miR-29a-3pinhibitor体外诱导人体mBreg细胞的用途及方法与流程

技术特征：
1.mir
‑
29a
‑
3p inhibitor在体外诱导人体mbreg细胞的用途。2.根据权利要求1所述的mir
‑
29a
‑
3p inhibitor在体外诱导人体mbreg细胞的用途，其特征在于：mir
‑
29a
‑
3p通过结合于nfat5靶基因的3’utr区域促进nfat5蛋白的降解。3.根据权利要求1所述的mir
‑
29a
‑
3p inhibitor在体外诱导人体mbreg细胞的用途，其特征在于：mir
‑
29a
‑
3p inhibitor诱导cd19

b细胞向mbreg细胞转化的用途。4.根据权利要求1所述的mir
‑
29a
‑
3p inhibitor在体外诱导人体mbreg细胞的用途，其特征在于：mbreg细胞为cd19

cd24
hi
cd27

breg细胞亚群。5.根据权利要求2所述的mir
‑
29a
‑
3p inhibitor在体外诱导人体mbreg细胞的用途，其特征在于所述cd19

b细胞采用如下步骤分选：第一步：获取外周血单核淋巴细胞，利用血细胞单采仪获取浓缩人外周血单个核细胞50~80ml，与生理盐水或pbs1：1等比例混合，每30ml一份缓慢沿试管壁加入15ml单核淋巴细胞分离液（ficoll）上， 两者不要混匀；20℃、 2300rpm，减速1，离心23分钟，取血浆和ficoll液之间细胞云雾层，得单核淋巴细胞悬液；第二步：将第一步获得的单核淋巴细胞悬液，20℃、1500rpm离心5分钟加入洗涤两次，弃上清，使用血球计数板对细胞数量进行计数，以25ul/10
7 加入pbs重悬细胞；加入5ul/107的cd19 microbeads，室温孵育30分钟，pbs洗涤一次后用4mlautomacs buffer重悬，启动automacs机器，设置阳选程序，分选获得cd19阳性细胞。6.一种应用mir
‑
29a
‑
3p inhibitor分离和体外诱导扩增mbreg细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：第一步：获取外周血单核淋巴细胞的步骤，利用血细胞单采仪获取浓缩人外周血单个核细胞50~80ml，与生理盐水或pbs1：1等比例混合，每30ml一份缓慢沿试管壁加入15ml单核淋巴细胞分离液（ficoll）上， 两者不要混匀；20℃、 2300rpm，减速1，离心23分钟，取血浆和ficoll液之间细胞云雾层，即得单核淋巴细胞悬液；第二步：分选得到cd19 b细胞的步骤，将第一步获得的单核淋巴细胞悬液，20℃、1500rpm离心5分钟加入洗涤两次，弃上清，使用血球计数板对细胞数量进行计数，以25ul/10
7 加入pbs重悬细胞；加入5ul/107的cd19 microbeads，室温孵育30分钟，pbs洗涤一次后用4mlautomacs buffer重悬，启动automacs机器，设置阳选程序，分选获得cd19阳性细胞；第三步：诱导调节性b细胞（breg）的步骤；第二步获得的cd19阳性细胞（breg），20℃、1500rpm离心5分钟加入洗涤两次，弃上清，以0.5*106/ml 的细胞浓度利用培养基重悬，加入b细胞活化因子（baff）和/或mir
‑
29a
‑
3p inhibitor进行培养；第四步：纯度和功能检测的步骤，3天后106个细胞重悬于100微升pbs中，加入cd19 fitc、cd24 perpcy5.5、cd27 apc流式抗体，4℃避光孵育30
‑
45分钟，pbs洗涤两次，使用流式细胞仪检测细胞mbreg细胞的比例。

技术总结
本发明提出一种miR


技术研发人员：夏永祥 李近阳
受保护的技术使用者：江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院）
技术研发日：2021.04.23
技术公布日：2021/10/19