提高胰高血糖素样肽六连体在毕赤酵母中表达水平的方法与流程

技术特征：
1.一种提高胰高血糖素样肽六连体在毕赤酵母中表达水平的方法，包括：构建胰高血糖素样肽六连体基因酵母表达载体；将所构建的胰高血糖素样肽六连体基因酵母表达载体转化到宿主毕赤酵母菌株中，诱导胰高血糖素样肽六连体在宿主毕赤酵母菌株中进行重组表达；其特征在于，在诱导胰高血糖素样肽六连体在宿主毕赤酵母菌株中进行重组表达时，将宿主毕赤酵母菌株中的gese基因敲除或进行突变。2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的胰高血糖素样肽六连体基因的核苷酸序列为seq id no.1所示；所述的gese基因的核苷酸序列为seq id no.2所示。3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的宿主毕赤酵母菌株为毕赤酵母表达菌株gs115。4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，将宿主毕赤酵母菌株中的gese基因敲除或进行突变的方法包括：采用crispr/cas9基因编辑方法针对gese基因的靶序列构建gese基因编辑载体，将gese基因编辑载体转化到含有胰高血糖素样肽六连体基因的宿主毕赤酵母表达菌株中，将宿主毕赤酵母表达菌株中的gese基因敲除；或者是构建gese基因敲除载体，将宿主毕赤酵母表达菌株中的gese基因敲除或进行突变。5.一种胰高血糖素样肽六连体基因酵母表达载体，其特征在于，其构建方法包括：将胰高血糖素样肽六连体基因和α信号肽序列与线性化载体pgap9k在同源重组酶作用下通过同源重组后转化大肠杆菌感受态，挑选阳性菌株得到胰高血糖素样肽六连体基因酵母表达载体。6.按照权利要求5所述的胰高血糖素样肽六连体基因酵母表达载体，其特征在于，所述胰高血糖素样肽六连体基因的核苷酸序列为seq id no.1所示。7.一种gese基因编辑载体，其特征在于，其构建方法包括：根据gese基因序列设计得到seq id no.3所示的靶位点序列，根据该靶位点序列设计引物进行pcr扩增：将pcr扩增产物与经酶切线性化的crispr/cas9质粒通过同源重组转化大肠杆菌，挑选阳性菌株得到gese基因编辑载体。8.按照权利要求7所述的gese基因编辑载体，其特征在于，所述的gese基因的核苷酸序列为seq id no.2所示；所述的引物的核苷酸序列为seq id no.4
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seq id no.11所示。9.权利要求5所述的胰高血糖素样肽六连体基因酵母表达载体以及权利要求权利要求7所述的gese基因编辑载体在提高胰高血糖素样肽六连体在毕赤酵母中表达水平中的应用。10.按照权利要求9所述的应用，其特征在于，包括：将胰高血糖素样肽六连体基因酵母表达载体sali线性化后通过电击转化导入宿主毕赤酵母基因组中得到胰高血糖素样肽六连体毕赤酵母表达菌株；将gese基因编辑载体通过电击转化导入到胰高血糖素样肽六连体毕赤酵母表达菌株中，获得gese基因敲除的胰高血糖素样肽六连体高表达毕赤酵母菌株；诱导胰高血糖素样肽六连体基因在宿主毕赤酵母中重组表达。

技术总结
本发明公开了提高胰高血糖素样肽六连体在毕赤酵母中表达水平的方法。本发明基于转录组测序分析毕赤酵母低水平表达菌株和高水平表达菌株的差异基因，筛选出一个转录水平差异显著的新基因GESE。本发明利用毕赤酵母CRISPR/Cas9基因敲除技术敲除毕赤酵母宿主中GESE基因后发现6


技术研发人员：杨彩峰 王楠 彭华康 郭文芳 王梦琪 李刚强 刘德虎
受保护的技术使用者：中国农业科学院生物技术研究所
技术研发日：2021.09.06
技术公布日：2021/10/8