尼可地尔原料药中尼可地尔氮氧化物含量的测定方法与流程

1.本发明涉及一种测定方法，特别涉及尼可地尔原料药中尼可地尔氮氧化物含量的测定方法。


背景技术：

2.尼可地尔是钾通道开放剂，属于冠脉扩张药，可有效治疗心绞痛，近年在临床上得到了广泛的应用。尼可地尔的含量测定方法文献上有报道电化学法、分光光度法，日本药局方(j1p 6)收载了尼可地尔原料药，其含量测定方法为非水滴定法，而这些方法操作比较繁琐，时间成本高，效率低，不利于生产实际中对于制剂的研究。


技术实现要素：

3.本发明的主要目的在于提供尼可地尔原料药中尼可地尔氮氧化物含量的测定方法，能大大的节约了时间成本，且检测准确度高、稳定性好，可以有效解决背景技术中提出的问题。
4.为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
5.尼可地尔原料药中尼可地尔氮氧化物含量的测定方法，包括以下步骤：
6.步骤一，对照品溶液制备
7.称取尼可地尔氮氧化物，置于容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液，备用；
8.步骤二，供试品溶液配制
9.精密称定尼可地尔原料药，置于容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
10.步骤三，空白溶液配制
11.将步骤二的稀释剂标记为空白样；
12.步骤四，测定
13.精密量取供试品溶液、对照品溶液，进样，采用液相质谱联用仪进行分离分析，并记录谱图；
14.进一步地，所述步骤二所用的稀释剂为纯水。
15.优选地，所述步骤一中的对照品储备液的制备过程为：精密称取尼可地尔氮氧化物对照品2mg，置2ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液1；量取0.125ml对照品储备液1 置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液2；精密量取0.1ml对照品储备液2，置25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
16.进一步地，所述步骤二中的供试品溶液的制备过程为供试品溶液：精密称取尼可地尔原料药25mg，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
17.进一步地，所述液相质谱联用仪色谱条件为色谱柱agilentporoshell 120ec-c18 4.6
×
100mm 2.7μm，流动相a：0.1％甲酸水，流动相b：甲醇，流速：0.8ml/min，进样量：
10μl，柱温：35℃，洗脱梯度0-5min，85％a，15％b；5-7min，20％a，80％b；7-10min， 85％a，15％b；离子源为esi源，正离子模式228frag电压135。
18.本发明的有益效果为：
19.一、采用液质联用仪进行分离与检测，设备普及率高，使用成本低廉，从而可以有效地扩大本方法的适用场合及使用范围；
20.二、所用试剂简单，对照品和供试品的处理过程简单，加乙腈溶解即可，且对照品和供试品的使用量小，可以方便、快速地配制成对照品溶液、供试品溶液以及自身对照溶液；
21.三、该检测方法杂质与主成分之间分离度良好，系统稳定性、重复性良好，准确度高，出峰时间快，分析时间短，节约实验成本；
22.利用试验对本发明所提供的检测方法进行了验证，结果表明，本方法的专属性强、精密度好，准确度高，能快速地测定尼可地尔原料药中尼可地尔氮氧化物的量。
附图说明
[0023][0024]
图1为空白样所得的谱图；
[0025]
图2为对照品溶液所得的谱图；
[0026]
图3为尼可地尔氮氧化物标准曲线图；
具体实施方式
[0027]
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
[0028]
1、仪器设备
[0029][0030][0031]
2、试剂与试药
[0032][0033]
实施例1-8
[0034]
色谱条件
[0035][0036][0037]
对照品储备液的制备过程为：精密称取尼可地尔氮氧化物对照品 2mg，置2ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液1；量取0.125ml对照品储备液1置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液2；精密量取0.1ml对照品储备液2，置25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0038]
供试品溶液的制备过程为供试品溶液：精密称取尼可地尔原料药 25mg，置25ml量
瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0039]
取不同批次供试品溶液进样分析，计算尼可地尔氮氧化物的含量。结果见下表。
[0040]
表1各批次尼可地尔原料药中尼可地尔氮氧化物测定结果
[0041]
批号结果批号结果实施例1n.d.实施例5n.d.实施例2n.d.实施例6n.d.实施例3n.d.实施例7n.d.实施例4n.d.实施例8n.d.
[0042]
分析方法验证
[0043]
1.专属性及系统适用性
[0044]
溶液配制
[0045]
空白溶液：纯水
[0046]
对照品溶液
[0047]
精密称取尼可地尔氮氧化物对照品2.095mg，置2ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液1-1(1mg/ml)；量取0.125ml对照品储备液1-1(1mg/ml)，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液2-1(6.25μg/ml)；精密量取0.1ml对照品储备液2-1(6.25 μg/ml)，置25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液std1。
[0048]
精密称取尼可地尔氮氧化物对照品2.085mg，置2ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液1-2(1mg/ml)；量取0.125ml对照品储备液1-2(1mg/ml)，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液2-2(6.25μg/ml)；精密量取0.1ml对照品储备液2-2(6.25 μg/ml)，置25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液std2。
[0049]
实验结果
[0050]
空白溶液在目标峰处无明显干扰，结果详见图1；
[0051]
对照品溶液std1连续进样6针，对照品溶液图谱详见图2，目标峰峰面积rsd 为1％，保留时间rsd为0.01％；std2相对于std1的回收率为102％，结果详见表2。
[0052]
表2：进样精密度和回收率结果
[0053][0054]
[0055]
2.溶液稳定性
[0056]
溶液配制
[0057]
对照品溶液
[0058]
配制同1项专属性及系统适用性下对照品溶液std1，配制后室温放置不同时间，分别进样。
[0059]
加标供试品溶液
[0060]
即6项重复性试验中的加标供试品溶液(100％限度)第一份，配制后室温放置不同时间，分别进样。
[0061]
实验结果
[0062]
对照品溶液室温下下放置28h内各时间点，目标峰峰面积与0h的比值，均在 96％～100％(同一序列)。结果详见表3。
[0063]
表3：对照品溶液各目标杂质峰面积变化结果
[0064]
时间峰面积与0h目标峰峰面积比值0h5364.1929n/a1h5263.461998％4h5316.566096％7.5h5338.1755100％8.5h5348.3745100％18.5h5280.969998％28h5161.145796％
[0065]
加标供试品溶液室温下放置26.5h内各时间点，目标峰峰面积与0h点比值，均在102％～105％(同一序列)。结果详见表4。
[0066]
表4：加标供试品溶液目标杂质峰面积变化结果
[0067][0068][0069]
3.定量限和检测限
[0070]
溶液配制
[0071]
定量限溶液：量取0.02ml 1.1.1.2项下对照品储备液2-1(6.25μg/ml)，置25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。作为定量限溶液。
[0072]
检测限溶液：精密量取3.0ml定量限溶液，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0073]
实验结果
[0074]
各目标杂质峰的定量限的信噪比s/n＝24.6(第一针)，检测限的信噪比s/n＝9.1 结果详见表5。
[0075]
定量限浓度为4.9756ng/ml和检测限浓度为1.4927ng/ml，计算结果见表5。定量限溶液连续进样6针，峰面积rsd为1％。结果详见表5。
[0076]
表5：定量限和检测限结果
[0077][0078]
4.线性和范围
[0079]
溶液配制
[0080]
定量限溶液：即3项定量限和检测限下的定量限溶液。
[0081]
精密量取1.1.1.2项下对照品储备液2-1(6.25μg/ml)0.05ml、0.08ml、0.10 ml、0.15ml、0.20ml分别置5个不同的25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。作为50％～200％各级线性溶液。
[0082]
实验结果
[0083]
目标杂质在loq～200％限度浓度范围内均呈良好线性关系，结果详见表6 和图3。
[0084]
表6：线性结果
[0085][0086]
5.准确度
[0087]
溶液配制
[0088]
对照品溶液
[0089]
即1项专属性及系统适用性下对照品溶液。
[0090]
供试品溶液
[0091]
取尼可地尔原料药(批号：20191203)约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。平行制备2份。称样量如下：
[0092]
名称称样量(mg)spl-125.92spl-225.68
[0093]
加标供试品溶液
[0094]
加标供试品溶液(loq限度)：取尼可地尔原料药(批号：20191203)约 25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解，精密量取0.02ml 1.1.1.2 项下对照品储备液2-1(6.25μg/ml)，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。平行制备 3份。称样量如下：
[0095]
名称称样量(mg)loqre-125.54loqre-221.34loqre-326.80
[0096]
加标供试品溶液(50％限度)：取尼可地尔原料药(批号：20191203)约 25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解，精密量取0.05ml 1.1.1.2 项下对照品储备液2-1(6.25μg/ml)，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。平行制备 3份。称样量如下：
[0097]
名称称样量(mg)50％-126.5250％-226.3550％-324.74
[0098]
加标供试品溶液(100％限度)：即4.6.1.3项下加标供试品(100％限度) 的前三份溶液。
[0099]
加标供试品溶液(150％限度)：取尼可地尔原料药(批号：20191203) 约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解，精密量取0.15ml 1.1.1.2 项下对照品储备液2-1(6.25μg/ml)，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。平行制备3份。称样量如下：
[0100]
名称称样量(mg)150％-124.89150％-226.40150％-326.08
[0101]
实验结果
[0102]
3份loq浓度加标供试品溶液中，目标物质回收率在122％～129％， rsd＝3％。其余9份加标供试品溶液中，目标物质回收率在100％～106％， rsd＝2％结果详见表7。
[0103]
表7：尼可地尔氮氧化物准确度结果
[0104][0105]
6.重复性
[0106]
溶液配制
[0107]
对照品溶液：即1项专属性及系统适用性下对照品溶液。
[0108]
供试品溶液：即5项准确度下供试品溶液。
[0109]
加标供试品溶液
[0110]
加标供试品溶液(100％限度)：取尼可地尔原料药(批号：20191203) 约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解，精密量取0.10ml 1.1.1.2 项下对照品储备液2-1(6.25μg/ml)，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。平行配制 6份。称样量如下：
[0111]
名称称样量(mg)100％-125.49100％-224.32100％-321.15100％-421.15100％-521.13100％-625.70
[0112]
实验结果
[0113]
6份加标供试品溶液，目标物质的回收率均在104％～106％，rsd＝1％。结果详见表8。
[0114]
表8：尼可地尔氮氧化物重复性结果
[0115][0116]
7.中间精密度
[0117]
不同时间、不同人员于同一仪器。
[0118]
溶液配制
[0119]
空白溶液：纯水。
[0120]
对照品溶液：1项专属性及系统适用性下对照品溶液。
[0121]
供试品溶液
[0122]
取尼可地尔原料药(批号：20191203)约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。平行制备2份。称样量如下：
[0123]
名称称样量(mg)spl-125.59spl-221.33
[0124]
加标供试品溶液
[0125]
加标供试品溶液(100％限度)：取尼可地尔原料药(批号：20191203) 约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解，精密量取0.10ml 5.7.1.2 项下对照品储备液2-1(6.25μg/ml)，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。平行制备 6份。称样量如下：
[0126]
名称称样量(mg)100％-126.10100％-226.08
100％-325.60100％-425.83100％-524.89100％-621.16
[0127]
实验结果
[0128]
6份加标供试品溶液的回收率均在102％～104％，rsd＝1％(n＝6)。回收率结果详见表9。
[0129]
表9：中间精密度回收率结果
[0130][0131]
与重复性共12份加标供试品溶液比较，回收率rsd＝1％(n＝12)，结果详见表10。
[0132]
表10：重复性与中间精密度加标供试品溶液比较结果
[0133][0134]
8.耐用性
[0135]
溶液配制
[0136]
空白溶液：纯水。
[0137]
对照品溶液：1项专属性及系统适用性下对照品溶液。
[0138]
供试品溶液：5项准确度下供试品溶液第一份。
[0139]
加标供试品溶液
[0140]
即6项重复性下加标供试品溶液(100％限度)第一份和第二份溶液。
[0141]
实验结果
[0142]
各条件std1连续进样6针，目标峰峰面积rsd均≤20％，保留时间rsd均≤2.0％， std2回收率均在80％～120％之间。结果详见表10。
[0143]
表10：各耐用性条件下尼可地尔氮氧化物系统适应性结果
[0144][0145]
各耐用性条件下加标回收率溶液回收率均在80％～120％之间，方法耐用，结果详见表11。
[0146]
表11：尼可地尔耐用性条件下加标回收率结果
[0147]
[0148]