用于同种异体疗法的改良的干细胞群的制作方法

技术特征：

1.选择适于同种异体疗法，特别是适于利用同种异体疗法治疗预先致敏患者或再次治疗患者的干细胞(SC)群的体外方法，其包括以下步骤：

a)在能够在所述SC群中诱导最大HLA-I类表达的IFN-γ浓度存在下培养所述SC群的样品(测试样品)，并在缺乏IFN-γ的情况下单独培养所述SC群的样品(对照样品)；

b)在使得所述HLA-I类抗体与所述测试样品和所述对照样品中表达的HLA-I类结合的条件下，使所述测试样品和所述对照样品与一系列不同浓度的HLA-I类抗体接触；

c)向所述测试样品和所述对照样品中加入补体，使得结合的HLA-I类抗体被补体饱和，并诱导补体依赖性细胞毒性(CDC)；

d)通过测量在所述测试样品和所述对照样品中诱导的细胞裂解，确定一系列不同浓度的所述HLA-I类抗体的CDC；

e)确定在所述测试样品和所述对照样品中诱导50％最大CDC(EC50值)的HLA-I类抗体浓度；以及

f1)如果所述对照样品的EC50值与所述测试样品的EC50值的比例小于1.25，优选地小于1.0，更优选地小于0.5；特别优选地小于0.25，则选择所述SC群用于同种异体疗法；或

f2)如果所述测试样品的EC50值为至少3.5ng/ml，优选地至少9ng/ml，更优选地至少15ng/ml，特别优选地至少20ng/ml的所述HLA-I类抗体，则选择所述SC群用于同种异体疗法。

2.如权利要求1所述的体外方法，其中所述方法还包括以下步骤：确定所述测试样品和所述对照样品中CD46的表达水平；以及如果所述测试样品中CD46的表达与所述对照样品中CD46的表达的比例大于2.0，优选地大于2.5，特别优选地大于3.0，则选择所述SC群用于同种异体疗法。

3.如权利要求1或2所述的体外方法，其中所述SC群是间充质干细胞(MSC)群，优选地人MSC群，更优选地所述间充质干细胞群是骨髓来源的干细胞(BM-MSC)群，或者所述间充质干细胞群是脂肪组织来源的干细胞(ASC)群，甚至更优选地所述ASC群表达CD29、CD73、CD90和/或CD105。

4.如权利要求1至3中任一项所述的体外方法，其中能够在所述SC群中诱导最大HLA-I类表达的IFN-γ浓度为约0.5至约30ng/ml，优选地约1至约15ng/ml，更优选地约2至约4ng/ml，优选地所述能够在所述SC群中诱导最大HLA-I类表达的IFN-γ浓度为3ng IFN-γ/ml，优选地施加48小时的时间段。

5.如权利要求1至4中任一项所述的体外方法，其中所述HLA-I类抗体与HLA-A、HLA-B和/或HLA-C特异性结合，优选地所述HLA-I类抗体与HLA-A、HLA-B和HLA-C特异性地结合，更优选地所述HLA-I类抗体是鼠单克隆抗体，甚至更优选地所述HLA-I类抗体与由能从ATCC(名称：HB-95)或ECACC(编号：84112003)获得的杂交瘤克隆w6/32产生的抗体对HLA-A具有基本上相同的结合亲和力，最优选地所述抗体由能从ATCC(名称：HB-95)或ECACC(编号：84112003)获得的杂交瘤克隆w6/32产生。

6.如权利要求1至5中任一项所述的体外方法，其中使用了在约1至约50ng/ml范围内的两种或三种不同浓度的HLA-I类抗体，优选地使用了在约1至约50ng/ml范围内的四种或五种不同浓度的所述HLA-I类抗体，更优选地使用了在约1至约50ng/ml范围内的六种或七种不同浓度的所述HLA-I类抗体，甚至更优选地使用了在约1至约50ng/ml范围内的八种或九种不同浓度的所述HLA-I类抗体，并且最优选地所述HLA-I类抗体的所述范围的不同浓度为1ng/ml、3ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml和50ng/ml。

7.如权利要求1至6中任一项所述的体外方法，其中权利要求1的步骤(c)中所用的补体来自血清，优选地所述血清未经热处理，更优选地所述血清来自兔、山羊或绵羊，最优选地，所述血清来自兔。

8.如权利要求1-7中任一项所述的体外方法，其中所述补体来自血清并且所得血清浓度为50％至83.33％(v/v)，优选地所得血清浓度为66.66％至83.33％(v/v)。

9.如权利要求1-8中任一项所述的体外方法，其中通过测量活的或裂解的细胞的选择性化学发光或荧光染料，或者从裂解的细胞释放的放射性试剂来确定所述细胞裂解。

10.适于同种异体疗法，特别是适于利用同种异体疗法治疗预先致敏的患者或再次治疗的SC群，其具有以下性质中的任一种：

i)对照样品的EC50值与测试样品的EC50值的比例小于1.25，优选地小于1.0，更优选地小于0.5，并且特别优选地小于0.25，其中所述EC50值按权利要求1中所示确定；

ii)所述测试样品的EC50值为至少3.5ng/ml HLA-I类抗体，优选地至少9ng/ml，更优选地至少15ng/ml，特别优选地至少20ng/ml HLA-I类抗体，其中所述EC50值按权利要求1中所示确定；和/或

iii)所述测试样品中CD46的表达与所述对照样品中CD46的表达的比例大于2.0，优选地大于2.5，特别优选地大于3.0，其中所述CD46表达按权利要求2中所示确定。

11.如权利要求10所述的SC群，其中通过权利要求1-9中任一项所述的方法选择所述SC群，优选地所述SC群是间充质干细胞(MSC)群，更优选地所述SC群是BM-MSC群或ASC群，甚至更优选地所述SC群是人BM-MSC群或人ASC群。

12.药物组合物，其包含权利要求10或11所述的SC群以及任选地药学上可接受的载体。

13.制备药物组合物的方法，其包括以下步骤：

a)进行权利要求1-9中任一项所述的方法；

b)用至少一种药学上可接受的载体配制所选择的SC群。

14.如权利要求10或11所述的SC群，其用于有需要的患者，优选地预先致敏的患者或经历再次治疗的患者的同种异体干细胞疗法，优选地所述有需要的患者患有选自以下的疾病：瘘、白血病、淋巴瘤、神经退行性疾病、脑和脊髓损伤、心脏病、失明和视力障碍、胰腺β细胞功能丧失、软骨修复、骨关节炎、肌肉骨骼疾病、创伤、不孕症、自身免疫性疾病和炎性疾病如炎性肠病，更优选地所述疾病是瘘，甚至更优选地所述疾病是复杂肛周瘘。

15.同种异体干细胞疗法，其包括向有需要的患者，优选地向预先致敏的患者或经历再次治疗的患者施用权利要求10或11所述的SC群，优选地所述有需要的患者患有选自以下的疾病：白血病、淋巴瘤、神经退行性疾病、脑和脊髓损伤、心脏病、失明和视力障碍、胰腺β细胞功能丧失、软骨修复、骨关节炎、肌肉骨骼疾病、创伤、不孕症、自身免疫性疾病和炎性疾病如炎性肠病，更优选地所述疾病是瘘，甚至更优选地所述疾病是复杂肛周瘘。

技术总结
本发明涉及用于同种异体干细胞疗法，特别是用于预先致敏患者的治疗和用于再次治疗的改良的干细胞群。此外，提供了获得所述干细胞群的方法。另外，本发明涉及包含所述干细胞群的药物组合物及其在同种异体干细胞疗法中的用途。

技术研发人员：奥尔加·德拉罗莎莫拉莱斯;阿尔瓦罗·阿维瓦尔-瓦尔德拉斯;
受保护的技术使用者：泰根尼克斯独资有限公司;
技术研发日：2020.02.26
技术公布日：2021.10.22