一种依降钙素的制备方法与流程

技术特征：
1.一种依降钙素的制备方法，其包括：以树脂为固相合成载体按照依降钙素氨基酸序列中的arg
23
‑
pro
31
、lys10
‑
pro
22
和ser1‑
leu8序列片段分别缩合制备得到依降钙素肽树脂i、ii和iii，然后分别裂解得到依降钙素片段i、ii和iii；其中，依降钙素片段iii继续与h
‑
gly
‑
otbu缩合得到依降钙素肽片段iv，该片段环化得到依降钙素肽片段v，然后裂解得到依降钙素肽片段vi；将依降钙素肽片段i、ii和vi按照依降钙素的氨基酸序列顺序进行缩合得到依降钙素肽片段ix，然后裂解得到依降钙素粗肽，纯化该粗肽即得依降钙素。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，依降钙素肽树脂i的制备方法包括：以氨基树脂为固相合成载体，树脂经溶胀、脱去fmoc保护基和洗涤后，依次从c端至n端缩合fmoc
‑
pro
‑
oh、fmoc
‑
thr(tbu)
‑
oh、fmoc
‑
gly
‑
oh、fmoc
‑
ala
‑
oh、fmoc
‑
gly
‑
oh、fmoc
‑
val
‑
oh、fmoc
‑
asp(otbu)
‑
oh、fmoc
‑
thr(tbu)
‑
oh、fmoc
‑
arg(pbf)
‑
oh，脱去n端fmoc保护基得到依降钙素肽树脂i，其结构为h
‑
arg(pbf)
‑
thr(tbu)
‑
asp(otbu)
‑
val
‑
gly
‑
ala
‑
gly
‑
thr(tbu)
‑
pro
‑
氨基树脂；优选地，裂解依降钙素肽树脂i得到的依降钙素片段i的结构为：h
‑
arg(pbf)
‑
thr(tbu)
‑
asp(otbu)
‑
val
‑
gly
‑
ala
‑
gly
‑
thr(tbu)
‑
pro
‑
nh2。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，依降钙素肽树脂ii的制备方法包括：以fmoc
‑
pro
‑
ctc树脂为固相合成载体，树脂经溶胀、脱去fmoc保护基和洗涤后，依次从c端至n端缩合fmoc
‑
tyr(tbu)
‑
oh、fmoc
‑
thr(tbu)
‑
oh、fmoc
‑
gln(trt)
‑
oh、fmoc
‑
leu
‑
oh、fmoc
‑
lys(boc)
‑
oh、fmoc
‑
his(trt)
‑
oh、fmoc
‑
leu
‑
oh、fmoc
‑
glu(otbu)
‑
oh、fmoc
‑
gln(trt)
‑
oh、fmoc
‑
lys(boc)
‑
oh、fmoc
‑
leu
‑
oh、fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh，得到依降钙素肽树脂ii，其结构为fmoc
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
gln(trt)
‑
glu(otbu)
‑
leu
‑
his(trt)
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
gln(trt)
‑
thr(tbu)
‑
tyr(tbu)
‑
pro
‑
ctc树脂；优选地，裂解依降钙素肽树脂ii得到的依降钙素片段ii的结构为：fmoc
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
gln(trt)
‑
glu(otbu)
‑
leu
‑
his(trt)
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
gln(trt)
‑
thr(tbu)
‑
tyr(tbu)
‑
pro
‑
oh。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，依降钙素肽树脂iii的制备方法包括：以fmoc
‑
leu
‑
ctc树脂为固相合成载体，树脂经溶胀、脱去fmoc保护基和洗涤后，依次从c端至n端缩合fmoc
‑
val
‑
oh、fmoc
‑
asu(obzl)
‑
oh、fmoc
‑
thr(tbu)
‑
oh、fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh、fmoc
‑
leu
‑
oh、fmoc
‑
asn(trt)
‑
oh、fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh，得到依降钙素肽树脂iii，其结构为fmoc
‑
ser(tbu)
‑
asn(trt)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
thr(tbu)
‑
asu(obzl)
‑
val
‑
leu
‑
ctc树脂；优选地，裂解依降钙素肽树脂iii得到的依降钙素片段iii的结构为：fmoc
‑
ser(tbu)
‑
asn(trt)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
thr(tbu)
‑
asu(obzl)
‑
val
‑
leu
‑
oh。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，依降钙素肽片段iv的结构为：fmoc
‑
ser(tbu)
‑
asn(trt)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
thr(tbu)
‑
asu(obzl)
‑
val
‑
leu
‑
gly
‑
otb u；依降钙素肽片段iv环化后得到的依降钙素肽片段v的结构为：cyclo(ser(tbu)
‑
asn(trt)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
thr(tbu)
‑
asu)
‑
val
‑
leu
‑
gly
‑
otbu；该片段裂解后得到依降钙素肽片段vi，其结构为：cyclo(ser
‑
asn
‑
leu
‑
ser
‑
thr
‑
asu)
‑
val
‑
leu
‑
gly
‑
oh。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，依降钙素肽片段ix的制备包括：依降钙素肽片段i和ii缩合制备依降钙素肽片段vii，其结构为fmoc
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
gln(trt)
‑
glu(otbu)
‑
leu
‑
his(trt)
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
gln(trt)
‑
thr(tbu)
‑
tyr(tbu)
‑
pro
‑
arg(pbf)
‑
thr(tbu)
‑
asp(otbu)
‑
val
‑
gly
‑
ala
‑
gly
‑
thr(tbu)
‑
pro
‑
nh2；依降钙素肽片段vii脱除fmoc保护基得到依降钙素肽片段viii，其结构为h
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
ser(tbu)
‑
gln(trt)
‑
glu(otbu)
‑
leu
‑
his(trt)
‑
lys(boc)
‑
leu
‑
gl n(trt)
‑
thr(tbu)
‑
tyr(tbu)
‑
pro
‑
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asp(otbu)
‑
val
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ala
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gly
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thr(tbu)
‑
pro
‑
nh2；依降钙素肽片段vi与依降钙素肽片段viii缩合制备得到依降钙素肽片段ix，其结构为cyclo(ser
‑
asn
‑
leu
‑
ser
‑
thr
‑
asu)
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val
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‑
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asp(otbu)
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val
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‑
gly
‑
thr(tbu)
‑
pro
‑
nh2。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，缩合反应在缩合体系中进行，所述缩合体系为a/d或b/c体系，其中，a为hobt或hoat，b为hatu、hbtu、tbtu或pybop，c为diea或tmp，d为dic或edc。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，裂解时加入裂解液，所述裂解液选自tfa、dcm、tfe、tis、edt、苯甲硫醚和h2o中的至少2种；优选地，所述裂解液选自下列体系：tfa/dcm、dcm/tfe、tfa/tis/h2o、tis/edt/h2o、tfa/tis/edt/h2o和tfa/苯甲硫醚/tis/edt/h2o。9.根据权利要求1中任一项所述的制备方法，其特征在于，环化反应在环化体系中进行，环化体系为a/d体系或b/c体系，其中，a为hobt或hoat，b为hatu、hbtu、tbtu或pybop，c为diea或tmp，d为dic或edc。10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，依降钙素粗肽的纯化方法包括：采用反相高效液相色潽法对依降钙素粗肽进行两步纯化，所述第一步纯化的流动相为：流动相a相为0.1％的tfa/h2o(v/v)溶液，流动相b相为0.1％的tfa/acn(v/v)溶液，第二步纯化为转盐纯化，流动相为：流动相a相为0.1％的醋酸/h2o(v/v)溶液，流动相b相为0.1％的醋酸/acn(v/v)溶液。

技术总结
本发明提供一种依降钙素的制备方法，包括以树脂为固相合成载体按照依降钙素氨基酸序列中的Arg


技术研发人员：姬胜利 刘超 殷金岗 付午杰
受保护的技术使用者：润辉生物技术（威海）有限公司
技术研发日：2021.04.08
技术公布日：2021/10/18