用于检测松材线虫的crRNA及试剂盒的制作方法

技术特征：
1.用于检测松材线虫的crrna，其特征在于，包含a)向导序列为seq id no:1~2中的至少一种，其能够杂交至靶rna序列，和b)与cas核酸酶相互作用的框架核酸片段。2.根据权利要求1所述的crrna，其特征在于，所述向导序列为seq id no:2。3.用于检测松材线虫的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1~2任一项所述的crrna或可转录为所述crrna的dna；还包含cas核酸酶、信号报告分子、阳性对照和用于crispr检测体系的缓冲液中的至少一种。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述可转录为所述crrna的dna选自seq id no:10~11中的至少一种。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，cas核酸酶选自cas13；所述与cas核酸酶相互作用的框架核酸片段如seq id no:4所示。6.根据权利要求3~5任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述信号报告分子为信号报告rna分子，所述信号报告rna分子为具有信号报告功能的rna分子，当其中的rna序列被降解时，可报告阳性信号并被检测到。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，包括试纸条，所述试纸条用以与所述信号报告rna分子作用并显示所述信号报告rna分子的信号结果。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述信号报告rna分子的两端分别标记有第一标记物和第二标记物，如此，当所述信号报告rna分子被crispr检测体系切割时，所述第一标记物与所述第二标记物分离；所述试剂盒还包含试剂条，所述试纸条包括样品垫、反应膜和吸收垫，所述反应膜上设置有检测区和质检区；其中：所述检测区固定包被信号物质，所述信号物质上标记有针对所述第一标记物的第一抗标记物；所述质检区固定包被有针对所述第二标记物的抗体；所述第一标记物与所述第一抗标记物能够形成标记物
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抗标记物复合物，且所述第一抗标记物与所述第二标记物的抗体不同。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述信号物质选自荧光团、比色标记、量子点、胶体金、生物素、用于拉曼衍射成像的炔烃基团、用于click反应的环烯烃、用于聚合物标记的引发基团、多肽/蛋白分子、lna/pna、非天然氨基酸及其类似物、非天然核酸及其类似物和纳米结构中的至少一种；所述纳米结构包括无机纳米颗粒、nv
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center、聚集/组装诱导发光分子、稀土离子配体分子以及多金属氧簇。10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包含rna聚合酶、扩增引物、dna聚合酶、扩增缓冲液、样品预处理试剂和水中的至少一种；其中所述扩增引物用于扩增含有所述crrna靶向序列的核酸片段。

技术总结
本发明公开了一种用于检测松材线虫的crRNA，包含a)向导序列例如SEQ ID NO:1~2中的至少一种，其能够杂交至靶RNA序列，和b)与Cas核酸酶相互作用的框架核酸片段。本发明还公开了一种用于检测松材线虫的试剂盒，包含所述的crRNA或可转录为所述crRNA的DNA。crRNA或可转录为所述crRNA的DNA。crRNA或可转录为所述crRNA的DNA。


技术研发人员：王永林 唐晨 武瑾 尹康权 李学武 宗世祥
受保护的技术使用者：北京林业大学
技术研发日：2021.09.15
技术公布日：2021/10/18