来源于固态或者半固态的样品，包括排泄物，生物组织和食品样品。利用任何适当的方法可以将固态或半固态的样品转化成液体样品，例如混合、捣碎、浸软、孵育、溶解或在合适的溶液中(例如水，磷酸盐溶液或其他缓冲溶液)利用酶解作用消化固体样品。“生物样品”包括来源于动物，植物和食品样品，例如包括来源于人或动物的尿液，唾液，血及其成分，脊髓液、阴道分泌物，精子，粪便，汗液，分泌物，组织，器官，瘤，组织和器官的培养物，细胞培养物和介质。优选生物样品是尿，优选的，生物样品是唾液。食品样品包括食品加工的物质，最终产品，肉，干酪，酒，牛奶和引用水。植物样品包括源于任何植物，植物组织，植物细胞培养物和介质。“环境样品”来源于环境(例如，来自于湖或者其他水体的液体样品，污水样品，土质样品，地下水，海水和废液样品)。环境样品
还可包括污水或者其他废水。
具体实施方式
[0085]
以下参考说明书附图介绍本发明的多个优选实施例，使其技术内容更加清楚和便于理解。本发明可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本发明的保护范围并非仅限于文中提到的实施例。
[0086]
实施例1
[0087]
图1是本发明所提供的一种包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球制备方法的一个较佳实施例，本实施例所制备的包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球是cdse/zns qds/psma@ag nanoshell其中贵金属纳米材料是ag纳米颗粒，荧光编码材料是cdse/zns量子点，聚合物为苯乙烯-马来酸酐共聚物(psma)，共分两组，制备方法分别为spg膜乳液法和pickering 乳液法，具体制备步骤为：
[0088]
共分成两组，第一组：
[0089]
将0.05mg的cdse/zns量子点(购买自苏州星烁纳米科技有限公司)和0.5g的苯乙烯
-ꢀ
马来酸酐共聚物(psma)溶于8ml甲苯中，形成分散相；
[0090]
将60mg的ag重悬于乙醇(90％乙醇)中的纳米颗粒(100纳米的粒径)分散在100ml的超纯水中，超声分散均匀，形成连续相；
[0091]
采用规格为φ10xl20mm(有效长度10mm)的spg膜，膜孔径为5μm，利用spg膜乳化装置(购于北京嘉盛兴业科技有限公司，日本进口，型号：mn-20)，其中连续相体100ml，分散相的体积8ml，在7kpa的氮气压力下，挤压分散相通过spg膜，在连续相的剪切力作用下，在spg膜表面形成均一、稳定的水包油液滴。
[0092]
第二组：
[0093]
将0.05mg的cdse/zns量子点和0.5g的苯乙烯-马来酸酐共聚物(psma)溶于8ml甲苯中，形成分散相；
[0094]
将60mg的ag重悬于乙醇中的纳米颗粒分散在100ml的超纯水中，超声分散均匀，形成连续相；
[0095]
将分散相在磁力搅拌下缓慢滴加到连续相中，继续加热并磁力搅拌20-35分钟，使之充分混合均匀，形成pickering乳液。
[0096]
室温下，将所得到的两组乳液分别进行磁力搅拌、过夜，使得溶剂挥发、编码微球固化，对固化后的编码微球用无水乙醇和超纯水分别清洗3遍，得到表面包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球cdse/zns qds/psma@ag颗粒。检测两组荧光编码微球的贵金属纳米壳层包覆情况、粒径、变异系数和lspr峰控制情况，结果如下表：
[0097][0098]
可见采用spg-pickering乳液法制得的荧光编码微球cdse/zns qds/psma@ag nanoshell 更均一稳定，lspr峰可控。
[0099]
目前在聚合物微球表面包覆贵金属纳米壳层的方法主要通过种子生长法、层层自组装法、原位化学还原法、溶剂溶胀共沉积法和pickering乳液聚合法等来实现。本制备方法采用 spg-pickering乳液法，其制备过程简单、表面包覆率高、均一性好以及lspr峰可控，解决了目前常用的贵金属纳米壳层包覆方法中出现的表面包覆率低、均一性差、制备过程复杂以及不可控的lspr峰等问题。
[0100]
实施例2
[0101]
本实施例所制备的包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球(第一组)是cuins2/zns qds/psma@ag nanoshell，其中贵金属纳米材料是ag纳米颗粒，荧光编码材料是cuins2/zns 量子点，聚合物为苯乙烯-马来酸酐共聚物(psma)，同时进行一组无金属纳米壳层，采用十二烷基硫酸钠(sds)作为表面活性剂，从而制备荧光编码微球，作为对照组(第二组)，制备方法为spg-pickering乳液法，具体制备步骤为：
[0102]
共分两组，第一组：
[0103]
将1mg的cuins2/zns量子点和0.5g的苯乙烯-马来酸酐共聚物(psma)溶于8ml甲苯中，形成分散相；
[0104]
将75mg的ag重悬于乙醇中的纳米颗粒(80纳米的粒径)分散在100ml的超纯水中，超声分散均匀，形成连续相；
[0105]
采用规格为φ10xl20mm(有效长度10mm)的spg膜，膜孔径为10μm，利用spg膜乳化装置(购于北京嘉盛兴业科技有限公司，日本进口，型号：mn-20)，其中连续相体积125ml，分散相的体积10ml，在3kpa的氮气压力下，挤压分散相通过spg膜，在连续相的剪切力作用下，在spg膜表面形成均一、稳定的水包油液滴。
[0106]
第二组：
[0107]
将1mg的cuins2/zns量子点和0.5g的苯乙烯-马来酸酐共聚物(psma)溶于8ml甲苯中，形成分散相；
[0108]
将0.5g的十二烷基硫酸钠(sds)溶于100ml的超纯水中，配成质量分数为0.5wt％的sds 溶液作为连续相；
[0109]
采用孔径为10μm的spg膜，在3kpa的氮气压力下，在连续相的剪切力作用下，制备得到水包油乳液。
[0110]
采用规格为φ10xl20mm(有效长度10mm)的spg膜，膜孔径为10μm，利用spg膜乳化装置(日本spg公司生产，型号：mn-20，示意图如图7所示)，其中连续相体积125ml，分散相的
体积10ml，在3kpa的氮气压力下，挤压分散相通过spg膜，在连续相的剪切力作用下，在spg膜表面形成均一、稳定的水包油液滴。
[0111]
室温下，将所得到的两组乳液磁力搅拌、过夜，使得溶剂挥发、编码微球固化，对固化后的荧光编码微球用无水乙醇和超纯水分别清洗3遍，得到两组荧光编码微球。
[0112]
检测两组荧光编码微球的粒径、变异系数和lspr峰控制情况，结果如下表：
[0113][0114][0115]
可见表面贵金属纳米壳层包覆的荧光编码微球cuins2/zns qds/psma@ag nanoshell，更粒径更均一，lspr效应明显，lspr峰可控，可有效提高检测灵敏度。
[0116]
实施例3
[0117]
本实施例所制备的包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球是hps/motas@au nanoshell，其中贵金属纳米材料是ag纳米颗粒，荧光编码材料是1,1,2,3,4,5-六苯基噻咯(hps)，聚合物为苯乙烯-丙烯酸共聚物(motas)，制备方法为spg-pickering乳液法，具体制备步骤为：
[0118]
将0.8mg的hps和0.5g的苯乙烯-丙烯酸共聚物(motas)溶于8ml甲苯中，形成分散相；
[0119]
将100mg的ag重悬于乙醇中的纳米颗粒分散在100ml的超纯水中，超声分散均匀，形成连续相；
[0120]
采用规格为φ10xl20mm(有效长度10mm)的spg膜，膜孔径为3μm，利用spg膜乳化装置(购于北京嘉盛兴业科技有限公司，日本进口，型号：mn-20)，其中连续相体积160ml，分散相的体积10ml，在4kpa的氮气压力下，挤压分散相通过spg膜，在连续相的剪切力作用下，在spg膜表面形成均一、稳定的水包油液滴；
[0121]
室温下，将所得到的乳液磁力搅拌、过夜，使得溶剂挥发、编码微球固化，对固化后的编码微球用无水乙醇和超纯水分别清洗3遍，得到表面包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球 hps/motas@au nanoshell，其表面贵金属纳米壳层包覆均匀，粒径为4.5μm，变异系数cv 为2.85％，均一性好，lspr峰控制在428nm附近。
[0122]
实施例4
[0123]
本实施例所制备的包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球是mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell，其中贵金属纳米材料是ag纳米颗粒，荧光编码材料是mn:znse/zns量子点，聚合物为苯乙烯-马来酸酐共聚物(psma)，制备方法为spg-pickering乳液法，具体制备步骤为：
[0124]
将0.8mg的mn:znse/zns量子点和0.5g的苯乙烯-马来酸酐共聚物(psma)溶于6ml 三氯甲烷中，形成分散相；
[0125]
将60mg的ag重悬于乙醇中的纳米颗粒分散在100ml的超纯水中，超声分散均匀，形
成连续相；
[0126]
采用规格为φ10xl20mm(有效长度10mm)的spg膜，膜孔径为3μm，利用spg膜乳化装置(日本spg公司生产，型号：mn-20，示意图如图7所示)，其中连续相体积125ml，分散相的体积9ml，在4kpa的氮气压力下，挤压分散相通过spg膜，在连续相的剪切力作用下，在spg膜表面形成均一、稳定的水包油液滴；
[0127]
室温下，将所得到的乳液磁力搅拌、过夜，使得溶剂挥发、编码微球固化，对固化后的编码微球用无水乙醇和超纯水分别清洗3遍，得到表面包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球 mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell，其表面贵金属纳米壳层包覆均匀，粒径为4.5μm，变异系数cv为2.84％，均一性好，lspr峰控制在428nm附近。
[0128]
考察荧光编码微球mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell分散在超纯水中，考察其对温度、ph、时间的稳定性，结果如图4所示，随着温度从4℃到80℃变化(实验时间持续2 个月)，荧光编码微球mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell的荧光强度始终维持在0.95～1.0，稳定性非常好。随着ph值从1-13范围内变化时(实验时间持续1个月)，荧光编码微球mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell的荧光强度始终保持稳定，维持在 0.99～1.01；随着放置时间的变化，放置0、10天、20天、30天、40天、50天、60天，分别考察荧光编码微球mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell荧光强度的变化，始终维持在 0.96～1.01范围内，保持相对稳定。颗粒材料稳定性是一个重要的性质，如果在长时间下不稳定，就会形成聚集结团，则不能作为检测材料使用。
[0129]
同时考察荧光编码微球mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell在各种不同的缓冲液中也能始终保持稳定，考察了h2o、mes、pbs、te、tristan、ssc、tmac等多种缓冲液，其荧光强度始终保持稳定，维持在0.95～1.05之间。这说明本发明的微球可以适用于不同的缓冲溶液，应用范围更加广泛。
[0130]
本实施例也同时考察了荧光编码微球mn:znse/zns qds/psma@au nanoshell分散在不同缓冲液中，对温度、ph、时间的稳定性，实验结果证明，稳定性始终保持优良。
[0131]
实施例5
[0132]
图5是本发明所提供的一种包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球用于核酸检测的一个较佳实施例，本应用实施例是将实施例1中的第一组，采用spg乳液法制备的cdse/zns qds/psma@ag nanoshell荧光编码微球作为载体，利用液相芯片检测技术，实现对肺炎支原体dna的定量检测。具体步骤为：
[0133]
将实施例1中制备的cdse/zns qds/psma@ag nanoshell荧光编码微球和巯基化dna包被探针室温振荡孵育2h，在微球表面偶联dna包被探针；
[0134]
在96孔板的孔中加入上述偶联包被探针的cdse/zns qds/psma@ag nanoshell荧光编码微球，然后加入pcr扩增产物以及检测探针，先95℃
×
5min进行变性，然后45℃反应30min，通过磁板分离清洗，除去未反应的目标dna；
[0135]
然后加入链霉亲和素标记的荧光报告分子fitc，室温振荡孵育10min，通过磁板分离清洗，除去过量的fitc；
[0136]
用流式细胞仪读取数据，得到dna的含量。
[0137]
cdse/zns qds/psma@ag nanoshell荧光编码微球作为载体，利用液相芯片检测技术，定量检测肺炎支原体dna含量，检测灵敏度非常高，最低检测1μl样品，dna的最低检出量
为 0.1fmol，灵敏度达99.9％。
[0138]
实施例6
[0139]
图6是本发明所提供的一种包覆金属纳米壳层的荧光编码微球用于蛋白检测的一个较佳实施例。本应用实施例是将实施例2中制备的两组荧光编码微球作为载体，利用液相芯片检测技术，实现对肿瘤标志物癌胚抗原cea的定量检测。具体步骤为：
[0140]
分别将实施例2中制备的两组荧光编码微球表面修饰有氨基-聚乙二醇-羧基，然后通过 edc(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和nhs(n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐) 活化其表面的羧基，在编码微球表面包被cea包被抗体；
[0141]
在96孔板中加入上述包被有cea包被抗体的cuins2/zns qds/psma@ag nanoshell荧光编码微球，然后加入病人血清，室温振荡孵育1h，通过磁板分离清洗，除去血清中未反应的 cea；
[0142]
然后向96孔板中分别加入生物素标记的cea检测抗体，室温振荡孵育1h，通过磁板分离清洗，除去过量的cea检测抗体；
[0143]
加入链霉亲和素标记的荧光报告分子pe，室温振荡孵育10min，通过磁板分离清洗，除去过量的sape；
[0144]
用流式细胞仪读取数据，得到病人血清中cea的含量。
[0145]
比较两组荧光编码微球作为液相芯片检测时的最低检测样品量，最低检出量及检测灵敏度。结果如下表：
[0146][0147][0148]
可见表面包覆有ag纳米壳层的cuins2/zns qds/psma@ag nanoshell荧光编码微球定量检测肿瘤标志物癌胚抗原cea，检测灵敏度非常高，cea的最低检出量为0.001ng/ml，光学稳定性强，灵敏度达99.5％，明显优于无金属纳米壳层的荧光编码微球的检测效果。
[0149]
本发明也包括如下的技术方案：
[0150]
1.一种包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
[0151]
让金属颗粒在两性溶剂中形成悬浮液，形成连续相；
[0152]
将荧光材料、聚合物溶解到的惰性溶剂溶剂中，形成分散相；
[0153]
提供spg膜,所述的spg膜具有第一面和第二面，其中第一面与分散相接触，第二面与连续相接触，在压力作用下，让分散相通过spg膜的第一面流入到spg膜第二面并与连续相接触，在接触的过程中，在连续相的中的金属纳米材料起到表面活性剂作用下，在连续相中形成水包油液滴。
[0154]
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的两性溶剂包括水，甲醇或者乙醇。
[0155]
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的惰性溶剂为苯或者氯仿。
[0156]
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的压力为气体压力。
[0157]
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的spg薄膜具有孔径，其中所述的分散相穿过所述的spg薄膜形成液滴，所述的液滴连续相的剪切力作用下，液滴脱离spg膜的表面，形成水包油乳液。
[0158]
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括让水包油液滴，经室温下磁力搅拌使得液滴中的有机溶剂挥发，从而让贵金属纳米材料均匀包覆在聚合物微球表面而获得包覆贵金属纳米壳层的荧光编码微球。
[0159]
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述金属纳米材料为贵金属纳米材料。
[0160]
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述贵金属纳米材料包括金纳米颗粒、金纳米棒、金纳米双锥、银纳米球、银纳米立方体、金@银核壳纳米颗粒、银@金纳米核壳颗粒、金/银合金纳米颗粒中的一种。
[0161]
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一所述的两性溶剂为乙醇。
[0162]
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚合物包括苯乙烯-马来酸酐共聚物，苯乙烯-丙烯酸共聚物，聚苯乙烯中的一种或多种。
[0163]
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光编码材料包括量子点发光材料或者聚集诱导发光材料。
[0164]
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的量子点荧光材料包括cdse/zns、 cdse/cds、cdtese/zns、cdte/cdse/zns、cdte、ag2s、ag2se、inas、inp、hgte、pbs、pbse、 cuins2、cuinse2、cdsete、cdhgte、inp/zns、inas/cdse、cdte/cds、cdte/zns、cdte/cdse、 znte/cdte、znte/cdse、znte/cds、cdsete/cds、cu:cds/zns、mn:znse/zns、cuins2/zns、 cuinse2/zns、cspbcl3、cspbbr3、cspbi3、cspb(cl/br)3、cspb(br/i)3、ch3nh3pbi3或者ch3nh3pbbr3。
[0165]
13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚集诱导发光材料包括1,1,2,3,4,5-六苯基噻咯(hps)、四苯乙烯(tpe)、9，10-二苯基乙烯基蒽(dsa)、三苯胺、四苯基乙烯
-ꢀ
苝酰亚胺衍生物(pbi-tpe,pbi-2tpe)、三苯胺-富马酸腈化合物(bdabfn)，四苯乙烯-三苯胺衍生物(tpe-tpa-dcm)、四苯乙烯-磺酸盐衍生物(bspotpe)、氰基取代的二芳基乙烯衍生物以及硼系、硅系aie分子及其衍生物中的一种或多种。
[0166]
14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述贵金属纳米材料在两性溶剂中的浓度为0～0.3mg/ml。
[0167]
15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光编码材料在惰性溶剂总的浓度为0～50 mg/ml。
[0168]
16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚合物在油相中的浓度为0～2g/ml。
[0169]
17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的惰性溶剂为甲苯、三氯甲烷、二氯甲烷中的一种。
[0170]
18.一种通过权利要求1-17任一项所述的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球的制备方法获得的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球，其特征在于所述荧光编码微球包括金属纳米壳层、聚合物、荧光编码材料，所述荧光编码微球的粒径为1μm～20μm，变异系数cv＜10％。
[0171]
19.如权利要求18所述的包覆金属纳米壳层的荧光编码微球，其特征在于，所述金属为贵金属。
[0172]
在缺少本文中所具体公开的任何元件、限制的情况下，可以实现本文所示和所述的发明。所采用的术语和表达法被用作说明的术语而非限制，并且不希望在这些术语和表达法的使用中排除所示和所述的特征或其部分的任何等同物，而且应该认识到各种改型在本发明的范围内都是可行的。因此应该理解，尽管通过各种实施例和可选的特征具体公开了本发明，但是本文所述的概念的修改和变型可以被本领域普通技术人员所采用，并且认为这些修改和变型落入所附权利要求书限定的本发明的范围之内。
[0173]
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