解淀粉芽孢杆菌制剂及其在防治细菌性病害中的应用的制作方法

1.本发明涉及生物防治技术领域，更具体地说是涉及解淀粉芽孢杆菌制剂及其在防治细菌性病害中的应用。


背景技术：

2.细菌性病害是由细菌病菌侵染所致的病害，如软腐病、溃疡病、青枯病等。侵害植物的细菌都是杆状菌，大多数具有一至数根鞭毛，可通过自然孔口(气孔、皮孔、水孔等)和伤口侵入，借流水、雨水、昆虫等传播，在病残体、种子、土壤中过冬，在高温、高湿条件下容易发病。
3.防治细菌性病害的方式依然是抗病育种为主，化学防治为辅。其中育种由于周期长，投入成本高而受限制；化学防治具有着快捷、廉价、高效的，但目前对细菌性病害有效的药剂主要有：铜制剂、锌制剂、抗生素类、噻霉酮等少数农药。但频繁使用化学农药及细菌繁殖遗传变异快和适合度高的特点，使得病原细菌快速产生抗性，影响药剂防治效果。而利用生防菌的生物防治方法可有效解决及避免药剂的抗性问题，生物防治具有高效且无毒、无害、无污染、不产生抗药性，不仅符合人们对绿色农产品的需求，而且为农业的可持续发展提供了保障，因此，植物细菌性病害生物防治的研究越来越受到重视。
4.芽孢杆菌(bacillus spp.)在土壤中普遍存在，是存在于土壤和植物微生态系统中的优势微生物种群之一，由于产生内生芽孢，具有较强的抵抗外界环境压力的能力，能够抵抗所生存的环境中由于干燥、热和紫外辐射所造成的伤害，维持自身生存能力不受影响，这个生物学特征使芽孢杆菌具有非常良好的应用前景，特别是在使用活菌制剂的生物制品中表现出强大的生命力。芽孢杆菌种类繁多，数量巨大，能够产生多种多样的生理活性物质和代谢产物，具有广泛的工业应用前景。
5.中国授权专利cn103087951b公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。本发明的解淀粉芽孢杆菌的菌株号为mh71，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为cgmccno.6978。解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)mh71对果蔬作物上的灰霉病菌、镰刀病菌、褐腐、根腐及炭疽病菌等多种病原真菌和大白菜黑腐病、平菇褐斑病和黄瓜角斑病菌等病原细菌具有明显的抑制作用。解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)mh71繁殖速度快，能够人工培养，抗逆能力强，尤其是对真菌引起的甘蓝枯萎病等土传病害的防治具有重要意义。
6.中国专利申请cn112694998a公开了一种解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)zn
‑
s2，其保藏号：cgmccno：18962。其还同时公开了上述解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)zn
‑
s2的用途：用于抑制植物病原细菌的生长，从而防控植物细菌性病害。
7.然而，随着时代的发展和耐药性的提升，单独的解淀粉芽孢杆菌用于防治细菌性病害已经难以实现较好的效果。因此，本领域技术人员也尝试将解淀粉芽孢杆菌与其它药物联合应用，以提高防治效果。现有技术虽然提到了解淀粉芽孢杆菌制剂可以与其他的杀
真菌农药、植物生长调节剂混合使用，但如何保证所混药剂对解淀粉芽孢杆菌无副作用的同时，还能够提高防治效果，这仍是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
8.在本技术人的前期研究中，提出将螺旋藻多糖与枯草芽孢杆菌制剂混合施用，不仅不会对枯草芽孢杆菌制剂本身产生副作用，还能有效提高对十字花科根肿病的防治效果以及增产增收。然而，螺旋藻多糖对于解淀粉芽孢杆菌的活性缺乏实质性的影响，因此，本发明的申请人针对解淀粉芽孢杆菌进一步研究，发现螺旋藻多糖对其活性提升具有显著的意义，本发明正是基于这一发现才得以实现。


技术实现要素：

9.基于上述背景技术，本发明所要解决的技术问题在于提供解淀粉芽孢杆菌制剂及其在防治细菌性病害中的应用。为了实现本发明的发明目的，拟采用如下技术方案：
10.本发明一方面涉及解淀粉芽孢杆菌制剂在防治细菌性病害中的应用，所述解淀粉芽孢杆菌制剂含有解淀粉芽孢杆菌和螺旋藻多糖。螺旋藻多糖(spriulina polysaccharides)是从螺旋藻提取出的生理活性多糖，无毒。通常未无色的或淡黄色粉末，溶于水，不溶于醇和油脂。现有技术报道螺旋藻多糖药理具有抗辐射损伤和改善放、化疗引起的副反应作用，因此对肿瘤患者是食疗佳品，本发明首次提出将螺旋藻多糖与解淀粉芽孢杆菌制剂混合施用，不仅不会对解淀粉芽孢杆菌制剂本身产生副作用，还能有效提高对细菌性病害的防治效果以及增产增收。
11.在本发明的一个优选实施方式中，所述解淀粉芽孢杆菌与螺旋藻多糖的重量比为10：0.5
‑
2；优选为10：0.8
‑
1.2。本发明的制剂以特定的比例混合解淀粉芽孢杆菌和螺旋藻多糖，有助于提高防治效果。
12.在本发明的一个优选实施方式中，所述解淀粉芽孢杆菌为菌株保藏编号：cicc10081的解淀粉芽孢杆菌，其含量为16
‑
22
×
108cfu/g制剂。
13.本发明另一方面还涉及一种防治细菌性病害的制剂，所述制剂含有重量比为10：0.5
‑
2的解淀粉芽孢杆菌与螺旋藻多糖；重量比优选为10：0.8
‑
1.2。优选的，所述细菌性病害为水稻白叶枯病。
14.在本发明的一个优选实施方式中，所述解淀粉芽孢杆菌制剂为干粉制剂。
15.在本发明的一个优选实施方式中，所述干粉制剂真空包装并且常温保存。
具体实施方式
16.为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
17.如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
18.实施例1
19.取解淀粉芽孢杆菌(菌株保藏编号：cicc 10081)干粉剂(含量8
×
108cfu/g)10重量份与1重量份螺旋藻多糖粉末混合均匀，至于真空密封袋中常温保存。3个月后检测其中
解淀粉芽孢杆菌的数量，为7
×
108cfu/g，死亡率为3.7％。单独的解淀粉芽孢杆菌干粉剂储存3个月后的死亡率为15％。由此说明螺旋藻多糖对于解淀粉芽孢杆菌的活性没有显著的影响，并且还具有一定的保护作用。
20.实施例2：
21.取解淀粉芽孢杆菌干粉剂(含量8
×
108cfu/g)10重量份与2重量份螺旋藻多糖粉末混合均匀，至于真空密封袋中常温保存。3个月后检测其中解淀粉芽孢杆菌的数量，为6
×
108cfu/g，死亡率为10％，由此说明过量的螺旋藻多糖对于解淀粉芽孢杆菌的活性有一定的影响，但仍具有一定的保护作用。
22.实施例3：
23.取解淀粉芽孢杆菌干粉剂(含量8
×
108cfu/g)10重量份与0.5重量份螺旋藻多糖粉末混合均匀，至于真空密封袋中常温保存。3个月后检测其中解淀粉芽孢杆菌的数量，为7
×
108cfu/g，死亡率为8.1％，由此说明螺旋藻多糖的量对于解淀粉芽孢杆菌的保护作用有实质性的影响。
24.实施例4：解淀粉芽孢杆菌制剂茎叶喷雾处理防治水稻白叶枯病的效果评价
25.(1)水稻盆栽苗的制备：将水稻种子经表面杀菌后，置于30℃人工气候箱中进行无菌水浸种催芽3d；同时将栽培土高压蒸汽灭菌(121℃；110kpa)50min，25℃培养箱中放置24h后再重复灭菌一次，土壤冷却后装盆，将发芽的水稻种子播种于长宽为20cm
×
15cm的盆钵中，每盆播20粒，水稻苗待长至4叶期时供试验用。
26.(2)接种处理：待水稻苗长至4叶期时，接种水稻白叶枯病原菌，接种保湿24h后。将实施例1
‑
3所述制剂和作为对照的解淀粉芽孢杆菌干粉制剂，用无菌水稀释1000倍后喷雾处理(喷雾2次，间隔3d)步骤(1)所述水稻植株，室温30℃，相对湿度90％左右，保湿培养。待空白对照组发病叶面积约为1/2时，测量叶片的发病面积，并计算防治效果，其中，防治效果＝(对照病斑长度
‑
处理病斑长度)/对照病斑长度
×
100％。
27.(3)实验结果如表1所示。实验结果实施例的解淀粉芽孢杆菌制剂对细菌性病害的防治效果明显优于空白对照组和阳性对照组，其中以实施例1的制剂效果最佳。
28.表1解淀粉芽孢杆菌制剂对细菌性病害的防治效果
29.[0030][0031]
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。