用于预测胞外囊泡(EV)的促血管生成潜力的方法与流程

技术特征：
1.预测胞外囊泡(ev)组合物是否具有促血管生成活性的方法，其包括以下步骤：(a)量化所述ev组合物中的mir
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130a微rna含量，以及(b)量化所述ev组合物中的转化生长因子β(tgfβ)含量；(c)确定mir
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130a含量是否高于第一预定值以及tgfβ含量是否高于第二预定值，其中：当所述mir
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130a含量高于所述第一预定值并且所述tgfβ含量高于所述第二预定值时，则预测所述ev组合物为具有促血管生成活性。2.根据权利要求1所述的方法，其中通过实时聚合酶链反应(实时pcr)将所述mir
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130a含量量化为ct值，并且其中所述mir
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130a含量与所述ct值之间存在负相关。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一预定值是＜30的ct值。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述tgfβ含量通过免疫测定，优选地通过酶联免疫吸附测定(elisa)来测量。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第二预定值是23pg/10
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ev的tgfβ量。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其还包括通过效力测试来量化所述ev组合物的促血管生成活性的步骤(d)，其包括以下步骤：
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通过brdu细胞增殖测定测试所述ev组合物以获得组合物值；
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通过brdu细胞增殖测定测试阴性对照以获得阴性对照值；
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通过brdu细胞增殖测定测试阳性对照以获得阳性对照值；
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通过应用以下公式计算所述brdu细胞增殖测定中所述ev组合物的％促血管生成活性：7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其还包括通过效力测试来量化所述ev组合物的促血管生成活性的步骤(d)，其包括以下步骤：
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通过管生成测定测试所述ev组合物以获得组合物值；
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通过管生成测定测试阴性对照以获得阴性对照值；
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通过管生成测定测试阳性对照以获得阳性对照值；
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通过应用以下公式计算所述管生成测定中所述ev组合物的％促血管生成活性：8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其还包括通过包括根据权利要求6所述的brdu细胞增殖测定和根据权利要求7所述的管生成体外测定二者的效力测试来量化所述ev组合物的促血管生成活性的步骤(d)。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述ev组合物被确定为具有至少50％的促血管生成活性。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述ev来自人细胞。11.制备促血管生成胞外囊泡(ev)的制备物的方法，其包括以下步骤：
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从体液的多种制备物中或从细胞培养物的条件培养基中分离ev；
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以预定的ev浓度从所分离的ev制备一个或更多个样品；
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用根据权利要求1至10中任一项所述的方法预测每个ev样品的促血管生成活性；
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选择其中mir
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130a含量高于所述第一预定值并且tgfβ高于所述第二预定值的样品；以及任选地
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合并两个或更多个活性ev样品，从而获得促血管生成ev的制备物。12.根据权利要求11所述的方法，其中通过实时pcr将所述mir
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130a含量量化为ct值并且所述第一预定值是＜30的ct值。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述第二预定值是23pg/10
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ev的tgfβ量。14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其中所述ev制备物被确定为具有至少50％的促血管生成活性。15.根据权利要求11至14中任一项所述的方法，其中所述ev来自人细胞。16.可通过根据权利要求11至15中任一项所述的方法获得的促血管生成胞外囊泡(ev)的制备物，其中所述制备物中通过实时pcr作为ct值测量的mir
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130a含量为ct＜30，并且所述制备物中的tgfβ含量为>23pg/10
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ev，所述制备物用于受促血管生成治疗积极影响的疾病或损伤的治疗性治疗，或用于伤口愈合。17.促血管生成胞外囊泡(ev)的制备物，其通过实时pcr作为ct值测量的mir
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130a含量为ct<30和/或tgfβ含量为>23pg/10
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ev，其用于受促血管生成治疗积极影响的疾病或损伤的治疗性治疗，或用于伤口愈合。18.根据权利要求16或17所述的制备物，其中所述ev制备物具有至少50％的促血管生成活性。19.根据权利要求16至18中任一项所述应用的制备物，其中所述ev来源于生物流体或者条件细胞或组织培养基。20.根据权利要求19所述应用的制备物，其中所述生物流体是全血、血浆或血清。21.根据权利要求20所述应用的制备物，其中所述ev由健康供体的血清或具有心血管风险因素之患者的血清制备。22.根据权利要求16至21中任一项所述应用的制备物，其中所述疾病或损伤是血管疾病或损伤，或与心血管疾病之风险相关的病症。23.根据权利要求16至22中任一项所述应用的制备物，其中所述疾病或损伤选自急性心肌梗死、急性脑血管疾病、急性和慢性外周动脉疾病、急性肾缺血、肥胖症和糖尿病。

技术总结
本发明涉及用于预测胞外囊泡(EV)，优选血液来源的EV的制备物的促血管生成活性的体外方法，其中所述方法基于对转化生长因子β(TGFβ)和微RNA


技术研发人员：马里亚
受保护的技术使用者：联合细胞EV股份公司
技术研发日：2020.03.13
技术公布日：2021/10/29