用于处理棉的方法与流程

galactanivorans)、嗜石油栖热袍菌(thermotoga petrophila)或木霉属(trichoderma sp)微生物，优选地类芽孢杆菌属或食半乳聚糖卓贝尔氏黄杆菌，最优选地类芽孢杆菌属。
11.本发明还涉及内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶或如上所述的方法用于从棉中去除胼胝质的用途。本发明还涉及内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶或如上所述的方法用于制造含棉织物的用途，所述含棉织物具有改善的白度保持性、改善的拒垢性、减少的恶臭、抗皱有益效果、和/或改善的干燥效果。如本文所用，“去除”意指部分或完全去除。
具体实施方式
12.定义
13.亲本或亲本内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶：术语“亲本”或“亲本内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶”是指对其进行改变以产生酶变体的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶。亲本可为天然存在的(野生型)多肽或其变体。例如，亲本可为本文列出的seq id no:1、2、3、4、5、6或7中的任一者。
14.序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。就本发明的目的而言，两个氨基酸序列之间的序列同一性程度使用needleman
‑
wunsch算法(needleman和wunsch，1970，j.mol.biol.第48卷：第443
‑
453页)确定，如在emboss程序包的needle程序中实现(emboss：the european molecular biology open software suite(欧洲分子生物学开放软件套件)，rice等人，2000年，trends genet.16:276
‑
277)，优选3.0.0版或更新版。所用的任选参数是10的空位罚分、0.5的空位延伸罚分和eblosum62(emboss版的blosum62)取代矩阵。使用标记为“最长同一性”的needle输出(使用
‑
nobrief选项获得)作为百分比同一性，并且如下计算：
15.(相同残基
×
100)/(序列长度
‑
序列中的总空位数)
16.另选地，所用的参数可以是10的空位罚分，0.5的空位延伸罚分，和ednafull(emboss版的ncbi nuc4.4)取代矩阵。使用标记为“最长同一性”的needle输出(使用
‑
nobrief选项获得)作为百分比同一性，并且如下计算：
17.(相同脱氧核糖核苷酸
×
100)/(序列长度
‑
序列中的总空位数)
18.变体：术语“变体”是指具有内切
‑
β
‑
1，3
‑
葡聚糖酶活性的多肽，该多肽在相对于亲本内切
‑
β
‑
1，3
‑
葡聚糖酶的一个或多个(例如若干个)位置处包含改变/突变，即置换、插入和/或缺失。置换是指占据某一位置的氨基酸被另一不同的氨基酸替换；缺失是指占据某一位置的氨基酸的移除；而插入是指邻近占据某一位置的氨基酸并紧接在该氨基酸之后添加1至3个氨基酸。
19.野生型酶：术语“野生型”内切
‑
β
‑
1，3
‑
葡聚糖酶是指由天然存在的微生物(诸如存在于自然界中的细菌、酵母或丝状真菌)表达的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶。
20.内切
‑
β
‑
1，3
‑
葡聚糖酶
21.内切
‑
β
‑
1，3
‑
葡聚糖酶是对β
‑
1,3
‑
葡聚糖中的β
‑
1,3葡糖苷键具有活性，此外优选地对具有1,3
‑
葡聚糖键和1,4
‑
β
‑
葡聚糖键两者的混合键葡聚糖中的β
‑
1,3葡糖苷键具有弱活性/无活性的酶。因此，本文的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶不包括内切
‑
1,3
‑
1,4
‑
β
‑
d葡聚糖
‑4‑
葡聚糖水解酶(地衣多糖酶)(e.c.类别3.2.1.73)或内切
‑
β
‑
1,3(4)
‑
葡聚糖酶(e.c.类别3.2.1.6)。优选地，该内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶来自e.c.类别3.2.1.39。内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶的活性可通过其对茯苓聚糖、凝胶多糖、胼胝质、裂褶菌多糖和/或小核菌葡聚糖的活性来
确认。优选地，本文的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶对茯苓聚糖、羧甲基凝胶多糖、胼胝质、裂褶菌多糖和/或小核菌葡聚糖中的一者或多者将具有大于或等于根据seq id no:7的等量的活性蛋白所表现的活性的活性。优选地，本文的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶对羧甲基凝胶多糖例如p
‑
cmcur(购自megazyme international，bray，ireland)将具有大于或等于根据seq id no:7的等量的活性蛋白所表现的活性的活性(30℃，ph 8.0或清洁组合物的ph下)。优选地，本文的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶对大麦β
‑
葡聚糖(例如购自megazyme international,bray,ireland的p
‑
bgbm)将具有等同于或小于根据seq id no:7的等量的活性蛋白质所表现的活性的活性(在30℃，ph 8.0或清洁组合物的ph下)。
22.用于本发明的具有内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶活性的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶优选地为微生物源的、优选地为细菌或真菌(例如木霉属)源的、最优选地为细菌源的。优选地，内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶可得自类芽孢杆菌属、食半乳聚糖卓贝尔氏黄杆菌、嗜石油栖热袍菌微生物，优选地类芽孢杆菌属或食半乳聚糖卓贝尔氏黄杆菌、最优选地类芽孢杆菌属。优选地，内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶来自糖基水解酶(gh)家族16或64，优选地为gh家族16。优选地，内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶具有碳水化合物结合模块cbm 6或cbm 56。
23.优选地，内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶与本文列出的seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6或seq id no:7中的一者或多者具有至少50％的同一性、或至少60％、或至少70％、或至少75％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％的序列同一性。因此，优选的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶对应于本文列出的seq id no:1、2、3、4、5、6或7中的任何一者的野生型或为该野生型的变体。
24.当内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶为亲本氨基酸序列的变体时，具有内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶活性的亲本内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶优选地与seq id no:1、2、3、4、5、6或7中的一者或多者的多肽具有至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％，诸如至少85％、至少90％，例如至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。可优选的是，变体氨基酸序列与亲本内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶相差不超过十个氨基酸、或与seq id no:1、2、3、4、5、6或7中的一者或多者的多肽相差不超过五个氨基酸、不超过四个氨基酸、不超过三个氨基酸、不超过两个氨基酸、以及不超过一个氨基酸。
25.亲本可得自任何属的微生物。出于本发明的目的，如本文所用，与给定来源相关的术语“得自”将指由多核苷酸编码的亲本由该来源或者由来自该来源的多核苷酸已被插入至其中的细胞产生。在一个方面，亲本被分泌到细胞外。变体可使用本领域中已知的任何诱变过程来制备，例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。
26.内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶可以基本上为纯酶的形式掺入本发明中。另选地，具体地当酶为野生型酶的变体时，该变体不可重复利用，而是将表达酶的宿主细胞用作内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶的来源。
27.内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶可以干燥或固体组合物的形式掺入。例如，可将其以颗粒或微粒形式加入水中以形成水性洗涤液体。内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶可根据本领域已知的方法进行稳定。
28.内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶优选地以1ppb至100ppm、优选地10ppb至50ppm、或0.01ppm至30ppm、或0.1ppm至25ppm的量存在于水性洗涤液体中。
29.本发明人已发现，所述酶提供良好的污垢分解，然而底物和包含它们的污垢的分解产物(尤其是胼胝质分解产物)的去除可通过存在表面活性剂和/或在棉与水性洗涤液体接触期间进行搅拌而显著改善。水性洗涤液体可通过向水中加入包含内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶和任选的清洁助剂的组合物而形成，或者通过单独加入酶和另外的任选组分而形成。在酶以包含另外的任选成分的组合物形式加入的情况下，所述组合物优选地包含0.00005重量％至5重量％活性蛋白质，优选地0.0001重量％至2重量％活性蛋白质，或0.0005重量％至1重量％活性蛋白质的量的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶。
30.表面活性剂
31.优选的清洁助剂包括表面活性剂，其优选地以基于水性洗涤液体计0.0001g/l至10g/l，或0.001g/l至8g/l，或0.001g/l至5g/l的量存在于水性洗涤液体中。
32.优选地水性洗涤液体包含表面活性剂，并且优选地表面活性剂与活性内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶蛋白质的重量比为至少500:1、优选地至少1000:1、或至少1500:1、或至少2000:1。
33.该表面活性剂优选地包括表面活性剂体系，该体系包含超过一种表面活性剂的混合物，该表面活性剂可为非离子的(包括半极性的)和/或阴离子的和/或阳离子的和/或两性离子的和/或两性的和/或具两性的和/或半极性非离子的和/或它们的混合物。
34.优选地，组合物包含阴离子表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂为磺酸盐和硫酸盐表面活性剂，优选地为烷基苯磺酸盐和/或(任选地烷氧基化的)烷基硫酸盐。特别优选的阴离子表面活性剂包括直链烷基苯磺酸盐(las)。优选的烷基硫酸盐包括烷基醚硫酸盐，特别是c
‑9‑
15醇醚硫酸盐(特别是具有0.5至7、优选地1至5的平均乙氧基化度的那些)、c8
‑
c16酯硫酸盐和c10
‑
c14酯硫酸盐(如单十二烷基酯硫酸盐)。在根据本发明的优选的组合物中，表面活性剂包括阴离子表面活性剂，优选地包括烷基苯磺酸盐和/或任选地乙氧基化烷基硫酸盐，优选地具有0至7、更优选地0.5至3的乙氧基化度。las的异构体、支链烷基苯磺酸盐(babs)、苯基链烷磺酸盐、α
‑
烯烃磺酸盐(aos)、聚烯烃磺酸盐、单烯烃磺酸盐、链烷
‑
2,3
‑
二基双(硫酸盐)、羟烷基磺酸盐和二磺酸盐，烷基硫酸盐(as)，诸如十二烷基硫酸钠(sds)、脂肪醇硫酸盐(fas)、伯醇硫酸盐(pas)、醇醚硫酸盐(aes或aeos或fes，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)，仲烷基磺酸盐(sas)、石蜡磺酸盐(ps)、酯磺酸盐、磺化脂肪酸甘油酯、α
‑
磺基脂肪酸甲酯(α
‑
sfme或ses)(包括甲酯磺酸盐(mes))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烷基/十四烷基琥珀酸(dtsa)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)、以及它们的组合也是合适的阴离子表面活性剂。水性洗涤液体可包含表面活性剂，优选地包括阴离子表面活性剂和/或非离子表面活性剂。在此情况下，阴离子表面活性剂优选地包括烷基苯磺酸盐和/或任选地乙氧基化烷基硫酸盐，优选地具有0至7、更优选地0.5至3的乙氧基化度。
35.阴离子表面活性剂以盐的形式使用。优选的阳离子为碱金属离子，诸如钠和钾。然而，阴离子表面活性剂的盐形式可通过使用碱(诸如氢氧化钠或胺如单乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺)中和表面活性剂的酸形式而原位形成。优选地，表面活性剂包括非离子表面活性剂。水性洗涤液体可包含优选地为如下重量比的阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂，该阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比为30:1至1:2、优选地20:1至2:3、或1:1。
36.非离子表面活性剂的非限制性示例包括醇乙氧基化物(ae或aeo)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(pfa)、烷氧基化脂肪酸烷基酯，诸如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(ape)、壬基酚乙氧基化物(npe)、烷基多苷(apg)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(fam)、脂肪酸二乙醇酰胺(fada)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(efam)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(pfam)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的n
‑
酰基n
‑
烷基衍生物(葡糖酰胺，ga或脂肪酸葡糖酰胺，faga)、以及可以商品名span和tween购得的产品、以及它们的组合。尤其优选的是醇乙氧基化物，其优选地具有c9
‑
18烷基链、优选地c12
‑
15烷基链，并且优选地具有3至9、更优选地3至7的平均乙氧基化度。可商购获得的非离子表面活性剂包括得自basf的plurafac
tm
、lutensol
tm
和pluronic
tm
，得自cognis的dehypon
tm
系列，和得自clariant的cognis和genapol
tm
系列。
37.表面活性剂与活性内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶蛋白质的优选重量比为至少500:1、优选地至少1000:1、优选地不大于200000:1、或至多100000:1或50000:1。
38.清洁助剂
39.除了表面活性剂以外，洗涤液体还可包含清洁/洗涤剂助剂。通常，任何清洁助剂将以基于水性洗涤液体计1ppb至5g/l的量存在于组合物中。合适的清洁助剂包括：助洗剂、漂白剂、漂白催化剂、着色剂、漂白增强剂、螯合剂、染料转移剂、沉积助剂、分散剂、另外的酶和酶稳定剂，催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、荧光增白剂、光活化剂、荧光剂、织物调色剂、织物调理剂、预成形过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、填料盐、水溶助长剂、增白剂、抑泡剂、结构增弹剂、织物软化剂、可水解表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、抗收缩剂、杀菌剂、杀真菌剂、抗变色剂、抗腐蚀剂、碱度来源、增溶剂、载体、加工助剂、颜料、染料、香料和ph控制剂、包封物、聚合物。例如，这些清洁助剂可包含：漂白成分，诸如亚胺漂白增强剂；过氧化氢源，诸如过碳酸盐和/或过硼酸盐，特别是涂覆有诸如碳酸盐和/或硫酸盐、硅酸盐、硼硅酸盐、以及它们的任何混合物的材料的过碳酸盐；预成形过酸，包括胶囊包封形式的预成形过酸；过渡金属催化剂；抑泡剂或抑泡体系，诸如基于有机硅的抑泡剂和/或基于脂肪酸的抑泡剂；织物软化剂，诸如粘土、硅氧烷和/或季铵化合物；絮凝剂，诸如聚环氧乙烷；染料转移抑制剂，诸如聚乙烯吡咯烷酮、聚4
‑
乙烯基吡啶n
‑
氧化物和/或乙烯基吡咯烷酮和乙烯基咪唑的共聚物；织物完整组分，例如通过咪唑和表氯醇缩合生成的低聚物；污垢分散剂和污垢抗再沉积助剂例如烷氧基化的聚胺和乙氧基化的乙烯亚胺聚合物；抗再沉积组分，诸如聚酯；羧酸盐聚合物，诸如马来酸聚合物或马来酸和丙烯酸的共聚物；香料，诸如香料微胶囊、淀粉包封调和物、香料喷雾；皂环；美观颗粒；染料；填料，诸如硫酸钠和/或柑橘纤维，但是该组合物可优选地基本上不含填料；硅酸盐，诸如硅酸钠(包括1.6r和2.0r硅酸钠)或偏硅酸钠；二羧酸和二醇的共聚酯；纤维素聚合物，例如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟基乙氧基纤维素、或其他烷基或烷基烷氧基纤维素；溶剂，诸如1,2
‑
丙二醇、单乙醇胺；二甘醇、乙醇、以及它们的任何混合物；水溶助长剂，诸如异丙基苯磺酸钠、二甲苯磺酸钠、甲苯磺酸钠、以及任何混合物；有机酸，诸如柠檬酸；以及它们的任何组合。组合物可使得清洁助剂包含选自以下中的一者或多者：(i)香料微胶囊；(ii)织物调色剂；(iii)蛋白酶；(iv)两亲性清洁聚合物；(v)脂肪酶，或(vi)它们的混合物。
40.洗涤液体优选地包含清洁组合物，所述清洁组合物可包含一种或多种另外的酶。合适的另外的酶包括优选地选自以下的一种或多种另外的酶：氨基肽酶、淀粉酶、糖酶、羧
肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α
‑
半乳糖苷酶、β
‑
半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α
‑
葡糖苷酶、β
‑
葡糖苷酶、卤素过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、黄原胶裂解酶、黄原胶酶、以及它们的混合物。优选地，组合物包含另外的酶，该另外的酶选自黄原胶裂解酶、黄原胶酶、甘露聚糖酶、以及它们的混合物。尤其优选的是甘露聚糖酶。还尤其优选的是黄原胶裂解酶和黄原胶酶以及它们的混合物。另外的酶可例如由属于曲霉属(aspergillus)的微生物产生，例如棘孢曲霉(aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(aspergillus awamori)、臭曲霉(aspergillus foetidus)、烟曲霉(aspergillus fumigatus)、日本曲霉(aspergillus japonicus)、构巢曲霉(aspergillus nidulans)、黑曲霉(aspergillus niger)或米曲霉(aspergillus oryzae)；由属于镰刀霉属(fusarium)的微生物产生，例如杆孢状镰孢(fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(fusariumcerealis)、fusarium crookwellense、大刀镰孢(fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)、禾赤镰孢(fusarium graminum)、fusarium heterosporum、fusarium negundi、尖孢镰孢菌(fusarium oxysporum)、多枝镰孢(fusarium reticulatum)、粉红镰孢(fusarium roseum)、接骨木镰孢(fusarium sambucinum)、肤色镰孢(fusarium sarcochroum)、硫色镰刀菌(fusarium sulphureum)、fusarium toruloseum、丝孢镰刀菌(fusarium trichothecioides)、或镰孢霉(fusarium venenatum)；由属于腐质霉属(humicola)的微生物产生，例如特异腐质霉(humicola insolens)或humicola lanuginosa；或由属于木霉属(trichoderma)的微生物产生，例如哈茨木霉(trichoderma harzianum)、康宁木霉(trichoderma koningii)、长梗木霉(trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(trichoderma reesei)或绿色木霉(trichoderma viride)。
41.优选地，组合物包含蛋白酶或超过一种蛋白酶的混合物、脂肪酶或超过一种脂肪酶的混合物、过氧化物酶或超过一种过氧化物酶的混合物、一种或多种淀粉酶(例如α
‑
淀粉酶、葡糖淀粉酶、麦芽糖淀粉酶，优选地为另外的α
‑
淀粉酶)、一种cgtase或超过一种cgtase的混合物和/或纤维素酶或超过一种纤维素酶的混合物、甘露聚糖酶(诸如novozymes，denmark的mannaway
tm
)或超过一种甘露聚糖酶的混合物、果胶酶、果胶酸裂解酶、角质酶和/或漆酶、或超过这些酶中的一者或多者中的一种的混合物。
42.一般来讲，所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容(即最适ph、与其他酶或非酶成分相容等)，并且该酶应当以有效量存在。优选地，本发明的产品包含至少0.01mg、优选地约0.05mg至约10mg、更优选地约0.1mg至约6mg、特别是约0.2mg至约5mg另外的活性酶/g组合物。
43.蛋白酶：与本发明的变体蛋白酶组合使用的合适蛋白酶包括金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶，该丝氨酸蛋白酶包括中性或碱性微生物丝氨酸蛋白酶，诸如枯草杆菌蛋白酶(ec 3.4.21.62)。合适的蛋白酶包括动物源、植物源或微生物源的那些。在一个方面，此类合适的蛋白酶可为微生物源。合适的蛋白酶包括前述合适蛋白酶的经化学修饰或基因修饰的突变体。在一个方面，合适的蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶，诸如碱性微生物蛋白酶或/和胰蛋白酶型蛋白酶。合适的中性或碱性蛋白酶的示例包括：
44.(a)枯草杆菌蛋白酶(ec 3.4.21.62)，特别是wo2004067737、wo2015091989、
wo2015091990、wo2015024739、wo2015143360、us 6,312,936 b1、us 5,679,630、us 4,760,025、de102006022216a1、de102006022224a1、wo2015089447、wo2015089441、wo2016066756、wo2016066757、wo2016069557、wo2016069563、wo2016069569和wo2016174234中所述的来源于芽孢杆菌(bacillus)(诸如芽孢杆菌属、迟缓芽孢杆菌(b.lentus)、嗜碱芽孢杆菌(b.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(b.pumilus)、吉氏芽孢杆菌(b.gibsonii)和秋叶氏芽孢杆菌(b.akibaii))的那些。具体地为突变s9r、a15t、v66a、a188p、v199i、q239r、n255d(savinase编号体系)。
45.(b)来自短小芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶，诸如wo2019048486、wo2019048488和wo2019048495中所述的那些，这些专利包括在位置29、48、101、130、131、133、144、224、252、271处包含氨基酸置换的变体；以及包含在位置271处的置换和在以下位置处具有一个或多个置换的变体：18、61、92、99、137、149、156、159、162、172、192、199、217、265。
46.(c)s8蛋白酶来自芽孢杆菌属的nn018132、bacillus borgouniensis和树枝状类芽孢杆菌(paenibacillus dendritiformis)，诸如us20180340162中所述的那些。
47.(d)胰蛋白酶型或胰凝乳蛋白酶型蛋白酶，诸如胰蛋白酶(例如源自猪或牛的胰蛋白酶)，包括描述于wo 89/06270的镰孢属蛋白酶和描述于wo 05/052161和wo 05/052146的来源于纤维单胞菌属(cellumonas)胰凝乳蛋白酶。
48.(e)金属蛋白酶，特别是wo07/044993a2中所述的来源于解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)的那些；wo2014194032、wo2014194054和wo2014194117中所述的来源于芽孢杆菌属(bacillus)、短芽孢杆菌属(brevibacillus)、热放线菌属(thermoactinomyces)、杆菌属(geobacillus)、类芽孢杆菌属(paenibacillus)、赖氨酸芽孢杆菌属(lysinibacillus)或链霉菌属菌种(streptomyces spp.)的那些；wo2015193488中描述的来源于kribella alluminosa的那些；以及wo2016075078中描述的来源于链霉菌属和溶杆菌属(lysobacter)的那些。
49.(f)与在wo92/17577(novozymes a/s)中所述的来自芽孢杆菌属ty145，ncimb 40339的枯草杆菌酶具有至少90％的同一性的蛋白酶，包括wo2015024739、wo2015014790、wo2016066757和us20190040376中所述的该芽孢杆菌ty145枯草杆菌酶的变体。
50.(g)耐盐蛋白酶，诸如wo2019105675中所述。
51.用于本发明的洗涤剂的特别优选的另外的蛋白酶是显示与来自迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)的野生型酶至少90％，优选地至少95％，更优选地至少98％，甚至更优选地至少99％，并且特别是100％的同一性的多肽，使用bpn'编号系统，这些蛋白酶在以下位置中的一个或多个位置，优选地两个或更多个位置，并且更优选地三个或更多个位置处包含突变：9、15、68、76、78、87、99、x101、103、104、118、118、128、129、130、167、170、194、205、206、209、222、245。最优选地，使用bpn'编号系统和如wo00/37627(以引用方式并入本文)中所示的氨基酸缩写，用于洗涤剂发明的另外的蛋白酶包含一个或多个下列突变，优选地两个或更多个下列突变，并且更优选地三个或更多个下列突变：s9r、a15t、v68a、n76d、n87s、s99d、s99e、s99sd、s99a、s101g、s101m、s103a、v104n/i、g118v、g118r、s128l、p129q、s130a、y167a、r170s、a194p、v205i、q206l/d/e、y209w、m222s和/或q245r。
52.最优选地，蛋白酶选自相对于pb92野生型(wo 08/010925中的seq id no:2)或枯
草杆菌蛋白酶309野生型(按照pb92主链的序列，不同的是包含自然变异n87s)包含下列突变(bpn'编号系统)的组。
53.(i)g118v s128l p129q s130a
54.(ii)s101m g118v s128l p129q s130a
55.(iii)n76d n87r g118r s128l p129q s130a s188d n248r
56.(iv)n76d n87r g118r s128l p129q s130a s188d v244r
57.(v)n76d n87r g118r s128l p129q s130a
58.(vi)v68a n87s s101g v104n
59.(vii)s99ad
60.(viii)s99e
61.(ix)s9r a15t v68a n218d q245r
62.合适的可商购获得的另外的蛋白酶包括以商品名合适的可商购获得的另外的蛋白酶包括以商品名liquanasesavinasesavinaseblaze和由novozymes a/s(denmark)出售的那些；以商品名purafectpurafect和purafect由dupont出售的那些；以商品名和由solvay enzymes出售的那些；以及可从henkel/kemira获得的那些，即blap(序列示于us us 5,352,604的图29中，具有下列突变s99d s101r s103a v104i g159s，下文称为blap)、blap r(具有s3t v4i v199m v205i l217d的blap)、blap x(具有s3t v4i v205i的blap)和blap f49(具有s3t v4i a194p v199m v205i l217d的blap)；以及来自kao的kap(具有突变a230v s256g s259n的嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
63.特别优选用于本文与本发明的变体蛋白酶组合的是选自以下的商业蛋白酶：blazeblap和blap变体。
64.本发明产品中蛋白酶的优选含量包括约0.05mg至约10mg、更优选地约0.5mg至约7mg并且特别是约1mg至约6mg活性蛋白酶/g组合物。
65.脂肪酶：组合物优选地包含脂肪酶。油和/或油脂的存在可进一步增加包含甘露聚糖和其他多糖的污渍的回弹性。因此，脂肪酶存在于酶包装中可进一步改善此类污渍的去除效果。合适的脂肪酶包括源自细菌或真菌或合成的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。可用脂肪酶的示例包括来自腐质霉属(同义词嗜热真菌属(thermomyces))的脂肪酶，例如来自柔毛腐质霉(疏绵状嗜热丝孢菌(t.lanuginosus))或来自特异腐质霉的脂肪酶，假单胞菌属脂肪酶(pseudomonas lipase)，例如来自产碱假单胞菌(p.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(p.pseudoalcaligenes)、洋葱假单胞菌(p.cepacia)、
施氏假单孢菌(p.stutzeri)、荧光假单胞菌(p.fluorescens)、假单胞菌属(pseudomonas sp.)菌株sd 705，威斯康星假单胞菌(p.wisconsinensis)的脂肪酶，芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(dartois等人(1993年)biochemica et biophysica acta(《生物化学与生物物理学报》)，第1131卷，第253
‑
360页)，嗜热脂肪芽孢杆菌(b.stearothermophilus)或短小芽孢杆菌。
66.脂肪酶可为“第一循环脂肪酶”，诸如美国专利6,939,702b1和美国专利2009/0217464中所述的那些。在一个方面，脂肪酶为第一洗涤脂肪酶，优选地为来自包含t231r和n233r突变的疏绵状嗜热丝孢菌的野生型脂肪酶的变体。野生型序列是swissprot登录号为swiss
‑
prot o59952(来源于疏绵状嗜热丝孢菌(棉毛状腐质霉(humicola lanuginosa)))的269个氨基酸(氨基酸23
‑
291)。优选的脂肪酶包括以商品名和出售的那些。
67.其它合适的脂肪酶包括：lipr1 139，例如如描述于wo2013/171241中的；tfulip2，例如如于wo2011/084412和wo2013/033318中所述；施氏假单胞菌脂肪酶，例如如wo2018228880中所述；耐热微球菌(microbulbifer thermotolerans)脂肪酶，例如如wo2018228881中所述；嗜酸硫化芽孢杆菌(sulfobacillus acidocaldarius)脂肪酶，例如如ep3299457中所述；lip062脂肪酶，例如如wo2018209026中所述；pinlip脂肪酶，如wo2017036901中所述；和犁头霉属(absidia sp.)脂肪酶，如wo2017005798中所述。
68.合适的脂肪酶是seq id no:5的变体，该变体包含：
69.(a)置换t231r
70.和
71.(b)置换n233r或n233c
72.和
73.(c)至少三个选自e1c、d27r、n33q、g38a、f51v、g91q、d96e、k98l、k98i、d111a、g163k、h198s、e210q、y220f、d254s、i255a和p256t的另外的置换；
74.其中这些位置对应于seq id no:5的位置，并且其中脂肪酶变体与seq id no:5的氨基酸序列的多肽具有至少90％但小于100％的序列同一性，并且其中这些脂肪酶变体具有脂肪酶活性。
75.一种优选的脂肪酶是包含下列置换的seq id no:5的变体：t231r、n233r、d27r、g38a、d96e、d111a、g163k、d254s和p256t。
76.一种优选的脂肪酶是包含下列置换的seq id no:5的变体：t231r、n233r、n33q、g91q、e210q、i255a。
77.合适的脂肪酶可从novozymes商购获得，例如lipex evity 100l、lipex evity 200l(两种液体原料)和lipex evity 105t(颗粒)。这些脂肪酶具有与产品lipex 100l,lipex 100t和lipex evity 100t不同的结构，上述产品在本发明范围之外。
78.纤维素酶：合适的纤维素酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢霉属、草根霉属(thielavia)、支顶孢属(acremonium)的纤维素酶，例如，在us 4,435,307、us 5,648,263、us5,691,178、us 5,776,757和us 5,691,178中所公开的由特异腐质霉、嗜热毁
丝菌(myceliophthora thermophila)和尖孢镰孢菌制得的真菌纤维素酶。
79.在一个方面，优选的酶包括源自微生物的内切葡聚糖酶，其表现出内切
‑
β
‑
1,4
‑
葡聚糖酶活性(e.c.3.2.1.4)，优选地选自以下物质：
80.(a)芽孢杆菌属成员的内源性细菌多肽，其具有与us 7,141,403b2中的氨基酸序列seq id no:2有至少90％、94％、97％和甚至99％的同一性的序列，优选的置换包含对应于seq id no:2的成熟多肽的位置292、274、266、265、255、246、237、224和221中的一个或多个位置，并且变体具有纤维素酶活性；
81.(b)糖基水解酶，其具有对木葡聚糖和非晶形纤维素底物的酶活性，其中该糖基水解酶选自gh第5、7、12、16、44或74家族；
82.(c)糖基水解酶，其具有与wo09/148983中的氨基酸序列seq id no:3有至少90％、94％、97％和甚至99％的同一性的序列；
83.(d)变体，其表现出与wo2017106676中的seq id no:5至少70％的同一性。优选的置换包含对应于以下位置中的一个或多个位置：4、20、23、29、32、36、44、51、77、80、87、90、97、98、99、102、112、116、135、136、142、153、154、157、161、163、192、194、204、208、210、212、216、217、221、222、225、227和232；
84.(e)和它们的混合物。
85.合适的内葡聚糖酶以商品名和(novozymes a/s，bagsvaerd，denmark)出售。示例包括5000l、classic 400l、classic 700t、4500t、1.5t、2.0l。
86.其他可商购获得的纤维素酶包括premium(novozymes a/s)、puradax1000、2000(genencor international inc.)、(kao corporation)、fcl、dcl、dcc、ncd,fcc、flx1(ab enzymes)。
87.淀粉酶：优选地，本发明的组合物包含淀粉酶。合适的α
‑
淀粉酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或基因修饰的突变体(变体)。优选的碱性α
‑
淀粉酶来源于芽孢杆菌的菌株，诸如地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌属(bacillus sp.)，诸如芽孢杆菌属ncbi 12289、ncbi 12512、ncbi 12513、dsm 9375(usp 7,153,818)、dsm 12368、dsmz 12649、ksm ap1378(wo 97/00324)、ksm k36或ksm k38(ep 1,022,334)。优选的淀粉酶包括：
88.(a)usp 5,856,164和wo99/23211、wo 96/23873、wo00/60060、wo06/002643和wo2017/192657中所述的变体，特别是相对于wo 06/002643中如seq id no.12所列的aa560酶在以下位置具有一个或多个置换的变体：
89.26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、202、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、
484，这些变体优选地还包含d183*和g184*缺失。
90.(b)表现出与wo06/002643中的seq id no.4至少85％，优选地90％同一性的变体，来自芽孢杆菌属sp722的野生型酶，特别是在第183和184位置具有缺失的变体，以及wo 00/60060、wo2011/100410和wo2013/003659中所述的变体，尤其是相对于wo06/002643的seq id no.4在以下位置具有一个或多个置换的那些变体，所述文献以引用方式并入本文：
91.51、52、54、109、304、140、189、134、195、206、243、260、262、284、347、439、469、476和477。
92.(c)表现出与来自芽孢杆菌属707的野生型酶(us 6,093,562中的seq id no:7)至少90％的同一性的变体，特别是包含以下突变中的一个或多个突变的那些：m202、m208、s255、r172和/或m261。优选地，所述淀粉酶包含m202l、m202v、m202s、m202t、m202i、m202q、m202w、s255n和/或r172q中的一个或多个。尤其优选的是包含m202l或m202t突变的那些。基于sp707主链的另外的相关突变/缺失包含w48、a51、v103、v104、a113、r118、n125、v131、t132、e134、t136、e138、r142、s154、v165、r182、g182、h183、e190、d192、t193、i206、m208、d209、e212、v213、v214、n214、l217、r218、n219、v222、t225、t227、g229、i235、k242、y243、s244、f245、t246、i250、s255、a256、h286、v291、t316、v317、v318、n417、t418、a419、h420、p421、i428、m429、f440、r443、n444、k445、q448、s451、a465、n470、s472。
93.(d)在wo 09/149130中描述的变体，优选表现出与wo 09/149130中的seq id no:1或seq id no:2(来自嗜热脂肪芽孢杆菌(geobacillus stearophermophilus)的野生型酶或其截短型式)至少90％的同一性的那些。
94.(e)在wo10/115021中描述的变体，特别是表现出与wo10/115021中的seq id no:2(来源于芽孢杆菌属ts
‑
23的α
‑
淀粉酶)具有至少75％，或至少85％，或至少90％，或至少95％的那些。
95.(f)表现出与wo2016091688中的seq id no:1至少89％的同一性的变体，特别是在位置h183 g184处包含缺失并且还在第405位、第421位、第422位和/或第428位处包含一个或多个突变的那些。
96.(g)wo2014099523中描述的变体，特别是表现出与来自解凝乳类芽孢杆菌(paenibacillus curdlanolyticus)yk9的“pcuamyl α
‑
淀粉酶”(wo2014099523中的seq id no:3)至少60％的氨基酸序列同一性的那些。
97.(h)wo2014099523中描述的变体，特别是表现出与来自噬细胞菌属(cytophaga sp.)的“cspamy2淀粉酶”(wo2014164777中的seq id no:1和6)至少60％的氨基酸序列同一性的那些。特别是包含基于wo2014164777中seq id no:1的下列缺失和/或突变中的一个或多个缺失和/或突变的那些：r178*、g179*、t38n、n88h、n126y、t129i、n134m、f153w、l171r、t180d、e187p、i203y、g476k、g477e、y303d。
98.(i)表现出与来自枯草芽孢杆菌的amye(wo2009149271中的seq id no:1)至少85％的同一性的变体。
99.(j)表现出与来自芽孢杆菌属ksm
‑
k38的野生型淀粉酶(登录号ab051102)至少90％的同一性的变体。
100.(k)wo2016180748中描述的变体，特别是表现出与wo2016180748中的seq id no:7的来自芽孢杆菌属的aai10的成熟氨基酸序列至少80％的同一性的那些；表现出与
wo2016180748中的seq id no:8的脂环酸芽孢杆菌属(alicyclobacillus sp)淀粉酶的成熟氨基酸序列至少80％的同一性的那些，以及表现出与wo2016180748中的seq id no:13的成熟氨基酸序列至少80％的同一性的那些，特别是包含下列突变中的一个或多个突变的那些：h*、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、a174s、g184t、n195f、v206l、k391a、p473r、g476k。
101.(l)wo2018060216中描述的变体，特别是表现出与wo2018060216中的seq id no:4的成熟氨基酸序列(解淀粉芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的融合分子)至少70％的同一性的那些。特别是在位置h1、n54、v56、k72、g109、f113、r116、t134、w140、w159、w167、q169、q172、l173、a174、r181、g182、d183、g184、w189、e194、n195、v206、g255、n260、f262、a265、w284、f289、s304、g305、w347、k391、q395、w439、w469、r444、f473、g476和g477处包含一个或多个置换的那些。
102.优选地，淀粉酶为工程化酶，其中易于漂白氧化的氨基酸中的一个或多个已被不太易于氧化的氨基酸取代。具体地，优选的是甲硫氨酸残基被任何其他氨基酸取代。具体地，优选的是最易于氧化的甲硫氨酸被取代。优选地，seq id no:11中等同于202的位置处的甲硫氨酸被取代。优选地，该位置处的甲硫氨酸被苏氨酸或亮氨酸、优选亮氨酸取代。
103.合适的可商购获得的α
‑
淀粉酶包括淀粉酶包括termamyltermamylstainzymeachieveprime、和(novozymes a/s，bagsvaerd，denmark)、at 9000 biozym biotech trading gmbh wehlistrasse 27b a
‑
1200 wien austria、austria、optisize htpreferenz系列(包括preferenz和preferenz)、purastar(dupont.，palo alto，california)和(kao，14
‑
10 nihonbashi kayabacho，1
‑
chome，chuo
‑
ku tokyo 103
‑
8210，japan)。
104.优选地，本发明的产品包含至少0.01mg、优选地约0.05mg至约10mg、更优选地约0.1mg至约6mg、特别是约0.2mg至约5mg活性淀粉酶/g组合物。
105.优选地，本发明组合物的蛋白酶和/或淀粉酶为颗粒形式，所述颗粒包含按所述颗粒的重量计大于29％的硫酸钠，并且/或者硫酸钠和活性酶(蛋白酶和/或淀粉酶)的重量比介于3:1和100:1之间，或优选地介于4:1和30:1之间，或更优选地介于5:1和20:1之间。
106.过氧化物酶/氧化酶：合适的过氧化物酶/氧化酶包括源自植物、细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。可用的过氧化物酶的示例包括来自鬼伞属(coprinus)(例如来自灰盖鬼伞(c.cinereus))的过氧化物酶及它们的变体，如wo 93/24618、wo 95/10602和wo 98/15257中所述的那些。
107.可商购获得的过氧化物酶包括(novozymes a/s)。
108.果胶酸裂解酶：合适的果胶酸裂解酶包括以商品名
(all novozymes a/s，bagsvaerd，denmark)、f1000(dupont industrial biosciences)出售的那些。
109.甘露聚糖酶。优选地，组合物包含甘露聚糖酶。如本文所用，术语“甘露聚糖酶”或“半乳甘露聚糖酶”表示根据本领域已知为甘露聚糖内切
‑
1,4
‑
β
‑
甘露糖苷酶(并且其具有别名β
‑
甘露聚糖酶和内切
‑
1,4
‑
甘露聚糖酶，并且其催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖中1,4
‑
β
‑
d
‑
甘露糖苷键水解)来定义的甘露聚糖酶。根据酶命名法将甘露聚糖酶分类为ec 3.2.1.78。可商购获得的甘露聚糖酶包括以商品名(novozymes a/s，bagsvaerd，denmark)、m1000、375、preferenz m100和(all dupont industrial biosciences，palo alto，california)出售的那些。优选的甘露聚糖酶包括：与seq id no:8的残基27
‑
331具有至少85％的序列同一性的那些。seq id no:8对应于包含信号序列的解半纤维素芽孢杆菌的内源性man7甘露聚糖酶的全长氨基酸序列。尤其优选的甘露聚糖酶与seq id no:3的残基27
‑
331具有至少90％的序列同一性，并且任选地包含在位置123、158、180、272、285或307或它们的组合处的至少一个置换；以及来自糖苷水解酶家族26的甘露聚糖酶，其催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖和葡甘露聚糖中1,4
‑3‑
d
‑
甘露糖苷键的水解。合适的示例描述于wo2015040159中。
110.黄原胶降解酶：组合物优选地包含黄原胶降解酶。适用于降解黄原胶污垢(诸如黄原胶)的酶包括黄原胶内切葡聚糖酶和黄原胶裂解酶的组合。如本文所用，术语黄原胶内切葡聚糖酶表示表现出内切
‑
β
‑
1,4
‑
葡聚糖酶活性的酶，该酶能够催化黄原胶的1,4
‑
键合的β
‑
d
‑
葡萄糖聚合物主链与合适的黄原胶裂解酶的结合水解。优选的黄原胶内切葡聚糖酶具有内切
‑
β
‑
1,4
‑
葡聚糖酶活性并且与seq id no:9具有至少60％的同一性的多肽。seq id no:9对应于类芽孢杆菌属
‑
62047的内源性黄原胶内切葡聚糖酶的氨基酸序列。黄原胶内切葡聚糖酶可为与seq id no:9具有至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的变体。黄原胶内切葡聚糖酶可在seq id no:9的位置17、20、51、53、55、56、60、63、79、87、186、192、302、311、313、387、388、390、403、408、410、416、448、451、471、472、476、489、507、512、515、538、598、599、602、605、609、676、688、690、694、697、698、699、711、719、754、756、760、781、786、797、833、834、835和1048中的一个或多个位置处具有置换。黄原胶内切葡聚糖酶可在位置s17a、f20p、f20n、f20g、f20y、k51q、k51h、e53p、e53g、y55m、v56m、y60f、s63f、t87r、a186p、k192n、i320d、i302h、i302v、i302m、h311n、s313d、i387t、k388r、k390q、i403y、e408d、e408s、e408p、e408a、e408g、e408n、p410g、q416s、q416d、a448e、a448w、a448s、k451s、g471s、s472y、d476r、q489p、k507r、k512p、s515v、s538c、y579w、s598q、a599s、i602t、i602d、v603p、s605t、g609e、d676h、a688g、y690f、t694a、t697g、r698w、t699a、t711v、t711y、w719r、k754r、v756h、v756y、s760g、t781m、n786k、t797s、a824d、n833d、q834e、s835d和f1048w中的一个或多个位置处具有置换。如本文所用，术语“黄原胶裂解酶”表示裂解黄原胶的β
‑
d
‑
甘露糖基
‑
β
‑
d
‑
1,4
‑
葡糖醛酸键的酶，并且已
在文献中进行了描述。根据酶命名法将黄原胶裂解酶分类为ec 4.2.2.12，并且已知黄原胶裂解酶由许多黄原胶降解细菌产生，包括芽孢杆菌属、棒状杆菌属(corynebacterium)和类芽孢杆菌属菌种。根据本发明的黄原胶裂解酶具有黄原胶裂解酶活性并且包含与seq id no:10具有至少60％的同一性的多肽。seq id no:10对应于类芽孢杆菌属的内源性黄原胶裂解酶的氨基酸序列。黄原胶裂解酶可为与seq id no:10具有至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的变体。黄原胶裂解酶可为在选自以下位置中的一个或多个位置处具有改变的变体：seq id no:10的9、15、46、58、66、89、95、100、106、109、183、188、190、203、204、221、229、234、238、240、242、243、257、258、291、293、316、320、324、329、333、339、341、352、354、360、377、399、400、419、440、450、451、454、458、481、492、567、568、578、579、582、664、672、703、728、843、855、887、892、1008和1016。黄原胶裂解酶可为在选自以下位置中的一个或多个位置处具有改变的变体：seq id no:10的位置624、631、635、649、656、752、752、754、757、769、775、777、800、801、875、911和915。黄原胶裂解酶可为具有选自以下中的一个或多个置换的变体：seq id no:10的k9r、n15t、l46d、a58l、s66h、q89y、k95e、s100d、n106y、q109r、q109d、q109f、q109k、q109a、k183q、k183r、v188i、a190q、a203p、k204r、a221p、e229n、e229s、i234v、i238w、i238l、i238m、i240w、n242s、g243v、y257w、r258e、k291r、a293g、a293p、k316r、k320r、l324q、k329r、k333r、l339m、1341p、v352i、s354p、k360g、k360r、f377y、n399k、k400r、f419y、n440k、d450p、k451e、k451r、a454v、d458s、k481r、a492l、a492h、k567r、g568a、s578k、s578r、s579r、s579k、s582k、a624e、t631n、s635e、t649k、i656v、t664k、n672d、i703l、m728v、g738l、p752k、p752r、g753e、s754e、s754r、s757d、a769d、l775a、d777r、v800p、d801g、a843p、k855r、k875t、k887r、n892y、n892w、n892f、a911v、t915a、n1008d和k1016t。
111.优选地，组合物包含核酸酶，诸如rna酶或dna酶或它们的混合物。核酸酶是能够裂解核酸的核苷酸亚单位之间的磷酸二酯键的酶。本文的核酸酶优选地为脱氧核糖核酸酶或核糖核酸酶或它们的功能性片段。所谓的功能性片段或部分是指核酸酶的催化dna主链中磷酸二酯键的裂解的部分，并且因此是保留催化活性的所述核酸酶蛋白的区域。因此，它包括酶和/或变体和/或衍生物和/或同源物的功能得以维持的截短但功能性形式。
112.优选地，核酸酶是脱氧核糖核酸酶，优选地选自以下类中的任一种：e.c.3.1.21.x，其中x＝1、2、3、4、5、6、7、8或9，e.c.3.1.22.y，其中y＝1、2、4或5，e.c.3.1.30.z，其中z＝1或2，e.c.3.1.31.1以及它们的混合物。
113.dna酶：合适的dna酶包括由wo2017162836(novozymes)中的seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8和9定义的dna酶的野生型和变体，和包括wo2018011277(novozymes)中所述的那些在内的食物芽孢杆菌(bacillus cibi)dna酶的变体，上述文献以引用方式并入本文。优选的dna酶如共同未决的欧洲专利申请ep18202967中所述。
114.rna酶：合适的rna酶包括由wo2018178061(novozymes)中的seq id no:3、6、9、12、15、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、72和73定义的dna酶的野生型和变体，上述文献
以引用方式并入本文。
115.半乳聚糖酶：优选地，组合物包含半乳聚糖酶，即包含内切
‑
β
‑
1,6
‑
半乳聚糖酶的细胞外聚合物降解酶。术语“内切
‑
β
‑
1,6
‑
半乳聚糖酶”或“具有内切
‑
β
‑
1,6
‑
半乳聚糖酶活性的多肽”是指催化聚合度(dp)高于3的1,6
‑3‑
d
‑
低聚半乳糖水解裂解的来自糖苷水解酶家族30的内切
‑
β
‑
1,6
‑
半乳聚糖酶活性(ec 3.2.1.164)，以及它们在非还原末端具有4
‑
o
‑
甲基葡糖醛酸或葡糖醛酸酯基团的酸性衍生物。出于本公开的目的，内切
‑
β
‑
1,6
‑
半乳聚糖酶活性根据wo 2015185689中的测定法i中所述的过程测定。来自ec 3.2.1.164的合适的示例描述于wo 2015185689中，诸如成熟多肽seq id no:2。
116.洗涤液体可包含织物调色剂(有时被称为遮蔽剂、上蓝剂或美白剂)和/或光学增白剂。调色剂通常向织物提供蓝色或紫色色调。调色剂能够单独使用或组合使用，以产生特定的调色色调和/或对不同的织物类型调色。这可例如通过将红色和蓝绿色染料混合以产生蓝色或紫色色调来提供。调色剂可选自任何已知化学类别的染料，包括但不限于吖啶、蒽醌类(包括多环醌类)、吖嗪、偶氮(例如，单偶氮、双偶氮、三偶氮、四偶氮、多偶氮)、包括预金属化偶氮、苯并二呋喃和苯并二呋喃酮、类胡萝卜素、香豆素、花菁、二氮杂半花菁、二苯甲烷、甲臜、半花菁、靛蓝类、甲烷、萘酰亚胺、萘醌、硝基和亚硝基、噁嗪、酞菁、吡唑类、二苯乙烯、苯乙烯基、三芳基甲烷、三苯甲烷、氧杂蒽以及它们的混合物。
117.合适的织物调色剂包括染料、染料
‑
粘土缀合物、以及有机颜料和无机颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自以下的小分子染料：落入颜色索引(c.i.)分类的直接染料、碱性染料、活性染料或水解活性染料、溶剂染料或分散染料的染料。合适的小分子染料的示例包括例如选自以下的小分子染料：颜色索引(society of dyers and colourists,bradford,uk)编号直接紫染料诸如9、35、48、51、66和99，直接蓝染料诸如1、71、80和279，酸性红染料诸如17、73、52、88和150，酸性紫染料诸如15、17、24、43、49和50，酸性蓝染料诸如15、17、25、29、40、45、75、80、83、90和113，酸性黑染料诸如1，碱性紫染料诸如1、3、4、10和35，碱性蓝染料诸如3、16、22、47、66、75和159，诸如ep1794275或ep1794276中所述的分散染料或溶剂染料、或诸如us7,208,459b2中所公开的染料、以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料包括选自以下的小分子染料：颜色索引编号酸性紫17、酸性紫50或51、直接蓝71、直接紫51、直接蓝1、酸性红88、酸性红150、酸性蓝29、酸性蓝113、或它们的混合物。
118.优选的聚合物染料包括选自以下的聚合物染料：含有共价结合(有时被称为缀合)的色原体的聚合物(染料
‑
聚合物缀合物)(例如具有共聚至该聚合物主链中的色原体的聚合物)以及它们的混合物。聚合物染料包括wo2011/98355、wo2011/47987、us2012/090102、wo2010/145887、wo2006/055787和wo2010/142503中所述的那些。
119.优选的聚合物染料包括烷氧基化的，优选地乙氧基化的偶氮或蒽醌或三芳基甲烷染料。特别优选的是乙氧基噻吩含氮染料，例如选自以下的聚合物染料：以商品名(milliken，spartanburg，south carolina，usa)销售的织物直接着色剂，由至少一种活性染料形成的染料
‑
聚合物缀合物，以及选自包含以下部分的聚合物的聚合物，该部分选自：羟基部分、伯胺部分、仲胺部分、硫醇部分、以及它们的混合物。在另一方面，合适的聚合物染料包括选自以下的聚合物染料：violet ct，共价键合到活性蓝、活
性紫或活性红染料的羧甲基纤维素(cmc)诸如与c.i.活性蓝19缀合的cmc(由megazyme,wicklow,ireland以产品名azo
‑
cm
‑
cellulose，产品代码s
‑
acmc销售)、烷氧基化的三苯基
‑
甲烷聚合物着色剂、烷氧基化的噻吩聚合物着色剂、以及它们的混合物。
120.优选的调色染料包括存在于us2008/0177090中的烷氧基化噻吩偶氮增白剂，其可任选地为阴离子的，诸如选自wo2011/011799的表5中的实施例1至42的那些。其他优选的染料公开于us 8138222中。
121.合适的颜料包括选自以下的颜料：群青蓝(c.i.颜料蓝29)、群青紫(c.i.颜料紫15)以及它们的混合物。出于美观原因，还可添加颜料和/或染料以增添颜色。优选的为有机蓝色、紫罗兰和绿色颜料。
122.洗涤液体可包含优选地选自以下的酶稳定剂：(a)无机盐，该无机盐选自钙盐、镁盐以及它们的混合物；(b)碳水化合物，该碳水化合物选自低聚糖、多糖以及它们的混合物；(c)高效可逆蛋白酶抑制剂，高效可逆蛋白酶抑制剂选自苯基硼酸以及它们的衍生物；以及(d)它们的混合物。
123.在另一个实施方案中，洗涤液体包含：(1)可逆蛋白酶抑制剂，诸如含硼化合物；(2)1
‑
2丙二醇；(3)甲酸钙和/或甲酸钠；以及(4)它们的任意组合。
124.聚合物
‑
洗涤液体可包含一种或多种聚合物。示例为羧甲基纤维素、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶
‑
n
‑
氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物和两亲性聚合物。
125.漂白剂
‑
洗涤液体可包含漂白体系，该漂白体系可包含h2o2源(诸如过硼酸盐或过碳酸盐)，其可与形成过酸的漂白活化剂诸如四乙酰乙二胺或壬酰氧基苯磺酸盐混合。另选地，漂白体系可包含过氧酸(例如酰胺、酰亚胺、或砜类过氧酸)。
126.螯合剂
‑
洗涤液体可包含螯合剂。合适的螯合剂包括铜、铁和/或锰螯合剂、以及它们的混合物。当使用螯合剂时，主题消费产品可包含按该主题消费产品的重量计约0.005％至约15％、或甚至约3.0％至约10％的螯合剂。合适的螯合剂(络合剂)包括：dtpa(二亚乙基三胺五醋酸)、hedp(羟乙烷二膦酸酯)、dtpmp(环丁烷三胺五(亚甲基膦酸))、1,2
‑
二羟基苯
‑
3,5
‑
二磺酸二钠盐水合物、乙二胺、环丁烷三胺、乙二胺二琥珀酸(edds)、n
‑
羟乙基乙二胺三乙酸(hedta)、三亚乙基四胺六乙酸(ttha)、n
‑
羟乙基亚氨基二乙酸(heida)、二羟乙基甘氨酸(dheg)、乙二胺四丙酸(edtp)、甲基甘氨酸
‑
二乙酸(mgda)、谷氨酸
‑
n，n
‑
二乙酸(glda)、亚氨基二琥珀酸(ids)、羧甲基菊粉；以及它们的盐衍生物和它们的混合物。优选的螯合剂选自甲基甘氨酸二乙酸(mgda)及其盐和衍生物、谷氨酸二乙酸四钠(glda)及其盐和衍生物、亚氨基二琥珀酸四钠(ids)及其盐和衍生物、羧甲基菊粉及其盐和衍生物、以及它们的混合物。用于本文的特别优选的络合剂选自mgda及其盐，用于本文的特别优选的是mgda的三钠盐。
127.酶稳定剂
‑
可使用以下的常规稳定剂和/或蛋白酶抑制剂来稳定本发明中使用的酶：例如多元醇(诸如丙二醇或甘油、糖或糖醇)、盐(诸如氯化钠和氯化钾)、乳酸、甲酸、硼酸或硼酸衍生物(例如芳族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物诸如4
‑
甲酰基苯基硼酸)、或肽醛(诸如二肽醛、三肽醛或四肽醛或醛类似物)(b1
‑
b0
‑
r形式中的任一种，其中r为h、ch3、cx3、chx2或ch2x(x＝卤素)，b0为单个氨基酸残基(优选地具有任选置换的脂族或芳族侧链)；并
且b1由一个或多个氨基酸残基(优选地一个、两个或三个氨基酸残基)组成，任选地包含n末端保护基团，或如wo09118375、wo98/13459中所述的)、或蛋白质类型的蛋白酶抑制剂诸如rasi、basi、wasi(稻、大麦和小麦的双官能α
‑
淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂)或ci2或ssi。在一些实施方案中，本文所用的酶由成品组合物中存在的可向酶提供的水溶性锌(ii)、钙(ii)和/或镁(ii)离子以及其他金属离子(例如钡(ii)、钪(ii)、铁(ii)、锰(ii)、铝(iii)、锡(ii)、钴(ii)、铜(ii)、镍(ii)和氧钒(iv))源来稳定。
128.优选地在洗涤液体中，内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶和其他任选的酶可以对应于每升洗涤液体0.001mg至100mg酶蛋白的量、优选地每升洗涤液体0.005mg至5mg酶蛋白的量、更优选地每升洗涤液体0.01mg至1mg酶蛋白的量、并且具体地以每升洗涤液体0.1mg至1mg酶蛋白的量来添加。
129.本文所述和受权利要求书保护的本发明的范围不受本文所公开的具体方面的限制，因为这些方面旨在举例说明本发明的若干方面。任何等同的方面旨在被包括在本发明的范围内。实际上，除了本文所示和所述的那些之外，根据前面的描述，本发明的各种修改对于本领域的技术人员将变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。如发生矛盾，将以本公开及其所包括的定义为准。
130.棉的干燥可通过家庭或工业环境中采用的普通方法中的任一种而实现。该干燥空气可加热至约15℃至约400℃、约25℃至约200℃、约35℃至约100℃、或甚至约40℃至约85℃，并且用于烘干机中以干燥表面和/或织物。洗涤液体优选地具有约4至约10.5的ph。酶和任选的清洁助剂可在溶液中以约500ppm至约15,000ppm的总浓度使用。水温通常在约5℃至约90℃的范围内。水与织物的比率通常为约1:1至约30:1。
131.实施例
132.实施例1：包含内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶的洗涤性能
133.棉上内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶的洗涤性能在液体衣物洗涤剂的环境中如下进行测定：
134.使用由copley scientific ltd(nottingham,u.k)提供的tergotometer洗涤剂测试仪来使由warwick equest ltd(consett,u.k)提供的5cm
×
5cm针织棉样本与包含内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶的水性洗涤液体接触。用加热至40℃的400ml自来水(6.5格令每美制加仑)填充两个罐，并且向每个罐中加入1.04ml ariel液体(2019年2月购自于英国的asda stores ltd，产品代码：6016650)。
135.然后搅拌这两个罐，并且经由移液管将0.4mg活性内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶(cz0861，批号18011，得自nzytech，lisbon，portugal)加入到两个罐中的一个罐中，获得1ppm洗涤浓度的活性内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶。该酶被供应商描述为属于糖基水解酶家族16并且类芽孢杆菌属的内源性酶，并且通过分析确认其具有与seq id no:1有超过98％的同一性的多肽序列。在测试期间，将温度保持在40℃。30分钟之后，排出洗涤水，并且在400ml冷自来水(6.5格令每美制加仑)中漂洗织物两次，每次5分钟，然后将经洗涤的污渍样本平放在架子上以在环境条件下干燥。
136.实施例2：液体洗涤剂组合物的内切
‑
β
‑
葡聚糖酶的洗涤性能的比较
137.重复上述过程，但是使用两个污渍样本，每个样本包括五个污渍，在测试前分析图像的cielab值(digieye，verivide，leicester，u.k.)。使用以下中的每一种进行重复测试：
0.4mg活性内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶(cz0861，批号18011，得自nzytech，lisbon，portugal)；0.4mg活性内切
‑
β
‑
1,3(4)
‑
葡聚糖酶(来自嗜热梭菌(clostridium thermocellum)的e
‑
licact，批号160201b，得自megazyme，bray co.wicklow，ireland)；和0.4mg活性内切
‑
β
‑
1,4
‑
葡聚糖酶(celluclean 5000l，批号cen010785，得自novozymes a/s，bagsvaerd，denmark)。
138.对于每种酶，该过程都执行四次，在两个罐之间交替处理。这导致每次总共处理40个经洗涤的污渍，即4次外部平行测定，每个平行测定包括5个污渍的2个样本。如前所述分析经洗涤的污渍的cielab，并且使用下列公式计算去污指数(sri)：
[0139][0140]
其中
[0141][0142]
并且
[0143][0144]
处理srici(95％)不存在573.4内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶742.0内切
‑
β
‑
1,3(4)
‑
葡聚糖酶571.6内切
‑
β
‑
1,4
‑
葡聚糖酶561.8
[0145]
结果显示，仅有根据本发明的内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶显著改善了棉花中的彩妆污渍去除效果，将去除率从57％提升至74％。这种改善是非常显著的并且是肉眼可见的。
[0146]
洗涤剂实施例
[0147]
将任何下列洗涤剂实施例加入到水中，适于形成本文的水性洗涤液体。
[0148]
实施例1
‑
6：设计用于手洗或顶部加载式洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
[0149][0150][0151]
实施例7
‑
13：设计用于前加载式自动洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
[0152]
[0153][0154]
*脱氧核糖核酸酶显示为每100g洗涤剂的活性酶毫克数。
[0155]
实施例14
‑
21：重垢型液体衣物洗涤剂组合物
[0156]
[0157]
[0158][0159]
实施例22
‑
28：单位剂量衣物洗涤剂组合物。此类单位剂量制剂可包括一个或多个隔室。
[0160]
[0161][0162]
实施例29：多隔室单位剂量组合物
[0163]
下文中提供了本发明的多隔室的单位剂量衣物洗涤剂配方。在这些实施例中，单位剂量具有三个隔室，但类似的组合物能够以两个、四个或五个隔室被制得。用于包封所述隔室的膜是聚乙烯醇。
[0164]
[0165][0166]
多隔室配方
[0167][0168]
实施例30
‑
33：本发明的织物软化剂组合物
[0169]
[0170][0171]
针对组合物实施例1
‑
33的原材料和说明
[0172]
具有c11
‑
c18平均脂族碳链链长的直链烷基苯磺酸盐，
[0173]
c12
‑
18二甲基羟乙基氯化胺
[0174]
ae3s是c12
‑
15烷基乙氧基(3)硫酸盐
[0175]
ae7是c12
‑
15醇乙氧基化物，具有7的平均乙氧基化度
[0176]
ae9是c12
‑
16醇乙氧基化物，具有9的平均乙氧基化度
[0177]
hsas是如us 6,020,303和us 6,060,443所公开的具有约16
‑
17的碳链长度的中间支化伯烷基硫酸盐
[0178]
聚丙烯酸酯mw 4500是由basf提供的
[0179]
羧甲基纤维素为由cp kelco(arnhem,netherlands)供应的v
[0180]
chec是阳离子改性的羟乙基纤维素聚合物。
[0181]
膦酸盐螯合剂是，例如，二亚乙基四胺五乙酸(dtpa)羟乙烷二磷酸盐(hedp)
[0182]
cellucleantm、和均是novozymes(bagsvaerd，denmark)的产品。
[0183]
purafect是genencor international，palo alto，california，usa的产品
[0184]
荧光增白剂1是ams，荧光增白剂2是cbs
‑
x，直接紫9是violet bn
‑
z nobs是壬酰氧苯磺酸钠
[0185]
taed是四乙酰基乙二胺
[0186]
s
‑
acmc为与c.i.活性蓝19产品名azo
‑
cm
‑
cellulose
[0187]
去垢剂为pf
[0188]
丙烯酸/马来酸共聚物的分子量为70,000，丙烯酸根与马来酸根的比率为70:30
[0189]
edds是乙二胺
‑
n,n'
‑
二琥珀酸的钠盐，(s,s)异构体抑泡剂附聚物是由dow corning，midland，michigan，usa提供的
[0190]
hsas是中间支化的烷基硫酸盐
[0191]
紫ct聚合物调色染料由milliken，spartanburg，south carolina，usa提供
[0192]
聚乙氧基化偶氮噻吩染料为紫dd
tm
聚合物调色染料，由milliken，spartanburg，south carolina，usa提供
[0193]
1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的聚环氧乙烷共聚物，其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。聚环氧乙烷主链的分子量为约6000，并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比为约40至60，并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
[0194]
2聚乙烯亚胺(mw＝600)，每个
‑
nh具有20个乙氧基化基团。
[0195]
3两亲性烷氧基化聚合物是聚乙烯亚胺(分子量＝600)，制备自被衍生为每个
‑
nh包含24个乙氧基化物基团且每个
–
nh包含16个丙氧基化物基团的聚合物。
[0196]
4淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0197]
5在所有这些实施例中脱氧核糖核酸酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示，该洗涤剂任选地掺混己糖胺酶。脱氧核糖核酸酶可包含微量的超氧化物歧化酶。
[0198]
66在所有这些实施例中内切
‑
β
‑
1,3
‑
葡聚糖酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0199]
a proxel gxl，1,2
‑
苯并异噻唑啉
‑3‑
酮的20％双丙二醇水溶液，由lonza提供。
[0200]
b n,n
‑
双(羟乙基)
‑
n,n
‑
二甲基氯化铵脂肪酸酯。该材料的母体脂肪酸的碘值介于18和22之间。得自evonik的材料包含有游离脂肪酸形式的杂质、n,n
‑
双(羟乙基)
‑
n,n
‑
二甲基氯化铵脂肪酸酯的单酯形式的杂质、和n,n
‑
双(羟乙基)
‑
n
‑
甲胺的脂肪酸酯形式的杂质。
[0201]
c由dow corning提供，8％的活性
[0202]
d如us 8,765,659中所述，表达为100％包封的香料油
[0203]
ecde，由basf提供的阳离子聚合增稠剂
[0204]
f n,n
‑
二甲基辛酰胺和n,n
‑
二甲基癸酰胺，重量比为约55:45，商品名m
‑8‑
10来自stepan公司
[0205]
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。