一种超氧化物歧化酶的生产方法与流程

1.本发明属于农产品生物化学领域，尤其是涉及一种超氧化物歧化酶的生产方法。


背景技术：

2.超氧化物歧化酶（sod），是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。sod具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。sod在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。
3.sod 在蔬菜水果中含量较高，如香蕉、山楂、刺梨、猕猴桃、大蒜等，sod 的活性在果皮中高于果肉，在新鲜水果中高于放置后的水果。然而目前市场上存在的大多是用果肉进行sod的提取，因为从果叶中提取sod需要大量的有机溶剂，但容易残留较多的有机溶剂，且工艺复杂，提取量低。


技术实现要素：

4.针对上述背景技术中存在的问题，本发明提供一种超氧化物歧化酶的生产方法，主要是利用果叶进行sod的提取，其技术方案是这样的：一种超氧化物歧化酶的生产方法，包括以下步骤：s1:取新鲜的果叶，用破碎机将果叶作破碎处理，形成果叶浆料；s2：取出果叶浆料加入缓冲液，果叶浆料和缓冲液的重量比例按1:5
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8混合，将混合液的ph值控制在6.8
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8间，将混合液倒入搅拌机中匀速搅拌，搅拌速度在20
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40rad/min,搅拌温度控制在20℃
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28℃之间，搅拌时间30
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50分钟；s3：搅拌完成之后将混合液倒出，置于恒温在20℃
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28℃的环境中静置15
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20h，静置结束后将混合液置于离心机中作离心处理，得到上清液，滤除沉淀物；s4：将离心得到的上清液用生物超滤膜进行过滤，过滤时在常温中进行，ph值控制在6.8
‑
8间，滤除液即为高纯度超氧化物歧化酶（sod）溶液；s5：将得到的高纯度超氧化物歧化酶（sod）溶液在低温下干燥处理得到超氧化物歧化酶的干粉，干燥的温度控制在2
‑
5℃间干燥8
‑
12小时。
5.进一步的，所述的新鲜果叶包括银杏叶、甘薯叶、豆叶、山楂叶、马铃薯叶、杨树叶、香蕉叶、大蒜叶、苹果叶等。
6.进一步的，所述的新鲜果叶破碎的粒度在3
‑
6目。
7.进一步的，所述的缓冲液由浓度为25%
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35%的氯化钠溶液和10%
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20%的磷酸盐溶液按质量1:1.2
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1.5的比例溶和。
8.进一步的，所述的s3中离心机的离心转速在3000
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4000rad/min。
9.进一步的，所述的s4中生物超滤膜自网络中购买所得。
10.进一步的，所述的s4中上清液的浊度小于6ntu。
11.本发明的有益效果是：1.采用的是原材料是新鲜果叶，是含有sod最多的部位，且原料广泛成本低。
12.2.采用的生物膜超滤得到的超氧化物歧化酶（sod）纯度高达94%，相比较传统的工艺盐析法的80%要高出很多。
附图说明
13.图1是本发明的工艺流程图。
具体实施方式
14.下面结合附图和具体实施方式对本发明的内容做进一步的详细描述。
15.一种超氧化物歧化酶的生产方法，包括以下步骤：s1:取新鲜的果叶，用破碎机将果叶作破碎处理，形成果叶浆料；s2：取出果叶浆料加入缓冲液，果叶浆料和缓冲液的重量比例按1:5
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8混合，将混合液的ph值控制在6.8
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8间，将混合液倒入搅拌机中匀速搅拌，搅拌速度在20
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40rad/min,搅拌温度控制在20℃
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28℃之间，搅拌时间30
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50分钟；s3：搅拌完成之后将混合液倒出，置于恒温在20℃
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28℃的环境中静置15
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20h，静置结束后将混合液置于离心机中作离心处理，得到上清液，滤除沉淀物；s4：将离心得到的上清液用生物超滤膜进行过滤，过滤时在常温中进行，ph值控制在6.8
‑
8间，滤除液即为高纯度超氧化物歧化酶（sod）溶液；s5：将得到的高纯度超氧化物歧化酶（sod）溶液在低温下干燥处理得到超氧化物歧化酶的干粉，干燥的温度控制在2
‑
5℃间干燥8
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12小时。
16.为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的新鲜果叶包括银杏叶、甘薯叶、豆叶、山楂叶、马铃薯叶、杨树叶、香蕉叶、大蒜叶、苹果叶等，优选山楂叶和大蒜叶，山楂叶和大蒜叶是sod含量最高的果叶，故优选。
17.为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的新鲜果叶破碎的粒度在4目，这样可以在提高后续与混合缓冲液的效果。
18.为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的缓冲液由浓度为25%
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35%的氯化钠溶液和10%
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20%的磷酸盐溶液按质量1:1.2
‑
1.5的比例溶和。
19.为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的s3中离心机的离心转速在3000
‑
4000rad/min。
20.为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的s4中生物超滤膜自网络中购买所得。
21.为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的s4中上清液的浊度小于6ntu。
22.实施例1选用新鲜山楂叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为5目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:7混合，缓冲液由30%的氯化钠溶液和15%的磷酸钾溶液按1:1.3的比例进行溶和，ph值控制在7
‑
7.5之间，搅拌机的搅拌速度在30rad/min，搅拌温度控制在24℃，搅拌40分钟后置于24℃的环境中静置18小时，在离心速率在3000转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进
行过滤，在ph值控制在7
‑
7.5之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在2℃的环境中干燥10小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
23.实施例2选用新鲜大蒜叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为4目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:8混合，缓冲液由25%的氯化钠溶液和20%的磷酸钾溶液按1:1.2的比例进行溶和，ph值控制在6.8
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7.2之间，搅拌机的搅拌速度在40rad/min，搅拌温度控制在23℃，搅拌40分钟后置于24℃的环境中静置18小时，在离心速率在3500转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在ph值控制在6.8
‑
7.2之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在3℃的环境中干燥12小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
24.实施例3选用新鲜大蒜叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为3目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:6混合，缓冲液由30%的氯化钠溶液和15%的磷酸钾溶液按1:1.4的比例进行溶和，ph值控制在7
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7.5之间，搅拌机的搅拌速度在40rad/min，搅拌温度控制在23℃，搅拌40分钟后置于22℃的环境中静置16小时，在离心速率在4000转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在ph值控制在7
‑
7.5之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在2℃的环境中干燥10小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
25.实施例4选用新鲜苹果叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为5目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:8混合，缓冲液由27%的氯化钠溶液和18%的磷酸钾溶液按1:1.3的比例进行溶和，ph值控制在6.8
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7.3之间，搅拌机的搅拌速度在35rad/min，搅拌温度控制在25℃，搅拌35分钟后置于24℃的环境中静置15小时，在离心速率在3500转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在ph值控制在6.8
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7.3之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在4℃的环境中干燥12小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
26.实施例5选用新鲜杨树叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为4目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:7混合，缓冲液由24%的氯化钠溶液和15%的磷酸钾溶液按1:1.2的比例进行溶和，ph值控制在7
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7.2之间，搅拌机的搅拌速度在35rad/min，搅拌温度控制在25℃，搅拌35分钟后置于22℃的环境中静置14小时，在离心速率在3200转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在ph值控制在7
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7.2之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在3℃的环境中干燥10小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
27.实施例6选用新鲜大蒜叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为4目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:8混合，缓冲液由25%的氯化钠溶液和20%的磷酸钾溶液按1:1.3的比例进行溶和，ph值控制在6.8
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7.3之间，搅拌机的搅拌速度在40rad/min，搅拌温度控制在24℃，搅拌40分钟后置于24℃的环境中静置15小时，在离心速率在3500转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在ph值控制在6.8
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7.3之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在2℃的环境中干燥12小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
28.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修
改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。