抗猪源氨肽酶N蛋白单克隆抗体及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为cgmcc no.18521。2.由杂交瘤细胞株cgmcc no.18521分泌产生的单克隆抗体。3.抗猪源apn蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的氨基酸序列如seq id no.1所示。4.根据权利要求3所述的抗猪源apn蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链恒定区为igg2b，所述单克隆抗体的轻链恒定区为cλ。5.权利要求3所述的单克隆抗体的编码基因，其特征在于，所述基因序列如seq id no.2所示。6.一种体外表达的重组抗猪源apn蛋白的抗体蛋白，其特征在于，所述抗体蛋白由哺乳动物表达载体pires2
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zsgreen1
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apn
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5b36表达，所述重组表达载体pires2
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apn
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5b36包含编码权利要求5所述单克隆抗体的编码基因。7.权利要求6所述的抗体蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：提取杂交瘤细胞株cgmcc no.18521的总rna并进行反转录得到cdna；利用巢氏pcr扩增抗体可变区重链及轻链序列；将抗体重链、轻链序列串联后与pires2
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zsgreen1载体通过无缝克隆连接，经测序验证正确后，转染cho细胞，经g418筛选和流式细胞仪分选获得阳性细胞，建系后开始梯度降低血清浓度，最终获得由无血清培养基培养的稳定表达细胞系pires2
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5b36
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cho；将上述表达细胞系pires2
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cho调至对数期生长后，接种无血清基础培养基dmem f12培养，待细胞密度达到1.0
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2.0
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106/ml以上，离心获得细胞上清，过滤后纯化获得抗体蛋白。8.权利要求2或3所述的单克隆抗体、权利要求5所述的编码基因、权利要求6所述的抗体蛋白在制备预防或治疗肠道疾病药物或疫苗中的应用。

技术总结
本发明公开了一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.18521。本发明还公开了由杂交瘤细胞株CGMCC No.18521分泌产生的单克隆抗体。本发明还公开了单克隆抗体的编码基因，体外表达的重组抗猪源APN蛋白的抗体蛋白及其制备方法，以及抗体蛋白在制备预防或治疗肠道疾病药物或疫苗中的应用。本发明所得到的APN抗体能够特异性地结合猪源APN蛋白，亲和力强、稳定性好，为进一步研究APN的功能，开发基因工程抗体类药物和新型疫苗奠定了基础。类药物和新型疫苗奠定了基础。类药物和新型疫苗奠定了基础。


技术研发人员：夏芃芃 连思琪 吴云平 闫丽 朱国强 赵静 王思权 杨雪琴
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：2021.04.21
技术公布日：2021/10/19