一种检测替莫唑胺中异氰酸甲酯的方法与流程

1.本发明属于药物技术领域，涉及药物杂质检测分析领域，具体涉及一种检测替莫唑胺中异氰酸甲酯的方法。


背景技术：

2.替莫唑胺(temozolomide)为一种烷化剂型抗癌药物，由英国can research ventures公司首创，schering-plough公司开发，1999年8月经fda批准在美国获准上市，同时在欧洲多国上市。具有广谱抗肿瘤活性[l.h.tsang，et al.cancer chemother pharmacol.27(1991)：342-346]，尤其是对神经胶质瘤(脑癌)和黑色素瘤(皮肤癌)。替莫唑胺的胶囊剂已在欧美批准用于治疗恶性神经胶质瘤。
[0003]
药品的安全有效是当前人们普遍关注的重要问题，替莫唑胺合成工艺中使用了异氰酸甲酯(mic)，mic属剧毒物质。按照ich m7指导原则规定，替莫唑胺属抗癌药，因此根据其服药周期1-10年，得出mic的每日最大摄入限量可按照10μg计算，替莫唑胺日最大服用剂量按照400mg计算，则限度相当于25ppm(0.0025％)，因此，替莫唑胺中mic限度要求不超过25ppm(0.0025％)。然而，我国在替莫唑胺的法定标准中，尚未收载替莫唑胺中有mic的检查方法，标准缺失，国内外均无相关文献报道，无法评价药品质量，存在安全隐患。


技术实现要素：

[0004]
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种检测替莫唑胺中异氰酸甲酯的方法，该方法具有过程简单、使用成本低廉、精密度好、准确度高等特点，能快速地测定替莫唑胺中异氰酸甲酯的含量。
[0005]
本发明是通过以下技术方案实现的：
[0006]
一种检测替莫唑胺中异氰酸甲酯的方法，包括如下步骤：
[0007]
步骤一，对照品溶液制备
[0008]
精密量取异氰酸甲酯，置于容量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，配制对照品溶液；
[0009]
步骤二，供试品溶液制备
[0010]
精密称取替莫唑胺原料药，加乙腈，振摇至固体溶解，配制供试品溶液；
[0011]
步骤三，加标供试品溶液制备
[0012]
精密称取替莫唑胺原料药，精密加入对照品溶液，加乙腈，加盖密封，振摇至固体溶解，配制加标供试品溶液。
[0013]
步骤四，测定
[0014]
精密量取供试品溶液、对照品溶液，进样，采用气质联用仪进行分离分析，并记录谱图；
[0015]
步骤五，计算
[0016]
按外标法以峰面积计算供试品溶液中异氰酸甲酯的含量。
[0017]
本发明的进一步改进方案为：
[0018]
所述步骤四中，所述气质联用仪包括气相色谱仪、质谱仪以及顶空装置；所述气相色谱仪的色谱条件为：进样量为20微升，色谱柱为vf-624ms(以6％氰丙基苯94％二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱，60m
×
0.25mm
×
1.4μm)，载气为高纯氦气(≥99.9％)；载气流速为1.0ml/min；分流比为5:1；升温程序为以40℃为初始柱温，保持4分钟，以30℃/min的速率升至240℃。
[0019]
进一步的，所述质谱仪的质谱条件为：接口温度为250℃；离子源为ei源；离子源温度为230℃；溶剂延迟时间为4.5min；采集时间为5.00～7.26min；特征离子扫描模式(sim)：mic特征离子为57,56，其中57为定量离子。
[0020]
进一步的，所述顶空装置的顶空条件为：恒温炉温度为40℃；样品流路温度为80℃；传输线温度为65℃；样品瓶加压用气压为30kpa；平衡时间为15min；循环时间为25min。
[0021]
进一步的，所述步骤一对照品溶液制备的过程为：精密量取异氰酸甲酯20μl，置于25ml量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，作为对照品储备液a；精密量取对照品储备液a1ml，置于100ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为对照品储备液b；精密量取对照品储备液b 2ml，置于200ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0022]
进一步的，所述步骤二供试品溶液制备的过程为：取替莫唑胺原料药30mg，精密称定，置于20ml顶空瓶中，精密加入乙腈10ml，加盖密封，充分振摇至固体溶解。
[0023]
进一步的，所述步骤三加标供试品溶液制备的过程为：取替莫唑胺原料药30mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入对照品溶液10ml，加盖密封，振摇至固体溶解。
[0024]
本发明的有益效果为：
[0025]
本发明所提供的方法，采用气质联用仪进行分离与检测，设备普及率高，使用成本低廉，从而可以有效地扩大本方法的适用场合及使用范围。
[0026]
本发明所提供的检测方法中，所用试剂均无污染，对照品和供试品的处理过程简单，加乙腈溶解即可，且对照品和供试品的使用量小，可以方便、快速地配制成对照品溶液、供试品溶液以及自身对照溶液。
[0027]
在本发明所提供的色谱条件下，杂质与主成分之间分离度良好，系统稳定性、重复性良好，准确度高，出峰时间快，分析时间短，节约实验成本。
[0028]
本发明所提供的方法，可快速、有效、简便对替莫唑胺中杂质量进行测定，既可以用于对药品成分进行评价或评估，避免存在安全隐患，又可以为该原料药的质量安全提供可靠的数据监测。
[0029]
利用试验对本发明所提供的检测方法进行了验证，结果表明，本方法的专属性强、精密度好，准确度高，能快速地测定替莫唑胺原料药中异氰酸甲酯的量。
附图说明
[0030]
图1为实施例1所得的谱图；
[0031]
图2为实施例2所得的谱图；
[0032]
图3为实施例3所得的谱图；
[0033]
由于篇幅有限，方法验证部分的谱图没有在说明书中记载。
具体实施方式
[0034]
仪器设备、试剂以及试药的来源
[0035]
1、仪器设备
[0036][0037]
2、试剂与试药
[0038][0039]
实施例1-3
[0040]
a)色谱条件：
[0041]
色谱柱：vf-624ms(以6％氰丙基苯94％二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱，60m
×
0.25mm
×
1.4μm)
[0042]
载气：高纯氦气(≥99.9％)；
[0043]
载气流速：1.0ml/min；
[0044]
分流比：5:1；
[0045]
升温程序：以40℃为初始柱温，保持4分钟，以30℃/min的速率升至240℃。
[0046]
b)质谱条件：
[0047]
接口温度：250℃；
[0048]
离子源：ei源；
[0049]
离子源温度：230℃；
[0050]
溶剂延迟时间：4.5min；
[0051]
采集时间：5.00～7.26min
[0052]
特征离子扫描模式(sim)：mic特征离子为57,56，其中57为定量离子。
[0053]
c)顶空条件：
[0054]
恒温炉温度：40℃；
[0055]
样品流路温度：80℃；
[0056]
传输线温度：65℃；
[0057]
样品瓶加压用气压：30kpa；
[0058]
平衡时间：15min；
[0059]
循环时间：25min。
[0060]
对照品溶液：精密量取异氰酸甲酯(mic)20μl，置25ml量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，作为对照品储备液a；精密量取对照品储备液a1ml，置100ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为对照品储备液b；精密量取对照品储备液b 2ml，置200ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0061]
供试品溶液：取替莫唑胺原料药(批号：20180606)约30mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入乙腈10ml，加盖密封，充分振摇至固体溶解。
[0062]
加标供试品溶液：取替莫唑胺原料药(批号：20180606)约30mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入对照品溶液10ml，加盖密封，充分振摇至固体溶解。
[0063]
取不同批次供试品溶液和加标供试品溶液进样分析，所得谱图见图1至图3，计算mic的含量。结果见下表。
[0064]
表1，样品检测实验结果
[0065][0066][0067]
实验结果表明，三个批次样品中均未检出mic。
[0068]
分析方法验证
[0069]
1、仪器精密度
[0070]
精密量取异氰酸甲酯(mic)20μl，置25ml量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，作为对照品储备液a；精密量取对照品储备液a1ml，置100ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为对照品储备液b；精密量取对照品储备液b 2ml，置200ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0071]
取对照品溶液连续进样6次，计算峰面积、保留时间的rsd。结果见下表：
[0072]
表2，仪器精密度实验结果
[0073][0074]
实验结果表明，仪器精密度良好。
[0075]
2、专属性
[0076]
空白溶剂：精密量取乙腈10ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封。
[0077]
对照品溶液：精密量取异氰酸甲酯(mic)20μl，置25ml量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，作为对照品储备液a；精密量取对照品储备液a1ml，置100ml量瓶中，用乙腈定容至刻
度，作为对照品储备液b；精密量取对照品储备液b 2ml，置200ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0078]
供试品溶液：取替莫唑胺原料药(批号：20180606)约30mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入乙腈10ml，加盖密封，充分振摇至固体溶解。
[0079]
加标供试品溶液：取替莫唑胺原料药(批号：20180606)约30mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入对照品溶液10ml，加盖密封，充分振摇至固体溶解。
[0080]
取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液和加标供试品溶液进样，看空白溶剂和供试品溶液对mic的测定是否有干扰。结果见下表。
[0081]
表3，专属性实验结果
[0082]
名称mic对照品溶液中mic保留时间(min)6.888加标供试品溶液中mic保留时间(min)6.881
[0083]
实验结果表明，空白溶剂和供试品溶液对mic的测定无干扰，该方法的专属性良好。
[0084]
3、检测限
[0085]
精密量取异氰酸甲酯(mic)20μl，置25ml量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，作为对照品储备液a；精密量取对照品储备液a1ml，置100ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为对照品储备液b；精密量取对照品储备液b 5ml，置50ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，作为对照品储备液c。
[0086]
精密量取对照品储备液c1.5ml，置50ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为检测线溶液。
[0087]
取检测限溶液连续进样3次，计算s/n，s/n的值不小于3。结果见下表。
[0088]
表4，检测限实验结果
[0089][0090]
4、耐用性
[0091]
空白溶剂：精密量取乙腈10ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封。
[0092]
对照品溶液：精密量取异氰酸甲酯(mic)20μl，置25ml量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，作为对照品储备液a；精密量取对照品储备液a1ml，置100ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为对照品储备液b；精密量取对照品储备液b 2ml，置200ml量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0093]
供试品溶液：取替莫唑胺原料药(批号：20180606)约30mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入乙腈10ml，加盖密封，充分振摇至固体溶解。
[0094]
加标供试品溶液：取替莫唑胺原料药(批号：20180606)约30mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入对照品溶液10ml，加盖密封，充分振摇至固体溶解。
[0095]
按下列条件改变方法，取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液进样，记录峰面积，计算mic含量的rsd。
[0096]
色谱条件变动参数
[0097][0098]
表5，加标供试品溶液耐用性实验结果
[0099]
条件mic含量(％)原条件0.0029流速0.9ml/min0.0024流速1.1ml/min0.0025升温速率29℃/min0.0027升温速率31℃/min0.0025平衡温度39℃0.0027平衡温度41℃0.0026平衡时间13min0.0026平衡时间17min0.0025rsd(％)5.60
[0100]
实验结果表明，在流速(1.0
±
0.1)ml/min、升温速率(30
±
1)℃/min、平衡温度(39
±
1)℃、平衡时间(13
±
2)min范围内变动时，加标供试品中mic的含量rsd值为5.60％，耐用性良好。