一株永暑礁泻湖威尼斯不动杆菌AVYS1及其降解高浓度柴油的应用的制作方法

一株永暑礁泻湖威尼斯不动杆菌avys1及其降解高浓度柴油的应用
技术领域
1.本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株永暑礁泻湖威尼斯不动杆菌 avys1及其降解高浓度柴油的应用。


背景技术：

2.南海(south china sea)作为我国面积最大、岛屿最多、最接近赤道的海域， 不仅蕴藏着丰富的微生物资源，而且具有重要的战略地位。南海具有水温高、贫 营养和浮游生物占主导地位等特点(张喆等，2016)，南海微生物资源丰富，是 促进南海海洋生态系统物质循环和能量流动的重要因素。南海岛礁作为南海的海 上陆地，针对南海岛礁的相关研究具有重要的战略意义。目前南海微生物资源挖 掘多聚焦于从南海海水(常保轩，2018)、沉积物(杨睿，2019)，深海和冷泉(王 蕾等，2019；刘施琪，2019)的特殊生境，以及珊瑚和海绵(方倩云，2019；柴 光俊等，2016)等共附生环境中评估微生物群落组成与功能基因多样性，挖掘具 有特定生物活性的次级代谢产物。而有关南海岛礁海域的可培养功能微生物资源 的挖掘与利用的研究相对较少。有研究表明通过寡营养培养，南海岛礁海域水体 可培养菌群对碳源的代谢活性显著增加(庄康等，2020)。
3.生物修复法是目前处理海洋油类污染的重要方法之一，它是指利用海洋植物、 海洋动物和微生物等生物的降解作用，将油类污染物降解二氧化碳和水或其他无 污染物的修复技术(郑天凌等，2001)。其中，微生物是油类污染物降解过程中 的重要角色，它们以油类作为碳源进行降解利用(swannell et al.,1996)，在降解 过程中起决定性作用。已报道的海洋油类降解菌包括：食烷菌属(alcanivorax)、 假单胞菌属(pseudomonas)、黄杆菌属(flavobacterium)、微杆菌属 (microbacterium)、放线菌属(actinomyetes)、节杆菌属(archrobactar)、诺卡 氏菌属(nocardia)、产碱杆菌属(alcaligenes)、不动杆菌属(acinetobacter)、 红球菌属(rhodococcus)、芽孢杆菌属(bacillus)、弧菌属(vibrio)、盐单胞菌 属(halomonas)、分枝杆菌属(mycobacterium)等(whyte et al.,1997；张珍明 等，2010)。
4.不动杆菌属(acinetobacter)是海洋环境中降解油类的重要细菌之一(hou etal.,2013，sun et al.,2014)。孙国华等(2010)分离的一株acinetobacter属细菌， 72h可将柴油浓度从3.75mg/l降至1.51mg/l。周常义等(2009)分离的一株 acinetobacter属细菌，以浓度100～500mg/l的柴油作为唯一碳源进行培养，第 3天的降解率为38.70％～57.20％。王世杰等(2011)评测的acinetobacter属细 菌在初始浓度1000mg/l的柴油培养基中，10天后的柴油降解率为58.6％。任 芝军等(zl201510632607.6)从活性污泥中富集得到的石油烃类降解菌 acinetobacter sp.b11，7天内其对1000mg/l的含油废水降解率为61.5％。
5.南海岛礁作为南海的海上陆地，船只行驶经过频繁，水体受到油类污染的潜 在风险较大。为挖掘南海岛礁海域的可培养微生物资源，以柴油作为唯一的碳源， 从南海永暑
礁泻湖浮游微藻藻际微生物群落中筛选可高效降解高浓度柴油的土 著菌株，并明确其环境适应性和柴油降解效果，可为南海岛礁海域环境的生态保 护提供土著的微生物净化菌种资源，具有重要的环保价值和战略意义。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一株永暑礁泻湖威尼斯不动杆菌(acinetobactervenetianus)avys1，该菌株对高浓度的柴油(初始油浓度在6500mg/l以上) 具有良好的降解效果，且环境适应性良好。
7.本发明的目的还在于提供上述威尼斯不动杆菌avys1在降解高浓度柴油方 面的应用。
8.本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一株永暑礁泻湖威 尼斯不动杆菌(acinetobacter venetianus)avys1，该菌株的保藏编号为gdmccno：61368，保藏日期为2020年12月16日，保藏单位为广东省微生物菌种保 藏中心，保藏地址为中国广州。
9.该威尼斯不动杆菌(acinetobacter venetianus)avys1分离自永暑礁泻湖浮 游微藻藻际微生物群落。
10.进一步的，本发明中的威尼斯不动杆菌(acinetobacter venetianus)avys1 通过以下方法获得：从南海永暑礁泻湖采集海水样品，水样使用聚碳酸酯膜(孔 径0.22μm)过滤浮游微藻及其藻际微生物，滤膜放入装有海洋细菌保种液的无 菌离心管，
‑
20℃冷冻保存后备用。将滤膜放入复壮培养液中，于光照强度2500～ 3000lx，温度30～35℃，转速150～200rpm条件下振荡培养5～7d。再取培养 液5ml转接至加有1％柴油的筛选培养液中，在温度30～35℃，转速150～200 rpm条件下振荡培养5～7d。而后按照上述条件转接富集3次，柴油添加量依次 为2％，3％，4％。取已富集的菌液，梯度稀释后，涂布于筛选固体培养基上， 在温度30～35℃，培养5～7d，获得菌株的单菌落。再将富集分离获得的菌株 转接入添加1％已过滤除菌柴油的筛选培养液中，温度30～35℃，转速150～200 rpm条件下振荡培养7d，分别在第0d、3d、7d测定柴油浓度，计算降解率。 根据分离菌株对柴油的降解效果，筛选得到对柴油具有较好降解效果的菌株 avys1。进一步评估了菌株avys1对市售0#机动车用柴油、船用柴油的降解 效果。
11.本发明的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：上述威尼斯不动杆 菌(acinetobacter venetianus)avys1在降解高浓度柴油方面的应用。
12.其中高浓度柴油的初始柴油浓度在6500mg/l以上。
13.优选的，所述高浓度柴油的初始柴油浓度在6500～8000mg/l。
14.本发明中威尼斯不动杆菌avys1的培养条件为：菌株在盐度10～40、ph 6～ 10、温度10～40℃、初始菌浓度104～107cfu/ml均可正常生长，最优生长条件 为盐度10～40、ph 6～10、温度20～30℃、初始菌浓度104～107cfu/ml。在筛 选培养液中培养16h菌量达到108cfu/ml数量水平，24h～168h菌量稳定在 (2.45～5.30)
×
108cfu/ml。该菌株生长状况良好。
15.当初始ph为8时，菌株avys1的降解效果最好，船用柴油浓度从7389.02 mg/l降至494.63mg/l，与对照相比，第7d的平均降解率为91.11％～93.30％， 菌量为(2.25～3.00)
×
108cfu/ml，显著高于初始ph为4、6、10的降解效果和 菌量(p<0.05)。当初始ph为4、6、10时，与对照相比，菌株avys1第7d 对柴油的平均降解率分别为10.68％～12.19％、46.85％～55.36％和57.73％～ 59.58％。
16.当水体盐度为20～40时，与对照相比，菌株avys1第7d对柴油的降解率 在84.80％～96.00％之间，尤其是盐度30～40时，其降解率超过90％，最高可达 96％。柴油浓度从6736.75～6940.09mg/l降至300.34～804.49mg/l，菌量为 (2.05～3.45)
×
108cfu/ml；而当盐度为10时，菌株avys1的降解效果较差， 柴油浓度从6931.19mg/l降至2746.88mg/l，与对照相比，第7d的平均降解率 为52.71％～66.30％，菌量为(1.85～2.25)
×
108cfu/ml。
17.当水温为20～30℃时，与对照相比，菌株avys1第7d对柴油的降解率在 88.86％～95.47％之间。柴油浓度从7450.66～7638.71mg/l降至332.26～654.47 mg/l，菌量为(2.15～3.60)
×
108cfu/ml；而当温度10℃和40℃时，菌株avys1 的降解效果较差，柴油浓度从7348.20～7544.79mg/l降至5052.72～6446.48 mg/l，与对照相比，第7d的平均降解率为1.58％～32.78％，菌量为(2.55～32.5)
ꢀ×
107cfu/ml。
18.当初始菌浓度为104～107cfu/ml时，菌体avys1对柴油的降解效果及生长 效果均较好，第7d降解率均在94.73％～97.11％之间，无显著性差异(p>0.05)。 与对照相比，柴油浓度从6585.51～7012.49mg/l降至251.60～280.94mg/l，菌 量为(2.45～3.30)
×
108cfu/ml。
19.综上所述，威尼斯不动杆菌avys1在初始ph为8，盐度30～40，温度20～ 30℃，初始菌浓度104～107cfu/ml的条件下，菌株avys1对高浓度柴油(初 始柴油浓度在6500～8000mg/l)均有良好的降解效果。柴油浓度可从7638.71 mg/l降至332.26mg/l，与对照相比，7d的降解率最高可达97.11％。
20.与现有技术相比，本发明具有如下优点：
21.(1)本发明中的威尼斯不动杆菌avys1对高浓度船用柴油具有显著的降解 效果，柴油浓度可从7638.71mg/l降至332.26mg/l，与对照相比，7d的降解率 最高可达97.11％，该菌株在可降解的初始柴油浓度、降解量和降解率方面优于 其他菌株；
22.(2)本发明中的威尼斯不动杆菌avys1来自于永暑礁泻湖浮游微藻藻际微 生物群落，具有良好的环境适应性，适宜于我国海域尤其是南海海域；同时，南 海可培养微生物资源的挖掘具有重要的战略意义。
附图说明
23.图1是实施例3中菌株avys1在筛选培养液中的生长曲线；
24.图2是实施例3中不同初始ph条件下第3d、7d菌株avys1对柴油的降 解率；
25.图3是实施例3中不同初始ph条件下第0d、3d、7d的柴油浓度变化；
26.图4是实施例3中不同初始ph条件下第0d、3d、7d菌株avys1的菌量 变化；
27.图5是实施例3中不同盐度条件下第3d、7d菌株avys1对柴油的降解率；
28.图6是实施例3中不同盐度条件下第0d、3d、7d的柴油浓度变化；
29.图7是实施例3中不同盐度条件下第0d、3d、7d菌株avys1的菌量变化；
30.图8是实施例3中不同温度条件下第3d、7d菌株avys1对柴油的降解率；
31.图9是实施例3中不同温度条件下第0d、3d、7d的柴油浓度；
32.图10是实施例3中不同温度条件下第0d、3d、7d菌株avys1的菌量变 化；
33.图11是实施例3中不同初始菌浓度条件下第3d、7d菌株avys1对柴油 的降解率；
34.图12是实施例3中不同初始菌浓度条件下第0d、3d、7d的柴油浓度；
35.图13是实施例3中不同初始菌浓度条件下第0d、3d、7d菌株avys1的 菌量变化。
具体实施方式
36.下面结合具体实施例进一步说明本发明的应用方法。下述实施例和附图仅用 于示例性说明，不能理解为对本发明的限制。除非特别说明，下述实施例中使用 的试剂原料为常规市购或商业途径获得的生化试剂原料，使用的实验仪器均为实 验室常规仪器，除非特别说明，下述实施例中使用的方法和设备为本领域常规使 用的方法和设备。
37.实施例1海洋柴油降解菌的富集筛选
38.1、材料准备
39.1.1样品采集
40.从南海永暑礁泻湖采集海水样品。水样使用聚碳酸酯膜(孔径0.22μm)过 滤浮游微藻及其藻际微生物，滤膜放入装有海洋细菌保种液的无菌离心管，
‑
20℃ 冷冻保存后备用。
41.1.2培养基
42.(1)复壮培养液：nacl 24g，mgso4·
7h2o 7g，nh4no
3 1g，kcl 0.7g， kh2po
4 2g，na2hpo
4 3g，蒸馏水1000ml，ph 7.6～7.8，121℃，20min。灭 菌后加入5ml/l的无菌微量元素混合液。
43.微量元素混合液：cacl
2 2mg，fecl3·
6h2o 50mg，cuso
4 0.5mg，mncl2·
4h2o 0.5mg，znso4·
7h2o 10mg，蒸馏水1000ml。
44.(2)筛选培养液：在复壮培养液中，加入经0.22μm滤膜过滤除菌的柴油。
45.(3)筛选固体培养基：在复壮培养液中，添加1.5％～2％琼脂，ph 7.6～7.8； 121℃下灭菌20min，制备固体平板培养基，平板表面均匀涂抹200μl柴油。
46.(4)2216e培养液：1l陈海水，5g蛋白胨，1g酵母膏，0.01g磷酸铁， ph 7.6～7.8，121℃下灭菌15min。
47.2、菌株的富集与筛选
48.2.1藻际微生物群落的复壮培养
49.选取南海永暑礁泻湖海域采集的浮游微藻藻际微生物群落的滤膜样品，放入 100ml复壮培养液中，光照强度设置为2500～3000lx，温度30～35℃，转速 150～200rpm条件下振荡培养5～7d。
50.2.2柴油降解菌的富集
51.取5ml培养液转接至加有1％柴油的筛选培养液中，在温度30～35℃，转 速150～200rpm条件下振荡培养5～7d。而后按照上述条件转接富集3次，柴 油添加量依次为2％，3％，4％。
52.2.3柴油降解菌的分离
53.取已富集的菌液，进行梯度稀释，选择合适的稀释液，吸取100μl涂布于筛 选固体培养基上，在温度30～35℃，培养5～7d，分离获得潜在菌株的单菌落。
54.2.4柴油降解菌的筛选
55.将富集分离获得的菌株接种于100ml 2216e培养液中，温度30～35℃，转 速150～200rpm条件下振荡培养1～3d，制备种子液。取3ml种子液转接入 100ml添加1％已过滤除菌柴油的筛选培养液中，对照组不接菌，温度30～35℃， 转速150～200rpm条件下振荡培养7d，分别在第0d、3d、7d测定柴油浓度， 计算降解率。根据分离菌株对柴油的降解效果，筛选得到对柴油具有较好降解效 果的菌株avys1。
56.2.5对两种柴油的降解效果
57.分别选用市售0#机动车用柴油、船用柴油作为唯一碳源，测试菌株avys1 对这两种柴油的降解效果。结果表明，到第7d，菌株avys1对市售0#机动车 用柴油和船用柴油的降解率分别为89％和92％，效果均优于其他菌株。后续进 一步使用船用柴油作为测试材料，评估菌株的柴油降解效果。
58.实施例2菌株avys1的鉴定
59.本发明对实施例1的菌株avys1进行了16s rdna分子鉴定，从分子水平， 并结合细菌形态特征及生理生化特性分析确定菌株的种属。16s rdna序列分析 主要按照以下步骤：
60.1、细菌基因组dna的提取
61.(1)将已纯化的菌株接种至100ml 2216e培养液中，置于恒温振荡箱， 30℃，180r/min，培养1～2d；
62.(2)取细菌培养液10ml，10000rpm(11500
×
g)离心1分钟，尽量吸净上 清；
63.(3)向菌体沉淀中加入200μl缓冲液ga，振荡至菌体彻底悬浮；
64.(4)向管中加入20μl蛋白酶k溶液，混匀；
65.(5)加入220μl缓冲液gb，振荡15秒，70℃放置10分钟，溶液变清亮，简 短离心以去除管盖内壁的水珠；
66.(6)加220μl无水乙醇，充分振荡混匀15秒，简短离心以去除管盖内壁的 水珠；
67.(7)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱cb3中(吸附柱放入 收集管中)，12000rpm(13400
×
g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱cb3放入 收集管中；
68.(8)向吸附柱cb3中加入500μl缓冲液gd，12000rpm(13400
×
g)离心30 秒，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；
69.(9)向吸附柱cb3中加入700μl漂洗液pw，12000rpm(13400
×
g)离心30 秒，倒掉废液，吸附柱cb3放入收集管中；
70.(10)向吸附柱cb3中加入500μl漂洗液pw，12000rpm(13400
×
g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；
71.(11)将吸附柱cb3放回收集管中，12000rpm(13400
×
g)离心2分钟，倒 掉废液。将吸附柱cb3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗 液；
72.(12)将吸附柱cb3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴 加50～200μl洗脱缓冲液te，室温放置2～5分钟，12000rpm(13400
×
g)离心2 分钟，将溶液收集到离心管中；
73.(13)回收的dna片段用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯 度。
74.2、16s rdna基因的pcr扩增
75.16s rdna的扩增所采用的细菌通用引物由生工生物工程(上海)股份有限 公司合
成，正向引物(8f)为：5
’‑
agagtttgatcctggctcag
‑3’
；反向引物 (1492r)为：5
’‑
ggttaccttgttacgactt
‑3’
。
76.50μl pcr反应体系包括：灭菌双蒸水37μl，引物各1μl，dntps(2.5mmol/l) 4μl，tap酶1μl，10
×
pcr buffer 5μl，dna模板1μl。
77.pcr反应条件：95℃3分钟；95℃1分钟，48℃1分钟，72℃2分钟，共30 个循环；72℃10分钟。
78.3、16s rdna序列测定
79.扩增的pcr产物用1.0％琼脂糖凝胶电泳检测，送生工生物工程(上海)股 份有限公司测序，测得其序列如seq id no：1所示，具体如下： aagtcggtcctccttgcggttagactacctacttctggtgcaacaaactcc catggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcgg cattctgatccgcgattactagcgattccgacttcatggagtcgagttgcag actccaatccggactacgatcggctttttgagattagcatcctatcgctagg tagcaaccctttgtaccgaccattgtagcacgtgtgtagccctggccgtaa gggccatgatgacttgacgtcgtccccgccttcctccagtttgtcactggc agtatccttaaagttcccatccgaaatgctggcaagtaaggaaaagggttg cgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacag ccatgcagcacctgtatctagattcccgaaggcaccaatccatctctggaa agtttctagtatgtcaaggccaggtaaggttcttcgcgttgcatcgaattaa accacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcatttgagttttag tcttgcgaccgtactccccaggcggtctacttatcgcgttagctgcgccact aaagcctcaaaggccccaacggctagtagacatcgtttacggcatggacta ccagggtatctaatcctgtttgctccccatgctttcgtacctcagcgtcagt attaggccagatggctgccttcgccatcggtattcctccagatctctacgca tttcaccgctacacctggaattctaccatcctctcccatactctagccatcc agtatcgaatgcaattcccaagttaagctcggggatttcacatttgacttaa atggccgcctacgcacgctttacgcccagtaaatccgattaacgctcgcac cctctgtattaccgcggctgctggcacagagttagccggtgcttattctgcg agtaacgtccactatccagtagtattaatactagtagcctcctcctcgctta aagtgctttacaaccataaggccttcttcacacacgcggcatggctggatc agggttccccccattgtccaatattccccactgctgcctcccgtaggagtct gggccgtgtctcagtcccagtgtggcggatcatcctctcagacccgctaca gatcgtcgccttggtaggcctttaccccaccaactagctaatccgacttagg ctcatctattagcgcaaggcccgaaggtcccctgctttctcccgtaggacgt atgcggtattagcattcctttcggaatgttgtcccccactaataggcagatt cctaagcattactcacccgtccgccgctaggtccagtagcaagctac。
80.4、菌株avys1的菌落形态、生理特征
81.菌株avys1菌落形态、生理特征见下表1。
82.表1菌株avys1菌落形态、生理特征
[0083][0084]
5、菌株avys1的鉴定
[0085]
将该菌16s rdna基因序列与genbank中已登录的基因序列进行比对分析， 结果显示该菌株为威尼斯不动杆菌avys1(acinetobacter venetianus)。综合16srdna基因序列分析、生化鉴定，以及形态特征等各项结果，认定菌株avys1 为威尼斯不动杆菌(acinetobacter venetianus)。查阅有关资料，尚无以威尼斯不 动杆菌avys1(acinetobacter venetianus)高效降解高浓度柴油(初始柴油浓度 在6500mg/l以上)的研究报道。该菌株已于2020年12月16日保藏于广东省 微生物菌种保藏中心，保藏号：gdmcc 61368，保藏地址：广东省广州市先烈 中路100号大院59号楼5楼广东省微生物菌种保藏中心。
[0086]
实施例3菌株avys1对高浓度船用柴油的降解效果
[0087]
1、菌株的生长
[0088]
将实施例1获得的菌株avys1接种至筛选培养液中，培养16h菌量达到10
8 cfu/ml数量水平，24h后菌量稳定在(2.45～5.30)
×
108cfu/ml，菌株avys1 的生长曲线如图1所示。
[0089]
2、菌株在不同初始ph条件下对高浓度柴油的降解效果
[0090]
将灭菌后添加1％(v/v)经0.22μm滤膜过滤除菌柴油的筛选培养液(水体 盐度30，ph为8)作为测试水体对照，不添加威尼斯不动杆菌avys1。加菌组 则将实施例1中获得的威尼斯不动杆菌avys1按107cfu/ml的浓度接种至不同 ph的测试水体中。ph分别设置为4、6、8、10，于150～200rpm、30℃振荡培 养7d，分别在第0d、3d、7d测定柴油浓度，计算降解率。
[0091]
结果如图2～4所示，结果显示，当初始ph为8时，菌株avys1的降解效 果最好，柴油浓度从7389.02mg/l降至494.63mg/l，与对照相比，第7d的平 均降解率为91.11％～93.30％，菌量为(2.25～3.00)
×
108cfu/ml，显著高于初始 ph为4、6、10的降解效果和菌量(p<0.05)。当初始ph为4、6、10时，与对 照相比，菌株avys1第7d对柴油的平均降解率分别为10.68％～12.19％、 46.85％～55.36％和57.73％～59.58％。
[0092]
3、菌株在不同初始盐度条件下对高浓度柴油的降解效果
[0093]
将灭菌后添加1％(v/v)经0.22μm滤膜过滤除菌柴油的筛选培养液(水体 盐度30，ph为8)作为测试水体对照，不添加威尼斯不动杆菌avys1。加菌组 则将实施例1中获得的威尼斯不动杆菌avys1按107cfu/ml的浓度接种至不同 盐度的测试水体中。盐度分别设置为
10、20、30、40，于150～200rpm、30℃ 振荡培养7d，分别在第0d、3d、7d测定柴油浓度，计算降解率。
[0094]
结果如图5～7所示，结果显示，当水体盐度为20～40时，与对照相比，菌 株avys1第7d对柴油的降解率在84.80％～96.00％之间，尤其是盐度30～40 时，其降解率超过90％，最高可达96％。柴油浓度从6736.75～6940.09mg/l降 至300.34～804.49mg/l，菌量为(2.05～3.45)
×
108cfu/ml；而当盐度为10时， 菌株avys1的降解效果较差，柴油浓度从6931.19mg/l降至2746.88mg/l，与 对照相比，第7d的平均降解率为52.71％～66.30％，菌量为(1.85～2.25)
×
10
8 cfu/ml。
[0095]
4、菌株在不同初始温度条件下对高浓度柴油的降解效果
[0096]
将灭菌后添加1％(v/v)经0.22μm滤膜过滤除菌柴油的筛选培养液(水体 盐度30，ph为8)作为测试水体对照，不添加威尼斯不动杆菌avys1。加菌组 则将实施例1中获得的威尼斯不动杆菌avys1按107cfu/ml的浓度接种至测试 水体中。分别设置不同温度梯度，具体为10℃、20℃、30℃、40℃，于150～200 rpm振荡培养7d，分别在第0d、3d、7d测定柴油浓度，计算降解率。
[0097]
结果如图8～10所示，结果显示，当水温为20～30℃时，与对照相比，菌 株avys1第7d对柴油的降解率在88.86％～95.47％之间。柴油浓度从7450.66～ 7638.71mg/l降至332.26～654.47mg/l，菌量为(2.15～3.60)
×
108cfu/ml；而 当温度10℃和40℃时，菌株avys1的降解效果较差，柴油浓度从7348.20～ 7544.79mg/l降至5052.72～6446.48mg/l，与对照相比，第7d的平均降解率为 1.58％～32.78％，菌量为(2.55～32.5)
×
107cfu/ml。
[0098]
5、菌株在不同初始菌浓度条件下对高浓度柴油的降解效果
[0099]
将灭菌后添加1％(v/v)经0.22μm滤膜过滤除菌柴油的筛选培养液(水体 盐度30，ph为8)作为测试水体对照，不添加威尼斯不动杆菌avys1。加菌组 则将实施例1中获得的威尼斯不动杆菌avys1分别按104cfu/ml、105cfu/ml、 106cfu/ml、107cfu/ml的浓度接种至测试水体中。于150～200rpm、30℃振荡 培养7d，分别在第0d、3d、7d测定柴油浓度，计算降解率。
[0100]
结果如图11
‑
13所示，结果显示，当初始菌浓度为104～107cfu/ml时，菌株 avys1对柴油的降解效果及生长效果均较好，第7d降解率均在94.73％～97.11％ 之间，无显著性差异(p>0.05)。与对照相比，柴油浓度从6585.51～7012.49mg/l 降至251.60～280.94mg/l，菌量为(2.45～3.30)
×
108cfu/ml。
[0101]
综上，在初始ph为8，盐度30～40，温度30℃，初始菌浓度104cfu/ml～ 107cfu/ml的条件下，菌株avys1对高浓度柴油(初始柴油浓度在6500～8000 mg/l)具有良好的降解效果，7d的降解率超过90％，最高可达97.11％。
[0102]
本发明不局限于上述特定的实施方案范围内，上述实施方案仅仅是为了能够 对本发明的使用过程进行详细地说明，而且有相等功能的生产方法和技术细节也 属于本发明内容的一部分。事实上，本领域技术人员根据前文的描述，就能够根 据各自需要找到不同的调整方案，这些调整都应在本文所附的权利要求书的范围 内。